韩炯
- 作品数：20 被引量：153H指数：8
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金军队“十五”科研基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 噬菌体展示的小肽序列差异对肿瘤坏死因子-α诱导的细胞毒作用的影响被引量：4
- 2001年
- 目的 从噬菌体随机多肽库中筛选出与肿瘤坏死因子 α(TNF α)特异结合 ,并能阻断其生物活性的小肽 ,为建立一种新型的抗TNF α多肽药物奠定基础。方法 用突变体TNF α和天然型TNF α分别作为靶蛋白 ,用噬菌体随机多肽库进行多次淘筛 ,经序列测定及体外酶联免疫吸附法(ELISA)实验选出候选多肽 ,进行抗TNF α诱导的L92 9细胞毒作用。结果 筛选到的二个序列不同但有一定相关性的候选小肽 ,其中由天然型TNF α作为靶蛋白筛选出的 12肽具有抗TNF α诱导的L92 9细胞毒作用。结论 这些序列可以做为合成小肽TNF
- 刘新平张晓光韩炯李福洋王吉村药立波
- 关键词：肿瘤坏死因子肽库
- 结合酪氨酸蛋白激酶受体EphB2的功能短肽的筛选
- 2000年
- 目的筛选能结合酪氨酸蛋白激酶受体 Eph B2的功能短肽。方法 PCR扩增 Eph B2的配体结合区 ,定向克隆到融合表达质粒载体 p RSET A中 ,阳性克隆经 IPTG诱导表达融合蛋白 ,并利用 Ni- NTA金属螯合亲和层析在变性条件下对表达的蛋白进行纯化 ,以此纯化蛋白为靶 ,将其包被于 EL ISA板上 ,进行 3轮亲和筛选。结果电泳分析表明 :表达的融合蛋白主要以包涵体的形式存在 ,纯化蛋白质的纯度大于 95 %。从噬菌体随机 12肽库中筛选到 13个噬菌体阳性克隆。结论获得了具有结合 Eph
- 张晓光韩炯韩景田刘新平药立波聂晓燕苏成芝
- 关键词：EPHB2配体噬菌体表面呈现
- 肿瘤细胞系抗脱落凋亡特性的检测
- 目的:恶性肿瘤转移是肿瘤病人死亡的重要原因,阐明其机理一直是十分重要的研究领域.不具备转移特性的实体瘤细胞和正常上皮细胞进入血流后会因失去基质的支待而发生凋亡,称为脱落凋亡(anoikis).其意义在于防止这些脱落的细胞...
- 韩炯李莹药立波余强
- 文献传递
- 人胃癌细胞株抗脱落凋亡特性的分析被引量：11
- 2003年
- 目的 :研究胃癌细胞HGC2 7,BGC82 3 ,MGC80 3 ,SGC790 1抗脱落凋亡的特性 .为研究肿瘤细胞抗脱落凋亡的机制奠定基础 .方法 :应用软琼脂集落形成实验 ,DNAladder检测 ,流式细胞术等技术观察胃癌细胞脱落培养后细胞生长状况的改变 .结果 :对照组细胞MDCK(狗的正常肾脏上皮细胞系 )在软琼脂中不生长 ,没有形成细胞集落 ;悬浮培养 15h后 ,可见有细胞凋亡特征性的DNAladder出现 ;流式细胞仪检测 ,悬浮培养 2 4 ,4 8h可见有凋亡峰出现 .而HGC2 7等 4种胃癌细胞系在软琼脂中均形成大小不等的细胞集落 ,脱落培养15h后 ,没有细胞凋亡特征性的DNAladder出现 ,流式细胞仪检测 ,与贴壁培养的对照组相比细胞周期没有显著性差异 ,也没有凋亡峰的出现 .结论 :MDCK细胞属于锚着依赖性细胞 ,可出现脱落凋亡 .胃癌细胞HGC2 7,BGC82 3 ,MGC80 3 ,SGC790
