邹春林 作品数:38 被引量:117 H指数:7 供职机构: 广西医科大学 更多>> 发文基金: 国家重点基础研究发展计划 国家自然科学基金 广西壮族自治区自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
胚胎干细胞“五步法”体外诱导成为神经细胞的实验观察 被引量:7 2004年 目的:采用“五步法”将鼠胚胎干细胞(embryonicstemcell,ES)诱导成为神经元和胶质细胞。方法:首先将ES细胞接种到铺有明胶的培养瓶里,在无滋养层细胞的情况下生长3d,然后将细胞悬浮培养4d成为胚胎体(,胚胎体经过无血清培养基培养6d,富集nestin阳性细胞,在有丝分裂原bFGF作用下扩增6d,最后经过烟酰胺诱导分化6d,共计经过5个步骤。结果:诱导出多量表达Tuj-1的不成熟神经元(约占分化后细胞数量的80%~90%)和表达神经胶质纤维酸性蛋白的星形胶质细胞(5%~10%),还有少量表达微管相关蛋白Ⅱ的成熟神经元(5%~10%)。结论:“五步法”诱导使胚胎干细胞在分化过程中处于不同的阶段,最终诱导出大量不成熟的神经元,少量星型胶质细胞和成熟神经元。为利用不同成熟度的分化细胞移植治疗神经系统疾病提供了充足的细胞来源。 关云谦 陈彪 邹春林 张愚关键词:胚胎干细胞 体外诱导 神经细胞 神经元 神经系统疾病 对比不同年龄段食蟹猴骨髓间充质干细胞的生物学特征 被引量:2 2010年 骨髓间充质干细胞因其广泛的临床应用前景而备受关注.非人灵长类动物在基因、生理和代谢等方面与人类相似,在制作疾病模型和疾病治疗研究等方面具有无可比拟的优势.因此,来源于非人灵长类的骨髓间充质干细胞是细胞移植和组织工程研究中的重要工具.本实验对比研究了不同年龄段食蟹猴骨髓间充质干细胞的生物学特征.结果发现,与中年食蟹猴骨髓间充质干细胞比较,青少年食蟹猴骨髓间充质干细胞具有明显高的增殖和分化潜能.长期体外培养的食蟹猴骨髓间充质干细胞能发生自发转变,转变后的细胞具有明显不同于骨髓间充质干细胞的形态特征.端粒酶活性检测显示,各年龄组不同代数的骨髓间充质干细胞端粒酶活性没有明显差别,但与骨髓间充质干细胞比较,转变后的细胞端粒酶活性显著增高.另一方面,随着体外培养时间延长,染色体不稳定性发生频率相应增加.这些结果提示在使用间充质干细胞进行实验或临床研究前,必须全面考虑各种因素,包括供体的年龄等,并且完善各种检测. 任振华 王佳茵 邹春林 关云谦 张愚关键词:食蟹猴 间充质干细胞 增殖 分化 前列腺癌诊断/预后和耐药分子标志物的筛选及其临床意义 被引量:2 2020年 目的:基于已发表的芯片数据通过生物信息学方法筛选差异表达基因,以发现前列腺癌诊断/预后和耐药相关分子标志物。方法:筛选GEO数据库中已发表的前列腺癌m RNA芯片数据GSE6956和前列腺癌细胞多烯紫杉醇耐药m RNA芯片数据GSE33455进行差异表达分析;通过生物学功能注释、基因通路富集分析、蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction,PPI)分析等生物信息学方法发现和识别与差异表达基因相关的生物学功能和信号通路;比对TCGA数据库,验证差异表达基因在前列腺癌组织及癌旁组织中的表达,并通过Kaplan-Meier分析差异表达基因对前列腺癌患者生存率的影响;用q PCR方法验证差异表达基因在前列腺癌细胞株PC3及多烯紫杉醇耐药细胞PC3-DTX中的表达情况。结果:共筛选出227个在前列腺癌和前列腺癌多烯紫杉醇耐药细胞芯片数据中共同差异表达基因。差异表达基因主要富集到了癌症相关通路(Lysosome、Sphingolipid、Fox O、Acute myeloid leukemia),并主要参与细胞黏附、自噬和胞内蛋白转运等生物学过程。构建PPI网络选取18个连接度最高的基因作为Hub基因。