王建锋
- 作品数：10 被引量：27H指数：4
- 供职机构：甘肃农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 临床型奶牛乳房炎乳腺组织亚细胞比较蛋白质组学研究
- 本研究运用亚细胞比较蛋白质组学的研究策略和技术方法，以奶牛乳腺组织为研究模型。通过超离心技术分离出细胞核、线粒体、溶酶体、高尔基体，双向电泳分离蛋白质，PDQest7.4软件分析凝胶图谱的蛋白质表达模式，筛选差异表达蛋白...
- 王建锋
- 关键词：奶牛乳房炎乳腺组织差异表达蛋白蛋白质组学
- 亚细胞蛋白质组学研究进展被引量：5
- 2009年
- 亚细胞蛋白质组是蛋白质组学研究的新领域,是目前研究疾病发病机理的有效手段,研究的主要内容包括亚细胞结构的分级分离、纯化以及蛋白质组分析,目前几乎所有的亚细胞结构的蛋白质组学研究都有报道.本文就快速发展的亚细胞蛋白质组学以及揭示的生物学意义作以综述.
- 王建锋赵兴绪
- 关键词：蛋白质组
- 不同采卵方式对绵羊卵母细胞质量、体外成熟及体外受精的影响被引量：4
- 2007年
- 随着胚胎工程及胚胎相关技术的发展,绵羊卵母细胞和绵羊胚胎的需求量日益增加。获得尽可能多的结合型卵母细胞是体外受精的关键环节。本试验通过剖切法和抽吸法两种不同采卵方式获取卵母细胞并进行体外成熟培养。剖切法获得的卵母细胞数量高于抽吸法,所用时间相差不大。A、B级卵母细胞的比例在剖切法中显著高于抽吸法(P<0.05),抽吸法所采集的C级卵母细胞显著高于剖切法(P<0.05);剖切法中卵丘扩散率和第一极体排出率要显著高于抽吸法(P<0.05),受精后不同时期胚胎的发育率差异不显著(P>0.05)。表明剖切法是采集绵羊卵母细胞的理想方法。
- 王建锋张勇赵兴绪
- 关键词：绵羊卵母细胞体外受精
- 奶牛β-防御素5基因的克隆与原核表达被引量：7
- 2009年
- 根据已发表的β-防御素5基因序列设计引物,采用RT-PCR技术扩增奶牛白细胞β-防御素5基因片段,构建原核表达载体并进行诱导表达.结果表明:将PCR产物插入pGEM-T easy载体后,经琼脂糖凝胶电泳、PCR、酶切及DNA测序证明构建的重组克隆载体完全正确,以该重组质粒为模板扩增目的基因的成熟肽片段,产物用EcoR I+NotⅠ双酶切并与原核表达载体PET28a连接,获得了预期的重组表达质粒.将重组表达质粒转化到BL21(DE3)宿主菌中,用异丙基--βD-硫代半乳糖苷诱导表达,经尿素-SDS-PAGE检测表明表达产物为6.4 kda的融合蛋白.