- 李莹韩炯王立峰林树新药立波俞强刘新平
- 关键词：胃肿瘤肿瘤细胞
- 水飞蓟素对乳腺癌细胞系的作用及其机制研究被引量：12
- 2003年
- 目的 研究水飞蓟素在体外对不同乳腺癌细胞系的作用 ,并进一步探讨其作用机制。方法 MTT实验测定水飞蓟素对乳腺癌细胞系 MCF- 7和 SK- BR- 3的半数抑制浓度 ( IC50 ) ;软琼脂克隆形成试验检测加药后两种细胞在软琼脂内的增殖能力。在此基础上 ,用 Her- 2抑制剂 AG82 5进行干预 ,对水飞蓟素的作用机制进行初步探讨。结果 水飞蓟素对两种乳腺癌细胞有不同程度的抑制作用 ,其中对 MCF- 7细胞的作用较强 ,IC50 ≤ 0 .0 2 %,而对SK- BR- 3的作用较弱。 Her- 2抑制剂 AG82 5可增加 SK- BR- 3细胞对药物的敏感性 ,抑制了水飞蓟素作用后该细胞在软琼脂中集落的形成。结论 水飞蓟素在体外对 MCF- 7细胞具有明显的抑制作用 ,而 AG82 5可增强 SK- BR-3细胞对药物的敏感性。因此 ,SK- BR- 3细胞中 Her- 2的高表达可能是该细胞对水飞蓟素敏感性差的原因 ,而水飞蓟素也可能通过 Her- 2调节某个或某几个下游分子起作用。
- 韩月恒韩炯李莹刘新平药立波
- 关键词：水飞蓟素乳腺癌HER-2
- 蛋白酪氨酸磷酸化水平与乳腺癌细胞株抗失巢凋亡特性的关系被引量：3
- 2004年
- 背景与目的:正常上皮或内皮细胞脱离与细胞外基质的联系时会发生失巢凋亡(anoikis),而大多数来源于上皮或内皮的肿瘤细胞则丧失了这种特性,多数相关研究表明肿瘤细胞的抗失巢凋失特性与细胞信号转导的异常密切相关。本研究初步探讨信号分子的蛋白酪氨酸磷酸化水平与肿瘤细胞抗失巢凋亡特性之间的关系。方法:用琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯状带,用流式细胞术以及软琼脂集落形成实验等方法观察正常狗肾脏上皮细胞株MDCK(Madin-Darbycaninekidney)和3种乳腺癌细胞株MCF-7、Bcap-37以及MDA-MB-231的抗失巢凋亡特性。同时分析广谱蛋白酪氨酸激酶抑制剂染料木黄酮(genistein)对肿瘤细胞这种特性的抑制作用,并通过Westernblot检测3种乳腺癌细胞在悬浮培养与贴壁培养时总体蛋白酪氨酸磷酸化水平的差异。结果:3种乳腺癌细胞均表现出明显的抗失巢凋亡特性,进一步的研究证明这种特性可被染料木黄酮所抑制。Westernblot的结果显示与贴壁培养时相比,在悬浮培养的MDCK细胞中所有的蛋白酪氨酸的磷酸化水平均呈现下降趋势;而在肿瘤细胞中,尽管大多数蛋白质酪氨酸的磷酸化水平下降,但是可见有酪氨酸磷酸化水平异常增高的蛋白条带(幅度3.5～6.5倍)。结论:3种乳腺癌细胞均具有不同程度的抗失巢凋亡特性,而信号蛋白酪氨酸的异常?
