李川川
- 作品数：10 被引量：15H指数：2
- 供职机构：山东农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家水禽产业技术体系建设项目山东省科技发展计划项目国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 鸭瘟病毒单抗的制备及胶体金试纸条检测方法的建立被引量：6
- 2016年
- 【目的】鸭瘟（DP）是由鸭瘟病毒（DPV）引起的一种急性、败血性传染病,以头颈肿胀、食道黏膜和泄殖腔黏膜出血、黄白色溃疡,头颈部皮下有黄白色胶冻样渗出为特征。该病一旦发生,发病急、死亡快、死亡率高,对养鸭业危害严重。快速诊断是控制鸭瘟的重要措施之一,可以及时确定病原,以便采取有效的防制手段。试验旨在建立鸭瘟病毒（DPV）胶体金快速检测方法。【方法】利用生物学软件Protean分析,选择鸭瘟病毒抗原表位较多的一段序列设计引物,PCR扩增目的基因。连接到载体pMD-18T上,测序正确后再连接到原核表达载体pET-28a上。将获得的重组质粒转化至Rosetta感受态细胞中进行诱导表达。表达的蛋白经纯化后测其浓度并经Western blotting鉴定分析。以表达的DPV-gB蛋白作为抗原,免疫7周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA筛选及亚克隆,获得DPV-gB特异性单克隆抗体。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,以制备的H6F6单抗作为标记抗体（标记的最适pH为8.0—8.5,最佳标记浓度为15倍原液稀释）,将纯化的A8D7单抗（浓度为2倍原液稀释）和羊抗鼠IgG（浓度为10倍稀释）包被在硝酸纤维素膜（NC）上,分别作为检测线和质控线,经条件优化建立了鸭瘟病毒胶体金试纸条检测方法。【结果】共获得4株能稳定分泌抗DPV-gB蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为A8D7、E6C3、H11F8、H6F6。间接ELISA检测腹水效价分别为1：10^3、1：10^3、1：10^5、1：10^3。亚类鉴定结果分别为IgG2b、IgG2a、IgG2b、IgG1,轻链均为kappa链。Western blotting结果显示4株单抗均能与DPV-gB蛋白特异性结合。IFA结果显示制备的4株单抗是针对DPV产生的。建立的胶体金试纸条方法能够特异性地检测鸭瘟病毒,与鸭坦布苏病毒、H9N2亚型禽流感病毒、呼肠孤病毒、减蛋综合征病毒无反应。阳性尿�
- 赵丹丹杨国平刁有祥陈浩提金凤张璐张英李川川
- 关键词：鸭瘟病毒原核表达单克隆抗体胶体金试纸条
- 鸭瘟病毒单抗的制备及胶体金试纸条检测方法的建立
- 为了建立鸭瘟病毒(DPV)胶体金快速检测方法,本研究原核表达了DPV-gB蛋白,以此为抗原制备抗DPV-gB蛋白单克隆抗体,利用制备的单抗建立胶体金检测方法.共获得4株抗DPV-gB蛋白的单抗,亚类分别为IgG2b、Ig...
- 赵丹丹杨国平刁有祥陈浩提金凤张璐张英李川川
- 关键词：鸭瘟病毒原核表达单克隆抗体胶体金试纸条
- H9亚型禽流感病毒HA基因的进化分析及鹅源H9N2亚型禽流感病毒对鹅的致病性研究
- 禽流感病毒(Avian Influenza Virus，AIV)能够感染多种禽类和包括人类在内的哺乳类动物。自1994年我国首次报道从广东鸡群中分离到H9N2亚型AIV以来，该病毒一直在我国家禽中广泛流行。虽然该病毒致病...
- 李川川
- 关键词：基因变异分子进化
- 文献传递
- 25株H9N2亚型禽流感病毒HA基因的遗传进化分析被引量：7
- 2016年
- 为了解山东省不同地区H9N2亚型禽流感病毒（AIV）的变异情况,本研究汇集了2012-2013年间从山东省不同地区发病家禽中分离到的25株H9N2亚型AIV,采用RT-PCR技术扩增其HA基因,并进行测序和遗传进化分析。结果显示,25株病毒HA基因的开放阅读框全长为1 683bp,共编码560个氨基酸,其核苷酸和氨基酸同源性分别为94.5%-100.0%和93.8%-100.0%;遗传进化分析表明25株病毒分离株均属于欧亚分支中的Y280-like亚分支;HA蛋白有7-9个潜在糖基化位点,其中218位糖基化位点缺失,145位新增糖基化位点;25株病毒分离株HA蛋白裂解位点均为RSSR↓GIF,符合低致病力AIV的特征。受体结合位点较保守,234位受体结合位点均为L（亮氨酸）,仅198位受体结合位点存在变异。分离的病毒株具有与人唾液酸α-2,6受体结合的特性,此类毒株的流行在公共卫生上值得重视。
- 程冰花王爱华刁有祥李川川张英张璐杨国平赵丹丹
- 关键词：H9N2亚型禽流感病毒HA基因遗传进化分析
- 25株H9N2亚型禽流感病毒HA基因的遗传进化分析
- 引言 禽流感(Avian Influenza,AI)是由A型流感病毒(Avian Influenza Virus type A)中的任何一型引起的一种感染综合征.血凝素(Hemagglutinin,HA)蛋白和神经氨酸酶...
