万永奇
- 作品数：42 被引量：129H指数：6
- 供职机构：湖南师范大学生命科学学院心脏发育研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生政治法律农业科学更多>>
- 外来民工求医现况调查被引量：1
- 2006年
- 万永奇
- 关键词：外来民工孕产妇管理求医暂住人口儿童计划免疫就医问题
- 基层职业卫生监督管理现状与对策被引量：4
- 2003年
- 对本县《职业病防治法》贯彻实施以来,职业卫生监督管理的现状进行剖析,找出问题存在的原因,探讨基层职业卫生监督管理方法。
- 王文君万永奇
- 关键词：职业卫生卫生监督
- CXXC5多克隆抗体的制备及表达研究被引量：1
- 2011年
- CXXC5基因是从人类胚胎心脏的cDNA文库中克隆出来的一个人类锌指基因,包含zf-CXXC5结构域,该基因编码322个氨基酸,在物种进化上高度保守。为了进一步研究该基因的功能,需要获得CXXC5蛋白并制备其抗体.通过PCR扩增方法扩增得到了CXXC5部分编码区序列,然后将其连接到PGEX-4T-1上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,再通过自身诱导法诱导表达重组质粒的融合蛋白.通过割胶回收纯化融合蛋白。免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,Western blot检测抗体活性。结果表明,实验获得了高质量的多克隆抗体。
- 王西君廖鹏王跃群邓云莫小阳袁婺洲万永奇吴秀山李永青
- 关键词：融合蛋白多克隆抗体
- 人类锌指蛋白ZNF382对肌生成的调控作用被引量：1
- 2009年
- 人类基因组中有大量哺乳类特有的KRAB锌指基因,这些基因的功能大多尚不清楚,ZNF382就是其中一个。本文研究了人类锌指蛋白ZNF382对肌生成的调控作用。人类ZNF382基因在肌肉组织中高表达,ZNF382的mRNA水平在C2C12细胞的肌生成过程中上调,ZNF382调节肌肉特异性基因的表达,在NIH3T3细胞中,ZNF382与E-box蛋白E12和成肌调节因子MyoD共转增强肌肉肌酸激酶MCK启动子的活性;ZNF382的启动子预测分析也发现ZNF382的启动子上含有MyoD和血清反应因子SRF的结合位点,这些结果提示人类ZNF382蛋白在肌生成中起着重要的作用。
- 廖鹏王瑛白彦袁婺洲李永青朱传炳邓云莫小阳万永奇王跃群吴秀山
- 关键词：C2C12
- SDHB蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备被引量：1
- 2009年
- SDHB（succinate dehydrogenase complex，subunit B）基因可能介导呼吸链生物功能和调控细胞生长。采用PCR技术扩增出SDHB基因，并将其连接到pGEX-4T-1原核表达载体中，经酶切及测序鉴定后，转化BL21细菌，并用IPTG诱导表达融合蛋白，谷胱甘肽琼脂糖珠亲和纯化，将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，并用Western blot检测抗体。获得了SDHB原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗SDHB多克隆抗体，为SDHB进一步的功能研究奠定了基础。
- 雷翠华李芳万永奇莫小阳邓云吴秀山王跃群
- 关键词：SDHB融合蛋白多克隆抗体
- 果蝇nulp1特异性多克隆抗体制备及检测被引量：6
- 2011年
- 为了利用果蝇模型研究nulp1蛋白在早期心脏发育中的功能,采用PCR技术扩增出果蝇nulp1基因的部分编码区并插入到pET28a表达载体中.之后将重组质粒转入大肠杆菌(E.coli)Rosetta(DE3);通过IPTG诱导表达His-nulp1融合蛋白,该融合蛋白采用Ni2+金属螯合层析纯化后,免疫新西兰兔制备了多克隆抗体,利用west-ern blot对抗体进行分析.结果表明获得了高效价的特异性兔抗f-nulp1多克隆抗体.这为进一步研究果蝇心脏发育的分子机制创造了条件.
