王唯一
- 作品数：9 被引量：28H指数：5
- 供职机构：南通大学附属医院更多>>
- 发文基金：江苏省社会发展科技计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 实时荧光定量PCR检测大肠癌患者外周血鸟苷酰环化酶C基因及其临床意义被引量：5
- 2005年
- 目的:建立人鸟苷酰环化酶C(GC-C)含量实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)检测的新方法,观察大肠癌患者外周血单个核细胞(PBMC)GC-C mRNA表达水平并探讨其临床意义.方法:在GC-C基因高保守区设计了特异性的引物和探针,RT-PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度,根据标准品建立的标准曲线,由软件自动计算出待测样本(30例健康献血员、11例大肠良性病变和37 例大肠癌)中GC-C mRNA准确含量,并以GC-C mRNA和β2微球蛋白 mRNA含量的比值作为评价GC-C表达水平的指标.结果:本法检测GC-C mRNA含量的线性范围为101 ～109 pg/ml,样本批内和批间变异系数(CV)值分别为6.87%～11.12%和8.86%～15.19%.30例健康献血员和11例大肠良性病变样本的PBMC中均未检出GC-C mRNA表达,大肠癌患者外周血GC-C mRNA的检出率为83.8%(31/37).大肠癌患者外周血PBMC GC-C mRNA表达水平为0.88±0.06,与Duke分期、淋巴结转移和肝转移密切相关,与年龄、性别、肿瘤大小等无关.结论:GC-C mRNA RFQ-PCR检测外周血大肠癌细胞具有较好的检测灵敏度、特异性和重复性,GC-C mRNA表达水平可能对指导大肠癌Duke分期、判断淋巴结转移和肝转移、指导术后综合治疗均有一定价值.
- 毛振彪王唯一张冬雷黄介飞鞠少卿
- 关键词：结直肠肿瘤外周血单个核细胞实时荧光定量逆转录聚合酶链反应
- 靶向胰腺癌细胞株增殖诱导配体基因小干扰RNA的制备及纯化被引量：1
- 2007年
- 目的:制备及纯化针对增殖诱导配体基因(APRIL)的小干扰RNA(APRIL siRNA),为进一步研究APRIL基因在人胰腺癌中的作用奠定基础。方法:构建靶向胰腺癌CFPAC-1细胞株APRIL基因双链RNA(APRIL dsRNA)的表达质粒pET-22b-APRIL,在大肠杆菌中发酵表达APRIL dsRNA,并利用CF-11树脂亲和层析纯化;用大肠杆菌Ⅲ型RNA水解酶(RNaseⅢ)水解dsRNA,制备APRIL siRNA,应用DEAE树脂离子交换层析使RNaseⅢ与核苷酸分离,分子筛层析进一步分离纯化APRIL siRNA。将纯化后的APRIL siRNA转染CHO细胞,荧光显微镜下观察转染后CHO细胞APRIL蛋白的表达情况。结果:pET-22b-APRIL转染大肠杆菌后,经IPTG诱导能大量表达APRIL dsRNA,表达产物经CF-11树脂纯化能得到纯化的APRIL dsRNA;dsRNA经RNaseⅢ水解后,过DEAE树脂离子交换层析柱,经5%PAGE、12%SDS-PAGE电泳证实RNaseⅢ与核苷酸分离,进一步经分子筛层析分离纯化,得到纯化APRIL siRNA。荧光显微镜下观察结果表明,APRIL siR- NA转染CHO细胞能明显抑制APRIL蛋白的表达。结论:成功制备了靶向CFPAC-1细胞株的APRIL siRNA,为下一步敲减CFPAC-1细胞APRIL基因的研究奠定了基础。
- 毛振彪邵建国王唯一谭畅黄伟达黄介飞
- 关键词：增殖诱导配体RNA干扰胰腺肿瘤
- 胃黏膜癌变过程中增殖诱导配体及其受体表达水平分析被引量：8
- 2005年
- 目的分析胃癌发生各阶段组织中增殖诱导配体(APRIL)及其受体mRNA的表达水平.方法在APRIL及其受体基因的高保守区设计相应引物和荧光探针,实时检测PCR产物的荧光强度,根据标准品建立标准曲线,由软件自动计算出待测样本中靶基因mRNA的准确含量,并以靶基因和内参β2微球蛋白(β2M)mRNA含量比值作为评价靶基因表达水平的指标.结果采用实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)检测靶基因mRNA含量的线性范围为101～109pg/ml,批内和批间重复性测定的变异系数(cv)分别为6.52%～12.02%和8.76%～14.16%.APRIL在肠上皮化生、异型增生和胃癌组织中的表达水平显著高于正常胃黏膜(P＜0.05),在胃癌组织中的表达水平又显著高于肠上皮化生和异型增生(P＜0.05),而其受体B细胞成熟抗原(BCMA)和穿膜蛋白活化物(TACI)在各种胃黏膜病变之间表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论RFQ-PCR检测APRIL及其受体mRNA含量,具有较好的灵敏度和重复性.APRIL在胃癌病变演进过程中呈现累积和渐进趋势,可能在胃癌发生、发展过程中起重要作用,有可能成为胃癌早期诊断和抗癌治疗的靶分子.肿瘤组织可能还表达APRIL未知受体.
