许丹
- 作品数：9 被引量：16H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局医学科研项目国家临床重点专科建设项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- TCF7L2影响胰岛素分泌机制的研究
- 目的:探讨TCF7L2影响葡萄糖分泌的机制。转录因子TCF7L2与GPR40基因启动子的相互作用。研究慢病毒介导RNA干扰(RNAi)致TCF7L2基因沉默对胰岛β细胞GPR40表达的影响。方法:(1)采用染色质免疫沉淀...
- 毕健琨任伟郑晓雅许丹
- 慢病毒介导TCF7L2基因RNAi对胰岛βTC6细胞GPR40表达的影响
- 2012年
- 目的研究慢病毒介导RNA干扰(RNAi)致TCF7L2基因沉默对胰岛β细胞GPR40表达的影响。方法构建小鼠TCF7L2基因RNAi慢病毒载体,感染小鼠胰岛βTC6细胞株,进行Real time-PCR及Western blot鉴定干扰效率;检测对照组与干扰组葡萄糖刺激后胰岛素分泌(GSIS)情况;Real time-PCR及Western blot检测TCF7L2稳定下调的小鼠胰岛βTC6细胞中GPR40 mRNA以及蛋白水平。结果成功构建小鼠TCF7L2基因RNAi慢病毒载体,Real time-PCR及Western blot证实小鼠胰岛βTC6细胞中TCF7L2 mRNA以及蛋白水平显著下调,TCF7L2的mRNA表达量较空白组与对照组分别下降72%以及78%(P<0.05);干扰组中葡萄糖刺激的胰岛素分泌较对照组下降29.4%(P<0.05);TCF7L2基因稳定下调后,Real time-PCR及Western blot发现小鼠胰岛βTC6细胞中GPR40 mRNA以及蛋白水平明显下调,GPR40的mRNA表达量较空白组与对照组分别下降78%以及88%(P<0.05)。结论慢病毒介导的TCF7L2基因RNAi能实现TCF7L2基因的沉默,从而使GPR40表达下调。
- 毕健琨任伟郑晓雅许丹
- 关键词：慢病毒TCF7L2GPR40
- 染色质免疫沉淀技术分析HePG2细胞TCF7L2蛋白与IDE基因转录启动子的结合被引量：1
- 2012年
- TCF7L2是一种重要的转录因子,通过Wnt信号途径,调节葡萄糖代谢.胰岛素降解酶(IDE)是细胞水平催化胰岛素降解的最关键的酶,与2型糖尿病(T2DM)高血糖、胰岛素抵抗、高胰岛素血症密切相关.为了检测HePG2细胞内转录因子TCF7L2与IDE基因启动子区的结合情况,采用染色质免疫沉淀技术结合PCR技术检测IDE基因启动子序列.结果表明,在特异性TCF7L2抗体免疫沉淀的DNA片段中扩增出IDE基因启动子序列,因此证实在HePG2细胞内,TCF7L2蛋白可与IDE基因转录启动子的特异区域结合,进而可能参与IDE基因的表达调控.
- 许丹任伟郑晓雅毕健琨
- 染色质免疫沉淀分析胰岛β细胞中TCF7L2与GPR40的结合
- 2012年
- 目的探讨转录因子TCF7L2与GPR40基因启动子的相互作用。方法采用染色质免疫沉淀(CHIP)技术,在胰岛βTC6细胞株中,用TCF7L2特异性抗体沉淀DNA,聚合酶联式反应(PCR)检测GPR40基因5′特异性序列。结果在TCF7L2特异性抗体免疫沉淀的DNA片段中,扩增出GPR40基因5′特异性序列。结论在胰岛βTC6细胞中,转录因子TCF7L2与GPR40基因启动子存在特异的结合区域,TCF7L2可能参与GPR40的表达调控。
- 毕健琨任伟郑晓雅许丹
- 关键词：染色质免疫沉淀
- PCSK1和PCSK2单核苷酸多态性与新诊断2型糖尿病的相关性分析被引量：1
- 2014年
- 目的探讨重庆地区汉族人前蛋白转化酶枯草溶菌素1（PCSK1）的rs3811951和PCSK2的rs2021785位点单核苷酸多态性（SNPs）与新诊断2型糖尿病（T2DM）之间的相关性。方法采用病例-对照法,收集新诊T2DM组（n=227例）与对照组（n=152例）的临床资料及血标本,测定血糖、血脂等生化指标,采用质谱技术对rs3811951和rs2021785位点进行SNPs分型。结果 PCSK2的rs2021785位点次要等位基因频率在T2DM组显著低于对照组（20.04%vs 26.64%,P=0.0335）,次要等位基因A的携带者患T2DM的风险显著降低（OR=0.69,95%CI 0.49~0.97,P=0.0335）。PCSK2基因的rs2021785位点AA基因型频率在T2DM组显著低于对照组（6.6%vs 10.5%,P〈0.05）,rs2021785位点基因型分布与T2DM显著相关（共显性模型中OR=0.627,95%CI 0.41~0.96,P=0.0308）。PCSK1基因rs3811951位点等位基因频率及基因型分布在T2DM组和对照组差异无统计学意义（P〉0.05）。结论重庆地区汉族人群中PCSK2基因rs2021785位点的多态性与T2DM显著相关,而PCSK1基因rs3811951位点多态性与T2DM无显著相关性。
- 郑晓雅任伟龚莉琳张素华刘静婧李素芳李金超许丹毕健琨
- 关键词：多态性单核苷酸
- 前蛋白转化酶1(PC1)与胰岛素原转化的研究进展被引量：2
- 2011年
- 前蛋白转化酶1(Proprotein convertase 1,PC1)是胰岛素原转换为胰岛素的一个重要关键酶,PC1缺陷导致胰岛素原转化障碍、高胰岛素原血症.2型糖尿病(T2DM)患者存在高胰岛素原血症,是原发的β细胞功能受损的表现,是胰岛素原向胰岛素转化过程出现障碍所致.胰岛素原与胰岛素(insulin,INS)的比例失调是T2DM(type 2 diabetes mellitus)的一个重要特点,甚至是T2DM发病的一个独立预测指标.因此,研究PC1与胰岛素原转化、胰岛素原增高的确切机制和意义对2型糖尿病的防治是有肯定意义的.
