李建玲
- 作品数：6 被引量：24H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 新生大鼠螺旋神经节细胞体外生长特点及脂质体介导的转染效率被引量：3
- 2010年
- 目的探讨螺旋神经节细胞（spiral ganglion cells,SGCs）体外生长规律及特点,并观察阳离子脂质体转染SGCs的情况。方法从出生3~4 d的SD大鼠耳蜗中分离螺旋神经节组织,消化后放在含10%胎牛血清的DMEM/F12中培养,第2 d换用含2%B27及5μmol/L阿糖胞苷的Neurobasal培养基纯化SGCs,取第4 d活性良好的细胞爬片后,通过免疫荧光法用NF-200抗体鉴定SGCs;另外用质粒pEGFP-C2联合Lipofectamine 2000转染SGCs,观察其转染效率及对细胞活性的影响。结果体外培养的SGCs胞体饱满透亮,折光性好,一般能存活2周左右,第3~7 d活性最好。细胞对NF-200染色阳性;约10%的SGCs能被Lipofectamine 2000转染,但小部分细胞轴突缩短,甚至漂浮起来。结论含B27的Neurobasal培养基能培养出活性良好的SGCs;脂质体和质粒pEGFP-C2能成功地转染SGCs,但转染效率较低,并在一定程度上影响细胞的活性。
- 陈请国褚汉启王显红陈金李建玲周良强熊浩王燕李志勇崔永华
- 关键词：螺旋神经节细胞LIPOFECTAMINEB27
- C57BL／6J小鼠耳蜗钾离子转运蛋白KCNQ1和NKCC1的年龄相关性表达及其与听力的关系被引量：5
- 2011年
- 目的观察钾离子转运蛋白KCNQ1和Na-K-2C1联合转运子1（Na—K-2C1CO—transporter1，NKCC1）在C57BL／6J小鼠耳蜗侧壁的年龄相关．陛表达，探讨这两种转运蛋白在年龄相关性听力减退发病中的作用。方法通过听性脑干反应（ABR）检测C57BL／6J小鼠各年龄段（4、8、14、24、40周龄）的听力变化。应用免疫组化法确定KCNQ1和NKCC1在C57BL／6J小鼠耳蜗中的表达定位，并检测各年龄段小鼠耳蜗中两种转运蛋白含量随着年龄增加的表达变化。采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测KCNQ1和NKCC1的mRNA在不同鼠龄小鼠耳蜗中的表达水平。结果随着C57BL／6J小鼠年龄的增加，其ABR反应阈值逐渐升高，4周龄小鼠的短声（click）和4kHz、8kHz的ABR反应阈值与8周龄小鼠相比，差异均无统计学意义（P值均〉0．05）；14周龄后，三种刺激声的ABR反应阈逐渐升高，与低龄组小鼠相比其差异均具有统计学意义（P值均〈0．05）。KCNQ1蛋白主要表达于耳蜗血管纹的边缘细胞顶膜，而NKCC1蛋白主要表达于血管纹边缘细胞、螺旋韧带的Ⅱ型纤维细胞及螺旋缘下的纤维细胞。随着年龄的增加，血管纹KCNQ1和NKCC1蛋白的表达逐渐减少。KCNQ1和NKCC1mRNA的表达量也随着年龄的增加呈现减少的趋势。结论C57BL／6J小鼠随着年龄的增加其听力逐渐下降。KCNQ1和NKCC1两种钾离子转运蛋白随着小鼠年龄的增加逐渐减少；KCNQ1和NKCC1mRNA表达水平亦呈现随年龄增加而逐渐减少的趋势。耳蜗侧壁KCNQ1和NKCC1可能在年龄相关性听力减退的发生中起一定作用。
- 李建玲褚汉启周良强熊浩王燕陈请国陈金李志勇刘云崔永华
- 关键词：老年性聋小鼠近交C57BL
- 2种钾离子转运蛋白在血管纹性老年性聋发病中的作用(不同基因型小鼠的听觉生理研究)被引量：5
- 2010年
- 目的探讨Na-K-2Cl联合转运子1(Na-K-2Cl cotransporter1,NKCC1)和α2Na,K-ATP酶(α2Na,K-AT-Pase)在血管纹性老年性聋(strial presbycusis)发病过程中的作用。方法分别以不同基因型的NKCC1小鼠(杂合子和野生型)和α2Na,K-ATPase小鼠(杂合子和野生型)为实验对象,检测小鼠生长过程不同阶段的听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)和耳蜗内电位(endocochlear potential,EP),以观察NKCC1和α2Na,K-ATPase基因缺陷与血管纹性老年性聋的关系。结果听性脑干反应检测结果显示,与NKCC1+/+野生型小鼠相比较,NKCC1+/-杂合子小鼠的ABR阈值在所有周龄组的各测试频率均升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。NKCC1+/-杂合子小鼠的听力随鼠龄增长而下降,与低龄小鼠相比,老龄小鼠的ABR阈值显著升高(均P<0.05)。NKCC1+/-小鼠的EP也随年龄增长而呈下降趋势,老龄小鼠的EP值与低龄小鼠相比明显降低(P<0.05)。α2Na,K-ATPase+/-杂合子小鼠的听力及EP低于同周龄组野生型小鼠,其听力随鼠龄增长而下降,高龄小鼠的ABR阈值与其低龄时相比明显升高(P<0.05)。结论只携带1个NKCC1或α2Na,K-ATPase等位基因的小鼠(杂合子)可呈现伴EP下降的年龄相关性听力下降,耳蜗侧壁的NKCC1和α2Na,K-ATPase基因缺陷可能在血管纹性老年性聋的发病中起一定作用。