Hub基因和共同差异表达基因中,上调基因CITED2、LRP12和RPL17-C18orf32与前列腺癌患者的不良预后显著相关。q PCR验证显示CITED2在多烯紫杉醇耐药细胞PC3-DTX中高表达。结论:通过生物信息学方法筛选出在前列腺癌组织和耐药细胞中共同差异表达,且与前列腺癌患者的不良预后密切相关的基因,为前列腺癌诊断/预后和耐药分子标志物的研究提供了新的思路。 王丽惠 邹春林关键词:前列腺癌 化疗耐药 生物信息学分析 链脲佐菌素诱导的食蟹猴糖尿病模型中胰腺巢蛋白阳性细胞的变化 2009年 目的探讨链脲佐菌素(STZ)诱导的食蟹猴糖尿病模型中胰腺巢蛋白(nestin)阳性细胞分布及生物学特性的变化。方法 1型糖尿病模型食蟹猴5只,长期血糖监测和静脉葡萄糖耐量实验评价该模型的可靠性及稳定性,细胞培养、免疫荧光染色对糖尿病猴和正常猴的胰腺组织进行分析。结果 (1)nestin阳性细胞在正常猴胰腺组织中主要分布于胰腺导管,少量分布于胰岛周边;而在糖尿病猴则主要分布于残存的胰岛中。(2)糖尿病猴胰岛内的大部分nestln阳性细胞同时表达胰升血糖素。结论 STZ在选择性地破坏胰岛β细胞的同时,可引起胰腺nestin阳性细胞的分布及表型的变化。 邹春林 张颖 王淑艳 吴迪 关云谦 任振华 张愚关键词:糖尿病 食蟹猴 胰腺 巢蛋白 人胚胎纹状体区神经干细胞体外生物学特性 被引量:6 2006年 目的探讨人胚胎纹状体区神经干细胞在体外的生物学特性。方法从16~20周人胚胎纹状体区分离培养神经干细胞,在体外进行传代、分化,应用免疫组织化学荧光染色等方法,对此区神经干细胞在体外增殖和分化等情况进行研究。结果纹状体区神经干细胞在体外原代培养扩增1月内分裂增殖速度快,在含有EGF和bFGF的培养基中生长最为良好,平均倍增时间为3~4d。分化培养后可以形成各种神经细胞,在原代培养后2周分化情况好,分化为神经元比例高,约占50%左右,在原代培养8周以后分化为神经元的比例下降,约占20%左右。结论人胚胎纹状体区的神经干细胞在体外有较强的自我更新和增殖能力,并表达了干细胞的原始特征,在体外传代过程中,增殖速度随着时间不断下降,其分化为各种神经细胞的能力也不同。培养基中的有丝分裂原对于神经干细胞的增殖和分裂的影响不同。神经球并非均质的,内部仅有部分细胞在分裂增殖。 董恺 邹春林 孙鹏 张愚关键词:纹状体 神经干细胞 胚胎 免疫组织化学 可支持人胚胎干细胞生长的人源饲养层细胞的制备方法 本发明提供了一种可支持人源饲养层细胞可支持人胚胎干细胞生长的人源饲养层细胞的制备方法,包括以下步骤:S1、将人骨髓间充质干细胞置于培养基中进行传代培养;S2、将含有潮霉素抗性基因的逆转录病毒颗粒感染S1中传代培养的人骨髓... 邹春林 滕夏虹 王丽惠 许倩倩 孙晓婷 卢奕 张健成人胰岛来源的Nestin阳性前体细胞的体外培养及其诱导分化 2006年 目的探讨成人胰岛来源的Nestin阳性前体细胞的体外培养、扩增及诱导分化为具有分泌胰岛素功能的B细胞的条件。方法首先通过胶原酶消化的方法从成人胰腺组织中分离纯化出胰岛,在含有bFGF及EGF的增殖培养基中大量扩增获得Nestin阳性前体细胞,最后在含有HGF、activin-A、exendin-4等生长因子的培养基中诱导该前体细胞。结果来源于成人胰岛的Nestin阳性前体细胞在体外可以大量扩增并表达ABCG2,而胰岛素不表达。在分化培养基中能分化为对高糖刺激反应的胰岛B细胞,胰岛素呈现阳性。结论来源于成人胰岛的Nestin阳性前体细胞能够为今后糖尿病的细胞移植治疗提供大量有功能的B细胞,能够解决目前胰岛移植中供体来源不足的问题。 徐秀红 郭宏波 贾宝祥 杜林栋 邹春林关键词:胰岛 前体细胞 NESTIN 食蟹猴胚胎干细胞向间充质前体细胞诱导分化及鉴定 被引量:1 2011年 间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)可以诱导分化成脂肪、软骨、骨骼和骨骼肌细胞,并可作为骨骼、软骨或肌肉移植中的再生干细胞,广泛应用于细胞治疗和组织工程。胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)具有体外培养无限增殖和多向分化的特性,能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型。该研究通过无血清条件下诱导食蟹猴ESCs形成类胚体(embryoid bodies,EBs),然后在血清条件下贴壁分化EBs成间充质前体细胞(mesenchymal precursor cells,MPCs),再经过长期体外培养,纯化和扩增MPCs。结果显示,纯化后的MPCs具有MSCs生物学特征,并能在体外诱导分化成脂肪细胞和骨细胞。将这些细胞皮下注射给SCID小鼠,并未发现形成肿瘤,提示食蟹猴ESCs来源的MPCs具有一定的安全性。 任振华 王佳茵 朱宛宛 邹春林 张愚关键词:分化 胶质源性神经生长因子在人胚胎神经干细胞中的表达调控 被引量:1 2012年 胶质源性神经生长因子(glial cell derived neurotrophic factor,GDNF)对帕金森病等神经退行性疾病的治疗有广泛的应用前景,而人胚胎神经干细胞已被证实是一种将GDNF安全而有效地携带到受损脑区的良好细胞载体.本研究利用含有GDNF基因的可调控慢病毒载体转染人胚胎神经干细胞,实现了GDNF在人胚胎神经干细胞在体外培养条件下的表达调控.实验中首先利用含有GDNF基因的慢病毒载体成功转染人胚胎神经干细胞,其中GDNF基因受四环素操纵子7(tetracy cline operator7,tetO7)调控,由延长因子1(elongation factor1,EF1-)驱动;转染后的神经干细胞经过潮霉素筛选后同时转入对下游基因起抑制作用的慢病毒载体TTS(tetra-cycline repressorfusi onprotein,TTS),TTS蛋白表达后可与tetO7相互作用抑制GDNF在人神经干细胞中的表达.当加入强力霉素(doxycycline,DOX)后,TTS与tetO7解离,GDNF表达可恢复到未调控前水平.转染GDNF后的人胚胎神经干细胞仍然表达神经干细胞特异性抗原nestin,Sox2;放线菌素D诱导凋亡后,转染GDNF组较正常对照组凋亡细胞比例有显著降低;同时,转染GDNF的神经干细胞分化成神经元的比例有显著提高.利用可调控的慢病毒调控GDNF在人胚胎神经干细胞中的表达为GDNF应用于神经退行性疾病的治疗提供了实验数据. 王淑艳 任萍 关云谦 邹春林 付琳琳 张愚关键词:神经干细胞 胶质源性神经营养因子 慢病毒载体 四环素调控 多模式追踪食蟹猴骨髓间充质干细胞 2012年 近年来,在细胞治疗和再生医学领域,自体或异体细胞移植治疗疾病正在成为现实.骨髓间充质干细胞具有分化成多种细胞的潜能,已被广泛用于各种疾病的研究和治疗.活体追踪移植细胞,检测移植细胞的生存及功能状态对于评价移植治疗效果至关重要.目前,利用磁共振对比剂超顺磁性氧化铁颗粒(SPIO),活体追踪和监测标记细胞已被广泛用于动物实验研究和一些临床疾病诊断.但MRI信号不能显示移植细胞在体内的生物学特征.本研究中,对食蟹猴骨髓间充质干细胞体外标记Molday ION rhodamine-B^(TM)(MIRB),探讨MIRB标记后cMSCs的细胞生物学特性,以及脑内移植后的活体MRI影像学及组织学追踪.结果表明,MIRB具有生物组织相容性,能高效标记cMSCs,可用于体内多模式追踪移植细胞,为利用MIRB追踪和检测移植细胞,以及干细胞移植治疗机制的研究提供资料. 任振华 王佳茵 邹春林 关云谦 张愚关键词:骨髓间充质干细胞 ION 非人灵长类