- 龚琳王跃群袁婺洲莫小阳万永奇江志钢吴秀山李永青
- 关键词：果蝇原核表达多克隆抗体
- 果蝇血液标记基因srp原核表达质粒构建及多克隆抗体制备被引量：2
- 2011年
- 果蝇基因srp是血液发育的早期标记基因,为了研究果蝇这一模式动物中血液发育的详尽过程,通过提取野生型成体果蝇的总RNA,反转录获得其cDNA文库,设计引物克隆出srp基因,将所得片段插入原核表达载体pET28a中,经酶切和序列鉴定,成功构建重组质粒,并通过IPTG诱导表达出His-srp融合蛋白,经Ni-IDA凝胶柱纯化后,免疫新西兰大白兔制备srp多克隆抗体,为血液发育研究奠定了基础.
- 鲁建鑫雷孝锋李帆江志刚吴秀山万永奇
- 关键词：果蝇SRP原核表达多克隆抗体
- Yippee转基因果蝇品系的建立及基因功能的初步研究被引量：4
- 2009年
- Yippee基因家族在真核生物中编码高度保守的锌指结合蛋白,其功能未知.利用RT-PCR(reversetranscription-polymerase chain reaction)的方法扩增出果蝇Yippee基因CDS(coding sequence),并构建了pUAS-Yippee-IRES-GFP绿色荧光过表达质粒.通过果蝇胚胎显微注射和mini-white标记基因筛选,获得了Yippee转基因果蝇品系.将该转基因品系与Hand-GAL4杂交、Yippee基因干扰品系(39898)与Hand-GFP品系杂交,在荧光显微镜下观察杂交后代幼虫的心管和淋巴腺,结果未发现心管和淋巴腺有畸形变化.果蝇Yippee基因是否与果蝇心管和淋巴腺的发育有关尚有待深入研究.
- 彭忠禄万永奇罗桐秀邓云莫小阳李永青袁婺洲吴秀山
- 关键词：心脏发育
- 斑马鱼整体原位杂交的技术改良被引量：7
- 2010年
- 斑马鱼整体原位杂交技术广泛应用于基因表达谱、基因间相互关系和突变体筛选等方面,是研究斑马鱼发育相关基因功能的重要技术。本文从杂交探针的制备、浓度的选择和洗脱以及胚胎的脱色、蛋白酶K消化、底物显色等方面进行了摸索、改进及简化,获得了背景低、着色清晰、特异性高的实验结果,预示了简单实用、成本低廉的斑马鱼整胚原位杂交技术平台的成功建立。
- 樊竑冶彭忠禄谢华平莫小阳王跃群邓云万永奇李永青吴秀山
- 关键词：整体原位杂交斑马鱼胚胎
- 心脏发育候选基因AHNAKβ的克隆和表达研究
- 2009年
- 心脏发育过程是一个错综复杂的过程,由一系列的基因参与完成。虽然目前已经鉴定出很多与心脏发育相关的基因,但是仍有很多心脏发育相关基因有待鉴定。作者从小鼠心脏cDNA文库中分离并鉴定了一个心脏发育候选基因AHNAKβ。AHNAKβ位于11q12.2,长1 064 bp,由6个外显子和5个内含子组成,其中开放阅读框(ORF)长450 bp(258～710 nt),编码含有149个氨基酸,蛋白质大小约为16.0 kD。我们构建了原核细胞表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化了GST-AHNAKβ融合蛋白,然后制备了该蛋白的兔免疫血清。利用该抗体进行了小鼠成体组织Western blot以分析该基因的蛋白表达模式。研究结果表明AHNAKβ在小鼠成体子宫、小肠等多种组织表达,在心脏中表达较高,提示它可能在心脏组织中具有某种重要作用。
- 李宁莫小阳邓云万永奇吴秀山李永青
- 关键词：心脏发育克隆
