苏毅
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
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- pEGFP-N1/hIL-1ra重组真核表达载体的构建及其在人牙龈成纤维细胞中的瞬时表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建重组人白细胞介素1受体拮抗剂(rhIL-1ra)基因真核表达载体pEGFP-N1/hIL-1ra,瞬时转染人牙龈成纤维细胞并检测其表达,为牙周炎症的基因治疗提供实验基础。方法:TRIzol法提取人乳腺癌组织总RNA进行RT-PCR,将纯化的扩增产物hIL-1ra与克隆载体pMD18-T连接、转化,测序正确后将重组体pMD18-T/hIL-1ra与真核表达质粒pEGFP-N1分别进行双酶切,连接后转化感受态细菌E.coliTOP10。将构建正确的pEGFP-N1/hIL-1ra重组质粒DNA瞬时转染人牙龈成纤维细胞,荧光显微镜观察绿色荧光的表达,RT-PCR方法检测其基因的表达。结果:构建的pEGFP-N1/hIL-1ra真核表达载体经PCR及双酶切鉴定均表明人IL-1ra基因已与pEGFP-N1正确重组。瞬时转染人牙龈成纤维细胞后能观察到绿色荧光,RT-PCR可得到目的片段。结论:成功构建了重组质粒pEGFP-N1/hIL-1ra,瞬时转染人牙龈成纤维细胞后检测到其基因水平的表达,为炎性细胞因子拮抗剂基因用于牙周炎抗炎治疗奠定了实验基础。
- 苏毅何雅丽王子露李建民徐艳
- 关键词：真核表达载体瞬时转染人牙龈成纤维细胞
- 重组真核表达载体pEGFP-N1/hIL-1ra的构建及其在NIH3T3细胞中的稳定表达
- 2009年
- 目的构建重组人白细胞介素1受体拮抗剂(rhIL-1ra)基因真核表达载体pEGFP-N1/hIL-1ra,稳定转染小鼠成纤维细胞(NIH3T3)并检测其表达,为使用细胞因子拮抗剂基因治疗牙周炎奠定实验基础。方法Trizol法提取人乳腺癌组织总RNA,RT-PCR方法扩增目的基因。胶回收、纯化后产物与克隆载体pMD18-T连接、转化,测序鉴定正确后将重组克隆载体与真核表达质粒pEGFP-N1分别用HindⅢ和BamHⅠ双酶切,体外连接。重组DNA转化感受态细菌E.coliTOP10,筛选阳性克隆并鉴定。将构建正确的pEGFP-N1/hIL-1ra重组质粒DNA由脂质体介导转染NIH3T3细胞,G418加压筛选20d,RT-PCR检测基因的表达,ELISA检测蛋白的表达。结果重组质粒pEGFP-N1/hIL-1ra经PCR及双酶切鉴定均证实人IL-1ra基因已与pEGFP-N1正确重组。稳定转染NIH3T3细胞后,RT-PCR得到目的基因片段,ELISA检测到目的蛋白的表达。结论本实验成功构建了编码人IL-1ra基因的重组质粒pEGFP-N1/hIL-1ra,并获得了稳定表达目的蛋白人IL-1ra的NIH3T3细胞系,为牙周炎基因治疗的后续研究奠定了实验基础。
- 何雅丽苏毅王子露李建民徐艳
- 关键词：真核表达载体稳定转染
- 人特异性蛋白激酶-15基因在药物性牙龈增生及正常牙龈组织中表达的研究被引量：4
- 2010年
- 目的检测细胞增殖相关基因人特异性蛋白激酶-15(specific protein kinase 15,NYD-SP15)基因在药物性牙龈增生(drug-induced gingival over-growth,DGO)及正常牙龈组织中的表达。方法应用RT-PCR法检测13例药物性牙龈增生患者牙龈切除术中切除的增生牙龈组织标本(A组:钙通道阻滞剂,B组:抗癫痫药物,C组:免疫抑制剂)及20例正常牙龈组织(取自外伤冠折后行牙冠延长术中切除的牙龈组织)中NYD-SP15基因的表达。结果药物性牙龈增生组织中NYD-SP15的mRNA水平高于正常牙龈组织(P<0.05)。在增生牙龈组织中,各药物组间NYD-SP15基因的表达量无统计学差异(P>0.05)。结论 NYD-SP15的异常表达在人药物性牙龈增生发生发展过程中起到一定的作用,但该基因高表达与药物性牙龈增生发生的相关机制尚待进一步研究。