- 褚汉启周良强熊浩王燕陈请国陈金李志勇李建玲黄孝文黄红彦崔永华
- 关键词：耳蜗内电位小鼠NA,K-ATP酶老年性聋
- 卡那霉素联合呋塞米快速诱导小鼠耳蜗损伤被引量：12
- 2010年
- 目的探讨卡那霉素和呋塞米联合应用对小鼠耳蜗的毒性作用，建立一种可靠的小鼠感音神经性聋模型。方法选用3～4周龄的CBA／J小鼠为实验对象，按1g／kg的剂量皮下注射卡那霉素，30～45min后按0．4g／kg的剂量腹腔注射呋塞米。在注射前、注射后12h、24h、48h、7d、2周、4周及12周分别应用听性脑干反应（ABR）检测小鼠听觉功能的改变；应用异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽及碘化丙啶染色、半薄切片甲苯胺蓝染色、脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术、扫描电镜等观察小鼠毛细胞死亡的模式和程度；同时通过透射电镜观察记录耳蜗血管纹形态及厚度的变化。结果序贯应用卡那霉素及呋塞米后12h小鼠ABR阈值开始上升，随后的36h内持续进行性上升，继而稳定在90dB左右。应用激光共聚焦显微镜在药物注射后12h观察到耳蜗底回外毛细胞开始出现死亡，24h时底回外毛细胞基本全部消失，同时顶回外毛细胞开始出现死亡，至48h时整个耳蜗外毛细胞绝大部分死亡；而内毛细胞的损伤至给药后7d时才开始出现，随时间推移仍有部分内毛细胞完好无损。死亡的毛细胞均具有典型的凋亡细胞特征。扫描电镜观察发现在药物注射后受损毛细胞出现纤毛消失、表皮板塌陷，随后支持细胞增生并在该处形成瘢痕。血管纹表面边缘细胞在给药后出现部分胞体融合并且有坏死物自胞内排出，随后边缘细胞表面大部分微绒毛消失，胞体呈“石块”样改变。透射电镜结果显示血管纹厚度在给药后进行性下降，主要为边缘细胞萎缩造成。结论单次序贯应用卡那霉素及呋塞米能快速诱导小鼠耳蜗毛细胞大量死亡，适合应用于建立小鼠感音神经性聋模型。
- 熊浩褚汉启黄孝文崔永华周良强陈金李建玲王燕陈请国李志勇
- 关键词：卡那霉素呋塞米耳蜗小鼠
- 质膜钙ATP酶异构体2在新生大鼠螺旋神经节细胞中的表达被引量：2
- 2010年
- 目的研究乳鼠内耳螺旋神经节细胞（spiral ganglion cell，SGC）质膜钙ATP酶异构体2（plasmamembrane Ca^2＋．ATPase isoform2，PMCA2）的表达情况，并进一步检测其A端和C端剪接位点所表达的剪接变异体。方法取出生3～4d的SD大鼠螺旋神经节组织，体外培养鉴定后通过免疫荧光法检测SGC的PMCA2表达情况；取出生3～4d大鼠的耳蜗，通过冰冻切片检测PMCA2在螺旋神经节中的表达；收集体外培养的SGC，Trizol法提取总RNA并反转录成cDNA，分别通过巢式PCR和普通PCR法检测PMCA2A端和C端的剪接变异体。结果体外培养的SGC胞体透亮，活性良好，神经元标记物NF-200抗体染色阳性。SGC胞膜、胞质和轴突均发出强烈绿色荧光，PMCA2表达阳性。耳蜗切片中螺旋神经节组织亦强烈表达PMCA2。SGC表达的PMCA2A端剪接变异体为PMCA2z，而C端的剪接变异体为PMCA2b和PMCA2c。结论新生大鼠SGC强烈表达PMCA2，并在其A端和C端存在不同的剪接变异体。
- 陈请国褚汉启陈金李建玲崔永华王显红
- 关键词：螺旋神经节
- 感音神经性聋小鼠耳蜗外侧壁形态及功能的改变
- 2010年
- 目的:探讨感音神经性聋发生后小鼠耳蜗外侧壁形态和功能的改变。方法:选用3-4周龄的CBA/J小鼠为实验对象,联合应用卡那霉素及呋塞米致聋。在给药后0.5 d、1 d、2 d、7 d、28 d及112 d监测耳蜗内电位(EP)的改变;应用HE染色、免疫化学和透射电镜方法检测耳蜗外侧壁形态以及2种K+转运蛋白NKCC1和α2Na,K-ATPase的变化。结果:序贯应用卡那霉素及呋塞米后0.5 d小鼠EP开始下降,至1 d进行性下降,至2 d完全恢复正常并在随后长时期保持稳定。HE染色显示毛细胞损失和耳蜗外侧壁萎缩是主要病理改变。免疫化学结果表明耳蜗外侧壁NKCC1和α2Na,K-ATPase蛋白表达明显下降。透射电镜结果显示血管纹厚度在致聋后进行性下降,主要为边缘细胞萎缩造成。结论:萎缩后的耳蜗外侧壁在毛细胞严重缺失的情况下仍然可以保证EP的正常维持。
- 熊浩褚汉启周良强陈请国王燕黄孝文崔永华陈金李建玲李志勇刘云
- 关键词：血管纹耳蜗内电位
