王凤阳
- 作品数：10 被引量：36H指数：3
- 供职机构：解放军军需大学军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金军队医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 重组逆转录病毒浓缩方法研究被引量：4
- 2001年
- 选择含有新霉素磷酸转移酶Ⅱ (Neor)的重组逆转录病毒载体 ,通过包装细胞进行包装 ,得到了含有重组逆转录病毒粒子的病毒溶液 ,该病毒溶液分别采用差速离心和滤膜截留两种方法进行浓缩 ,浓缩前、后的病毒溶液体外感染靶细胞NIH3T3以测定其滴度。结果显示 :差速离心法的浓缩效率要优于滤膜截留法的浓缩效率 ,其浓缩效率能达到 34 5%。
- 王凤阳扈荣良邹啸环池海英杜卫华赵君张守峰李敏殷震
- 关键词：重组逆转录病毒
- Bcl-2和C-myc基因重组反转录病毒产毒细胞系的建立被引量：1
- 2000年
- 赵君杜卫华张守峰王凤阳李敏扈荣良刘瑞和殷震
- 关键词：BCL-2
- 一种简便快速的体外点突变方法被引量：1
- 2001年
- 扈荣良李敏张守峰邱薇赵君王凤阳涂长春
- 关键词：质粒碱基突变酶切位点
- 重组逆转录病毒的制备、浓缩及保存研究被引量：3
- 2001年
- 选择含有新霉素磷酸转移酶Ⅱ（ＮｅｏＲ）的重组逆转录病毒载体，用包装细胞进行包装，得到了含有重组逆转录病毒粒子的病毒上清，该病毒上清经差速离心法浓缩后，－８０℃无任何添加物的情况下保存３个月，体外感染靶细胞ＮＩＨ３Ｔ３以测定其滴度，冻存前后的浓缩病毒上清的感染滴度无明显降低，经过冻存的浓缩病毒上清的感染滴度仍可达到１０６ｃｆｕ／ｍｌ，具有理想的感染靶细胞的能力。
- 王凤阳扈荣良杜卫华王铁东殷震
- 关键词：重组逆转录病毒
- 重组逆转录病毒介导的neo^R基因在公鼠生殖系细胞的转移被引量：3
- 2001年
- 将感染滴度为 10 6cfu/ m L、携带新霉素磷酸转移酶 (neo R)基因的重组逆转录病毒与台盼蓝、polybrene按一定比例配制成注射液 ,单侧睾丸注入 14～ 16日龄公鼠曲细精管以体内感染精原干细胞 ,进行重组逆转录病毒 -精原干细胞介导的基因转移研究。注射后 45 d,采集公鼠精液 ,进行精液品质与 PCR检测。结果表明 ,在优化的注射条件下 ,曲细精管内注射重组逆转录病毒后 ,不会干扰小鼠精子的正常发育能力 ,并能够将外源基因整合到精子基因组 ,从而首次通过重组逆转录病毒成功地实现了 neo
- 王凤阳张守峰赵君池海英孟庆文扈荣良殷震
- 关键词：重组逆转录病毒基因转移小鼠
- 反转录病毒体内转染精原干细胞介导的转基因方法
- 本发明涉及一种转基因方法，尤其是涉及以重组反转录病毒为介导体内转染精原干细胞的转基因方法。将目的基因克隆到反转录病毒载体，转化PA317细胞，收集并浓缩由阳性细胞克隆产生的重组病毒，将重组病毒注射到幼龄小鼠的曲细精管内，...
- 扈荣良张守峰王凤阳
- 文献传递
- 重组逆转录病毒载体系统的建立及其感染滴度的研究
- 2000年
- 选择新霉素磷酸转移酶II(NeoR)做为标记基因 ,将重组逆转录病毒载体经包装细胞包装后得到的重组病毒浓缩后 ,应用该重组逆转录病毒载体系统体外感染靶细胞NIH3T3以测定其滴度 ,其滴度可达到 1 0 6。
- 王凤阳扈荣良殷震赵宝全池海英
- 关键词：靶细胞
- 鸡卵清蛋白基因5′调控序列表达载体的构建及其在鸡原代输卵管上皮细胞及鸡成纤维细胞的表达被引量：25
- 2001年
- 将氯霉素乙酰转移酶 ( CAT)基因与鸡卵清蛋白基因上游调控序列融合 ,构建了 p CAT-3-OVP(鸡卵清蛋白基因 5′调控序列 )表达载体。将构建的载体与脂质体混合后制备转染液 ,转染鸡原代输卵管上皮细胞和鸡成纤维细胞进行瞬时表达。结果表明 ,在鸡原代输卵管上皮细胞 ,转染后 4 8h表达量最高 ,为 0 .67μg/L;而在鸡成纤维细胞 ,不论有无类固醇激素存在 ,均不表达。结果提示 ,在输卵管细胞中存在细胞特异性转录因子。
- 宇丽赵君张艳玲刘斌张守峰王凤阳赵宝全扈荣良殷震
- 重组逆转录病毒载体的包装被引量：1
- 2001年
- 将 3.7kb的 Lac Z基因片段克隆到含标志基因 Neor的逆转录病毒载体 p LXSN与 p LNCX的多克隆位点 ,构建了含有 Lac Z基因的重组逆转录病毒载体 p LLSN和 p LNCL。在测定了 G4 1 8对包装细胞系PA31 7的最小致死剂量后 (最小致死剂量为 0 .3g/ L) ,通过脂质体 Lipofectin与磷酸钙 2种介质 ,分别将 2种重组逆转录病毒载体导入包装细胞系 PA31 7进行包装 ,并以 0 .3g/ L的 G4 1 8进行筛选 ,得到多个 G4 1 8抗性克隆。经扩大培养、传代 ,分别得到包装 p LLSN与 p LNCL的 2株阳性细胞。电镜下可见阳性细胞的培养上清中具有逆转录病毒形态特征的成熟病毒粒子。本研究为运用逆转录病毒载体系统 。
- 王凤阳扈荣良张茂林赵君涂长春殷震
- 关键词：重组逆转录病毒载体基因转移
- 含LacZ重组逆转录病毒的制备及其在NIH_3T_3细胞的表达被引量：1
- 2001年
- 构建了含有 3.7kbLacZ的重组逆转录病毒载体 ,转染包装细胞系PA317后 ,经G418筛选 ,得到了G418抗性的产毒细胞系 ,用收获的含有重组逆转录病毒粒子的浓缩病毒上清 ,感染NIH3T3细胞 ,经X_gal染色检测 ,发现表达了LacZ的NIH3T3细胞呈蓝色。
- 王凤阳孟庆文扈荣良池海英张茂林于康震殷震
- 关键词：重组逆转录病毒LACZNIH3T3细胞外源基因转基因