- 韩炯刘新平药立波俞强
- 关键词：乳腺癌失巢凋亡癌细胞株
- 酪氨酸激酶EphB2受体N端球状结构域的表达及纯化
- 2000年
- 根据酪氨酸激酶EphB2受体的碱基序列 ,用PCR方法扩增其结合配体的关键结构域N端球状区 ,定向克隆到融合表达质粒载体rRSETA中 ,转化大肠杆菌JM10 9(DE3)。阳性克隆经IPTG诱导 ,由T7启动子调控表达了氨基端带 6个连续组氨酸残基的融合蛋白。电泳分析表明 ,表达的融合蛋白主要以包含体的形式存在 ,约占细菌总蛋白的 14%。Western印迹确证 ,利用Ni NTA金属螯合亲和色谱法在变性条件下对表达的蛋白进行纯化 ,得到纯度 95
- 张晓光韩炯董巨莹刘新平药立波苏成芝
- 关键词：原核表达
- 白藜芦醇诱导胃癌细胞脱落凋亡被引量：7
- 2004年
- 目的 研究白藜芦醇诱导胃癌细胞脱落凋亡的作用。方法 采用细胞形态学观察、Annxin-V和PI细胞染色和流式细胞仪检测,观察白藜芦醇(0.1、0.2、0.5 mmol/L)对脱落培养胃癌细胞B(3C823、SGC7901和HGC27的生长状态、细胞周期的影响及诱导脱落凋亡的作用。结果 倒置显微镜下发现脱落培养的胃癌细胞聚集成团生长,0.1 mmol/L白藜芦醇作用细胞后可抑制抗脱落凋亡的胃癌细胞聚集成团;流式细胞仪检测和Annxin-V和PI细胞染色表明0.5 mmol/L白藜芦醇可分别阻滞脱落培养的BG(2823、SGC7901和HGC27细胞于G0/G1、S、G2/M期,并可诱导这3株胃癌细胞发生脱落凋亡,其中自藜芦醇诱导HGC27细胞脱落凋亡比例达19.3％,远高于其他两株胃癌细胞。结论 白藜芦醇可诱导胃癌细胞发生脱落凋亡。
- 李莹药立波王立峰韩炯韩月恒刘新平林树新俞强
- 关键词：白藜芦醇胃癌细胞
- 乙型肝炎病毒PreS基因的克隆表达及亲和层析纯化被引量：10
- 2001年
- 目的 获取乙型肝炎病毒前 S区基因 (HBVpre S) ,序列测定正确后进行融合表达 ,为今后研究其机制及应用创造条件 .方法 利用乙型肝炎病毒基因组为模板体外扩增HBVPre S基因后进行基因克隆 .目的基因经测序正确后克隆入融合表达载体 p RSET- C中 ,转化大肠杆菌 JM10 9(DE3) .目的基因经 IPTG诱导 ,由 T7启动子调控表达了氨基端带 6个连续组氨酸残基的 HBV- Pre S蛋白 ,在变性条件下对目的蛋白进行纯化 .结果 成功地扩增到 pre S区全长基因 ,得到融合 6个 His的 HBV- Pre S蛋白纯度大于 90 % .结论 构建了乙型肝炎病毒前 S区基因的重组表达载体 ,获得了稳定表达的工程菌 .
- 杨敏刘新平韩炯张晓光药立波苏成芝陈常庆
- 关键词：乙型肝炎病毒基因克隆基因表达亲和层析纯化
- EphB2受体N端结构域蛋白的纯化及其对胃癌细胞蛋白酪氨酸磷酸化的作用被引量：1
- 2001年
- EphB2受体在细胞生长、分化和信号转导过程中具有重要作用,为深入研究其在胃癌的信号转导中的作用及功能,检测了EphB2受体刺激胃癌细胞后的酪氨酸磷酸化的变化。利用Ni-NTA金属螯合亲和层析法将在E.coli中融合表达的重组蛋白EphB2受体的N端球状区进行纯化,并经Western印迹进行确证和ELISA方法检测该蛋白活性,得到纯度95％以上的融合蛋白,并有结合其天然配体的活性,EphB2受体诱导可以使胃癌细胞发生明显的蛋白质酪氨酸磷酸化的改变,即通过反向刺激其ephrinB配体引起了胃癌细胞信号转导通路中一些信号分子酪氨酸磷酸化的改变。
- 张晓光药立波俞强刘新平季少平韩炯苏成芝
- 关键词：胃癌细胞信号转导酪氨酸激酶N端结构域