- 程冰花王爱华刁有祥李川川
- 抗鸭坦布苏病毒NS5蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2016年
- 【目的】制备抗鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)NS5蛋白的单克隆抗体。【方法】将实验室保存的PET28a-NS5载体转化入Rosetta(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,利用纯化的鸭坦布苏病毒NS5蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,应用淋巴瘤细胞杂交技术结合有限稀释法制备单抗,并对单抗的特异性、反应性及其抗原表位和亚类进行鉴定。【结果】筛选获得2株稳定分泌针对DTMUV的NS5蛋白单抗的杂交瘤细胞,分别命名为A4D1和B4B8。此2株杂交瘤细胞诱导BALB/c小鼠的抗体效价均可达到1∶64 000。间接ELISA、Western blot和间接免疫荧光(IFA)检测结果表明,所获细胞分泌的抗体能与DTMUV及纯化的NS5蛋白发生特异性反应。经鉴定2株单抗的亚类均为IgG1型,通过叠加ELISA方法,初步判定2株单抗识别不同的抗原表位。【结论】成功获得了抗鸭坦布苏病毒NS5蛋白的单克隆抗体,为研究NS5蛋白的功能奠定了基础。
- 杨国平刁有祥赵丹丹陈浩提金凤张璐张英李川川
- 关键词：单克隆抗体
- 提高夏季种鸭蛋孵化率的技术细节被引量：1
- 2012年
- 种蛋孵化工作在整个养殖环节中至关重要,关系到种禽场及孵化场的经济效益。在生产中,孵化工作受众多因素影响,尤其是夏季种蛋受精率低,种蛋贮存困难而孵化条件不易控制。孵化场应根据夏季气候特点,及时采取相应措施,调整孵化过程中的孵化温度、湿度等技术参数,以提高夏季种鸭蛋的孵化质量。笔者通过在山东六和种鸭孵化场2个多月的实习,针对生产中影响孵化工作的众多因素,提出了相应的解决方案,以便为生产中避免不必要的经济损失提供指导性意见。
- 王洪刘刚李川川
- 关键词：种鸭蛋夏季孵化率种蛋受精率孵化场养殖环节
- 鸭瘟病毒单抗的制备及胶体金试纸条检测方法的建立
- 为了建立鸭瘟病毒(DPV)胶体金快速检测方法,本研究原核表达了DPV-gB蛋白,以此为抗原制备抗DPV-gB蛋白单克隆抗体,利用制备的单抗建立胶体金检测方法。共获得4株抗DPV-gB蛋白的单抗,亚类分别为IgG2b、Ig...
- 赵丹丹杨国平刁有祥陈浩提金凤张璐张英李川川
- 关键词：鸭瘟病毒原核表达单克隆抗体胶体金试纸条
- 25株H9N2亚型禽流感病毒HA基因遗传进化分析
- 为了掌握山东地区H9N2亚型禽流感病毒(AⅣ)的变异情况,本研究汇集了2012-2013年从山东地区的发病家禽中分离到的25株H9N2亚型AIV,采用RT-PCR技术扩增其HA基因,并进行测序和遗传进化分析.结果显示,2...
- 李川川刁有祥张英杨国平程冰花
- 关键词：血凝素基因基因测序遗传进化
- 文献传递
- 日龄因素对育成鸭坦布苏病毒易感性影响
- 引言 坦布苏病一般造成雏鸭和产蛋鸭大量发病,而育成鸭感染后,临床症状轻微.研究显示日龄因素可能会影响TMUV感染的严重程度.目的 研究不同周龄育成鸭对TMUV的易感性,为生产免疫提供依据.材料与方法 将560只育成鸭随机...
- 路云建刁有祥窦砚国张璐李川川
