何兴俐
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：四川大学华西口腔医学院口腔医学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组人HMGN2在大肠杆菌中表达及其体外抗乙型肝炎病毒活性研究
- 2011年
- 目的制备重组人高迁移率非组蛋白N2蛋白（HMGN2）,研究重组HMGN2的抗乙型肝炎病毒（HBV）活性。方法通过RT-PCR分离纯化人HMGN2基因,并将其构建到原核表达质粒pGEX-4T-1中,经IPTG诱导表达。产物经GST蛋白纯化系统进行纯化,用SDS-PAGE及Western blot分析鉴定。采用MTT法检测重组HMGN2蛋白对稳定转染复制型HBV重组质粒的肝癌细胞株HepG2.2.15细胞的细胞毒性;不同浓度HMGN2蛋白作用于HepG2.2.15细胞,分别在第3 d和6 d收集细胞培养上清液,ELISA检测上清中HBV表面抗原（HBsAg）及e抗原（HBeAg）,采用实时荧光定量PCR法检测上清液HBV DNA的含量。结果成功构建了HMGN2蛋白原核表达载体pGEX-HMGN2,并分离提纯了原核表达的HMGN2蛋白。Western blot结果显示,该蛋白能被抗HMGN2抗体识别。在检测的1~100μg/mL范围内,HMGN2蛋白对HepG2.2.15细胞的无细胞毒性;HMGN2蛋白在1~5μg/mL水平即可抑制HBeAg和HBsAg的表达,可降低HBV DNA拷贝数。结论成功构建HMGN2原核表达载体,并分离提纯了纯度较高的HMGN2蛋白;重组的HMGN2蛋白在体外具有较强的抗HBV活性。
- 何兴俐张永红金淑慧冯云
- 关键词：抗HBV活性