- 许丹任伟
- 关键词：胰岛素原2型糖尿病
- 转录因子TCF7L2在HePG2细胞IDE表达调控中的作用被引量：2
- 2012年
- 目的 TCF7L2是一种重要的转录因子,与2型糖尿病(T2DM)发生发展密切相关。本研究探讨慢病毒介导的RNA干扰抑制TCF7L2基因表达对人肝癌细胞株HePG2胰岛素降解酶(IDE)基因的影响。方法以人TCF7L2 mRNA编码序列作为干扰靶点,构建TCF7L2特异性短发卡RNA慢病毒表达载体(LV-TCF7L2-shRNA)感染HePG2细胞。应用实时定量PCR及Western blot检测转染后TCF7L2与IDE表达的变化。结果成功构建TCF7L2 shRNA慢病毒载体LV-TCF7L2-shRNA。qPCR及Western blot结果显示干扰组HePG2细胞TCF7L2和IDE mRNA及蛋白的表达水平较空白组及阴性对照组显著降低(P<0.05)。结论 LV-TCF7L2-shRNA载体有效地抑制了IDE的表达,结果证明TCF7L2是IDE表达调控中重要的转录因子,为探讨TCF7L2与IDE在2型糖尿病发病机制中的作用奠定了基础。
- 许丹任伟郑晓雅毕健琨
- 关键词：TCF7L2IDERNA干扰2型糖尿病
- TCF7L2基因rs7903146和rs11196218单核苷酸多态性与新诊断2型糖尿病患者早相胰岛素分泌的相关性分析被引量：10
- 2011年
- 目的探讨重庆地区汉族人群中转录因子7类似物2(TCF7L2)基因rs7903146和rs11196218单核苷酸多态性(SNPs)与新诊断2型糖尿病(T2DM)早相胰岛素分泌的相关性。方法采用病例-对照研究方法,设新诊T2DM组(n=227)和正常对照组(n=152),采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术对rs7903146和rs11196218位点进行SNPs分型。结果新诊T2DM组和正常对照组rs7903146位点风险等位基因频率(MAF)分别为5.73%和4.28%,二者间差异无统计学意义。Logistic回归无论以共显性、显性、或是隐性模式分析,rs7903146和rs11196218位点的SNPs均与T2DM无显著相关性(P>0.05)。Rs7903146位点的SNPs与ΔI30/ΔG30相关(OR=1.012,95%CI 1.000～1.025,P=0.05),T风险等位基因携带者的ΔI30/ΔG30显著高于未携带者(P=0.0385)。结论尚未发现重庆地区汉族人群TCF7L2基因rs7903146和rs11196218位点SNPs与T2DM的相关性,但rs7903146位点的基因多态性可能与早相胰岛素分泌有关。
- 郑晓雅任伟张素华刘静婧李素芳李金超许丹毕健琨
- TCF7L2基因RNA干扰对胰岛素原水平的影响及机制被引量：4
- 2014年
- 目的:研究转录因子7类似物2(transcription factor 7 like 2,TCF7L2)表达下调对胰岛素原水平的影响,进一步探讨TCF7L2通过前蛋白转化酶(proprotein convertase,PC)基因影响胰岛素原水平的机制。方法:在体外培养Beta-TC-6细胞株,通过构建TCF7L2的RNA干扰慢病毒转染细胞,下调TCF7L2的表达,实验分为3组,分别为空白对照组、乱序对照组和TCF7L2干扰组,采用qRT-PCR和Western blot检测TCF7L2和PC基因mRNA及蛋白水平的变化;收集上清液,采用ELISA方法测定基础和葡萄糖刺激状态下胰岛素和胰岛素原水平的变化。结果:慢病毒感染Beta-TC-6细胞48 h后,在荧光显微镜下观察慢病毒感染效率达95%以上,与空白对照组比较,TCF7L2 mRNA的干扰率约为75%(0.25±0.03 vs.0.97±0.11,P=0.000),蛋白质水平的干扰率约为50%(0.29±0.08 vs.0.57±0.09,P=0.008)。与乱序对照组比较,TCF7L2干扰组葡萄糖刺激后胰岛素水平明显降低(7.47±0.21)mU/L vs.(10.53±0.38)mU/L(P=0.000),而胰岛素原水平却明显增加(10.73±0.51)pmol/L vs.(7.81±0.29)pmol/L(P=0.001),且PC1和PC2的mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:TCF7L2基因的RNA干扰可能通过降低PC基因的表达,进而减少该酶对胰岛素原的加工,从而影响胰岛素原的水平。
- 郑晓雅任伟张素华汤为学许丹毕健琨
- 关键词：胰岛素原前蛋白转化酶