- 毛振彪张冬雷施健黄介飞王唯一孟宪镛
- 关键词：胃黏膜癌变增殖诱导配体受体Β2微球蛋白肿瘤组织
- 实时荧光定量PCR检测鸟苷酰环化酶C基因表达方法的建立
- 2006年
- 目的建立实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)检测鸟苷酰环化酶C(GC-C)基因表达的方法。方法在GC-C基因高保守区设计了特异性的引物和探针,RT-PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度,根据标准品建立标准曲线,由软件自动计算出待测样本中GC-C mRNA含量,并以GC-C mRNA和β2M mRNA含量的比值作为评价GC-C表达水平的指标。结果本法检测GC-C mRNA含量的线性范围为101pg／ml-109pg／ml,样本批内和批间CV值分别为6．87％一11．12％和8．86％- 15．19％。30例健康献血员和11例大肠良性病变患者的外周血单个核细胞(PBMC)中均未检出GC-C mRNA表达,大肠癌患者PBMC的GC-C mRNA检出率为83．8％(31／37),表达水平为0．88±0．06。10例大肠癌组织和T84细胞株均检出GC-C mRNA,表达水平分别为每μg组织(0．86±0．07)和每个细胞0．0082。结论成功建立RFQ-PCR检测GC-C mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度、特异性和可重复性。
- 毛振彪张冬雷黄介飞王唯一鞠少卿
- 关键词：外周血单个核细胞实时荧光定量
- 消化系肿瘤增殖诱导配体高表达细胞株的筛选被引量：6
- 2006年
- 目的筛选出增殖诱导配体(APRIL)mRNA高水平表达的人消化系肿瘤细胞株,为进一步探讨APRIL基因在消化系统肿瘤发生、发展以及转移过程中的作用机制奠定基础。方法选择2株人胃癌细胞(AGS、SGC7901)和3株人胰腺癌细胞(PANC1、CFPAC-1、BxPC3)培养提取mRNA后,逆转录成cDNA作PCR模板。以APRIL基因高保守区设计特异性的引物,以磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)为内参,PCR扩增目的片段,通过计算机图像扫描系统分析各株细胞的APRILmRNA的表达量,以表达量最高的1株作为1,获得各细胞株的APRILmRNA表达量的相对值。结果5株细胞APRILmRNA的相对值分别为:AGS,0.09;SGC7901,0.61;PANC1,0.45;CFPAC1,1;BxPC3,0.57,按表达量高低顺序为:CFPAC1>SGC7901>BxPC3>PANC1>AGS。结论在不同肿瘤细胞中APRIL的表达有高有低,提示APRIL基因在肿瘤发生、发展过程中起一定作用。
- 邵建国毛振彪谭畅黄介飞王唯一黄伟达
- 关键词：消化系统肿瘤聚合酶链反应配体
- 人胰腺癌组织中增殖诱导配体蛋白的表达及意义被引量：11
- 2007年
- 目的观察人胰腺癌组织中增殖诱导配体(APRIL)蛋白的表达情况,探讨其与胰腺癌生物学行为的关系。方法免疫组化染色法检测人胰腺癌组织(n=20)及正常胰腺组织(n=10)APRIL蛋白的表达,分析不同临床病理指标下胰腺癌组织中APRIL蛋白的表达。结果胰腺癌组织中APRIL阳性率为90.0%(18/20),明显高于正常胰腺组织0(0/10)。胰腺癌组织不同临床病理指标下(肿瘤分化程度、有无淋巴结转移、有无远处转移、肿瘤大小),APRIL蛋白表达无显著差异。结论APRIL蛋白表达可能与胰腺癌的发生、发展有关。
- 王唯一毛振彪潘正平黄介飞邵建国
- 关键词：胰腺肿瘤增殖诱导配体
- 人胃腺癌细胞株AGS、SGC-7901增殖诱导配体mRNA的表达被引量：1
- 2007年
- 目的:比较人AGS、SGC-7901两种胃癌细胞株中增殖诱导配体(APRIL)mRNA的表达水平。方法:通过半定量RT-PCR检测APRIL mRNA,筛选出APRIL mRNA高表达细胞株。结果:以GAPDH为内参,通过计算机图像扫描系统分析各株细胞APRIL mRNA的表达量,获得人胃腺癌细胞株APRIL mRNA表达量的相对值,AGS0.09,SGC-79010.61。结论:SGC-7901为APRIL mRNA高表达细胞株。
- 毛振彪王唯一黄介飞谭畅黄伟达
- 关键词：胃腺癌聚合酶链反应增殖诱导配体
- 鸟苷酰环化酶C质粒标准品的构建被引量：1
- 2006年
- 目的:制备人鸟苷酰环化酶C(GC-C)质粒标准品,为实时荧光定量PCR检测GC-C含量,探讨大肠癌患者外周血单个核细胞(PBMC)GC-C mRNA表达水平及临床意义奠定基础。方法:在鸟苷酰环化酶C(GC-C)基因高保守区设计特异性的引物和探针,RT-PCR扩增目的片段并连接于pGEM-T载体,以得到GC-C质粒标准品。结果:经过蓝白斑筛选,PCR或EcoR I酶切初步鉴定,阳性克隆测序分析确定GC-C质粒标准品正确性。结论:正确构建GC-C质粒标准品为RFQ-PCR标准曲线的绘制及GC-C的定量检测奠定了基础。
- 王唯一毛振彪徐政府俞智华周正斌张冬雷
- 关键词：结肠直肠肿瘤实时荧光定量
- RNA干扰技术在胰腺癌基因治疗中的应用被引量：5
- 2007年
- RNA干扰(RNAi)是双链RNA(dsRNA)介导的、由特异性引起的转录后基因沉默现象。RNA干扰技术作为基因沉默的有效手段,在肿瘤治疗方面显示出良好的前景。现就RNA干扰的机制、双链RNA的设计、小干扰RNA(siRNA)的制备方法和RNA干扰技术在胰腺癌治疗研究中的应用进展作一综述。
- 王唯一毛振彪黄介飞
- 关键词：胰腺癌RNA干扰技术基因治疗