- 周雷张勇王建锋赵兴绪
- 关键词：奶牛基因克隆原核表达
- 慢性猪瘟的诊断与防制被引量：2
- 2007年
- 南金鱼王建锋
- 关键词：慢性猪瘟传染性疾病防制病理剖检变化免疫密度急性猪瘟
- 奶牛乳腺组织亚细胞组分的双向凝胶电泳分析
- 2010年
- 利用超速离心结合梯度离心法分离亚细胞组分的技术路线,以提高奶牛乳腺组织蛋白双向凝胶电泳的分离效率。奶牛乳腺组织液氮研磨破碎后,差速离心分离成细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体4个亚细胞组分,Nyco-denz纯化,2-DE分离蛋白,PDQUest8.0软件分析凝胶图谱。结果显示,奶牛乳腺组织细胞经亚细胞分离后,电泳分辨率大大提高,特别是细胞核蛋白质检出效率明显提高。不同亚细胞蛋白质组电泳图谱的差异显示了其蛋白质组构成的不同。由此可见超速离心结合梯度离心是一种有效的奶牛乳腺亚细胞组分分离手段,亚细胞蛋白质组学克服了蛋白质组的一些缺陷并可将蛋白质组研究引向亚细胞水平。
- 王建锋赵兴绪张勇
- 关键词：奶牛乳腺蛋白质组双向电泳
- 健康奶牛与临床型乳腺炎奶牛乳腺核蛋白组差异表达分析被引量：7
- 2010年
- 亚细胞蛋白质组的优点在于对低丰度蛋白的研究,运用亚细胞蛋白质组学的研究策略,可以提高低丰度蛋白质在双向电泳中的检出数量。通过分析奶牛乳腺炎乳腺与正常乳腺核蛋白组差异表达情况,为奶牛乳腺炎发病机理研究寻找尽可能多的生物标记分子。经超速离心法分离细胞核,双向凝胶电泳分离蛋白,用PDQuest7.4软件分析寻找差异蛋白质斑点,高效液相色谱串联离子阱质谱鉴定蛋白质。从核蛋白组2-DE图谱中筛选出22个差异表达的蛋白质斑点,质谱鉴定出17个差异表达的蛋白质,2个蛋白质在乳腺炎发病过程中下调,7个上调,5个只在正常情况下表达,3个只表达在乳腺炎组织中,筛选出的差异表达蛋白质涉及细胞骨架构成、代谢调节及凋亡调控等许多方面。表明奶牛乳腺炎发生时乳腺组织核结构和代谢状态都发生了的变化。
- 王建锋赵兴绪张勇徐铁山
- 关键词：奶牛亚细胞蛋白质组
- 卵泡液蛋白质组学研究进展
- 2009年
- 蛋白质组的概念最初在1994年提出。蛋白质组学是以细胞内全部蛋白质的存在及其活动为研究对象,它极大地促进了我们对后基因组时代基因功能的理解。卵泡液作为卵母细胞生长和分化的培养基,直接或间接影响卵母细胞的生育力和发育潜能,其中的一些蛋白质可以作为卵母细胞成熟的标记。应用蛋白质组学方法可以筛选与卵母细胞成熟及一些与生殖疾病有关的标记蛋白。本文就卵泡液的蛋白质组学研究进展作简要综述。
- 徐铁山赵兴绪张勇王建锋
- 关键词：卵泡液蛋白质组学
- 健康奶牛与临床型乳腺炎奶牛乳腺线粒体蛋白组差异表达分析被引量：2
- 2012年
- 运用亚细胞蛋白质组学的研究策略,分离纯化亚细胞结构再进行蛋白质组学研究,可提高低丰度蛋白在双向凝胶电泳中的检出率。通过对比分析乳腺炎奶牛乳腺与正常奶牛乳腺线粒体蛋白质组的表达变化,为奶牛乳腺炎的生物学治疗及抗病育种工作筛选出目基因和蛋白。超速离心法分离线粒体,双向凝胶电泳分离蛋白,PDQuest7.4软件分析差异蛋白斑点,高效液相色谱串联离子阱质谱鉴定差异蛋白。从奶牛乳腺线粒体蛋白2-DE图谱中筛选出17个差异表达的蛋白质斑点,质谱鉴定出17个差异表达蛋白(6个蛋白在奶牛乳腺炎发生过程中下调,8个上调,1个只在正常情况下表达,2个只在乳腺炎乳腺组织中表达)。筛选出的差异蛋白质涉及到细胞的能量代谢、蛋白质合成、mRNA的加工成熟及调亡调控等许多方面,表明奶牛乳腺炎发生时乳腺线粒体组织结构和代谢状态都发生了明显的变化。
- 王建锋陶金忠张勇赵兴绪
- 关键词：奶牛线粒体
- 绵羊类胚胎干细胞克隆及特性分析
- 胚胎干细胞来源于着床前的囊胚内细胞团或早期胎儿的原始生殖细胞,具有全能分化和无限增殖的潜力。在适当条件下,胚胎干细胞可被诱导分化为各种细胞组织,这一特性使其在基础研究、移植治疗和基因治疗中具有诱人的应用前景。本研究从绵羊...
- 王建锋
- 关键词：绵羊卵母细胞体外成熟体外受精
- 文献传递