- 梅幼敏狄昌萍苏毅徐艳
- 关键词：药物性牙龈增生
- 新型通用型粘接剂对牙本质粘接强度的体外研究被引量：7
- 2020年
- 目的:评价3种通用型粘接剂和1种第7代粘接剂粘接牙本质在酸蚀-冲洗和自酸蚀处理模式下即刻和老化后微拉伸强度的差别。方法:128颗无龋第三磨牙根据不同粘接剂[Optibond Versa(OV),All-bond Universal(AU),Single Bond Universal(SU),Adper Easy One(AEO)]随机分为4组。每种粘接剂组各半分别使用酸蚀-冲洗和自酸蚀的模式。牙齿与复合树脂粘接后一半样本储存于37℃纯水中24 h,另一半经5000次冷热循环老化实验。沿长轴将牙齿切割成约0.9 mm×0.9 mm柱状试件,测试其微拉伸强度,使用三因素方差分析法分析结果。未经冷热循环各组取切片于扫描电镜下观察粘接界面。结果:冷热循环、酸蚀模式分别与粘接剂种类因素存在两因素交互作用,经过冷热循环后和使用自酸蚀处理时3种通用型粘接剂的微拉伸强度均优于AEO(P<0.001)。未经冷热循环时,OV、AU的微拉伸强度均>AEO;OV的微拉伸强度>SU。采用酸蚀-冲洗模式处理时,AU的微拉伸强度>AEO,AU的微拉伸强度>SU。结论:通用型粘接剂的微拉伸强度整体要优于第7代粘接剂,尤其是经过冷热循环后和自酸蚀处理时优势更明显。
- 李苑苏毅江飞刘丽瞿灵丽
- 关键词：牙本质粘接微拉伸强度自酸蚀
- 慢病毒表达质粒pLenti-IL-1ra-IRES-GFP的构建及其在NIH3T3细胞中的表达
- 2010年
- 目的:构建携带人白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1ra)的慢病毒表达质粒pLenti-IL-1ra-IRES-GFP,并检测其在NIH3T3细胞中的表达。方法:采用PCR技术从含有人IL-1ra基因的质粒pEGFP-N1-IL-1ra中扩增目的基因IL-1ra,并将该基因克隆至慢病毒表达质粒pLenti,PCR及DNA测序来鉴定构建的重组质粒pLenti-IL-1ra。从质粒PMIG中切取IRES-GFP基因片段,插入鉴定正确的质粒pLenti-IL-1ra中以构建重组质粒pLenti-IL-1ra-IRES-GFP。将构建成功的慢病毒表达质粒pLenti-IL-1ra-IRES-GFP、包装质粒Δ8.91、包膜质粒pVSVG共转染293T细胞。获取携带IL-1ra基因的重组慢病毒Lenti-IL-1ra-IRES-GFP,并感染NIH3T3细胞,荧光倒置显微镜下观察荧光蛋白的表达。灭瘟素(Blasticidin)筛选15 d,RT-PCR检测目的基因的表达,ELISA检测目的蛋白的表达。结果:PCR及DNA测序结果均表明人IL-1ra基因与质粒pLenti正确重组;IRES-GFP基因经PCR鉴定已成功插入质粒pLenti-IL-1ra;三质粒共转染293T细胞可获得重组慢病毒。慢病毒感染NIH3T3细胞后,荧光倒置显微镜下能直接观察荧光蛋白的表达,RT-PCR和ELISA分别检测到IL-1ra在基因水平和蛋白水平的表达。结论:成功构建了携带人IL-1ra基因的慢病毒表达质粒pLenti-IL-1ra-IRES-GFP,并获得了稳定表达目的蛋白人IL-1ra的NIH3T3细胞系,为牙周炎基因治疗的进一步研究奠定了实验基础。
- 苏毅束为李松石小丹徐艳
- 关键词：IL-1RA牙周炎基因治疗
