杨国平
- 作品数：13 被引量：25H指数：3
- 供职机构：山东农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家水禽产业技术体系建设项目山东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- 鸭瘟病毒单抗的制备及胶体金试纸条检测方法的建立被引量：5
- 2016年
- 【目的】鸭瘟（DP）是由鸭瘟病毒（DPV）引起的一种急性、败血性传染病,以头颈肿胀、食道黏膜和泄殖腔黏膜出血、黄白色溃疡,头颈部皮下有黄白色胶冻样渗出为特征。该病一旦发生,发病急、死亡快、死亡率高,对养鸭业危害严重。快速诊断是控制鸭瘟的重要措施之一,可以及时确定病原,以便采取有效的防制手段。试验旨在建立鸭瘟病毒（DPV）胶体金快速检测方法。【方法】利用生物学软件Protean分析,选择鸭瘟病毒抗原表位较多的一段序列设计引物,PCR扩增目的基因。连接到载体pMD-18T上,测序正确后再连接到原核表达载体pET-28a上。将获得的重组质粒转化至Rosetta感受态细胞中进行诱导表达。表达的蛋白经纯化后测其浓度并经Western blotting鉴定分析。以表达的DPV-gB蛋白作为抗原,免疫7周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA筛选及亚克隆,获得DPV-gB特异性单克隆抗体。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,以制备的H6F6单抗作为标记抗体（标记的最适pH为8.0—8.5,最佳标记浓度为15倍原液稀释）,将纯化的A8D7单抗（浓度为2倍原液稀释）和羊抗鼠IgG（浓度为10倍稀释）包被在硝酸纤维素膜（NC）上,分别作为检测线和质控线,经条件优化建立了鸭瘟病毒胶体金试纸条检测方法。【结果】共获得4株能稳定分泌抗DPV-gB蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为A8D7、E6C3、H11F8、H6F6。间接ELISA检测腹水效价分别为1：10^3、1：10^3、1：10^5、1：10^3。亚类鉴定结果分别为IgG2b、IgG2a、IgG2b、IgG1,轻链均为kappa链。Western blotting结果显示4株单抗均能与DPV-gB蛋白特异性结合。IFA结果显示制备的4株单抗是针对DPV产生的。建立的胶体金试纸条方法能够特异性地检测鸭瘟病毒,与鸭坦布苏病毒、H9N2亚型禽流感病毒、呼肠孤病毒、减蛋综合征病毒无反应。阳性尿�
- 赵丹丹杨国平刁有祥陈浩提金凤张璐张英李川川
- 关键词：鸭瘟病毒原核表达单克隆抗体胶体金试纸条
- 坦布苏病毒在种鸭中的垂直传播被引量：9
- 2016年
- 为探究坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)能否垂直传播,57只38周龄的健康樱桃谷种鸭分为A、B、C 3组,每组15只母鸭、4只公鸭。A组母鸭、B组公鸭静脉接种坦布苏病毒TMUV-SDSG株2.5 mL/只(ELD50=10-2.37/0.2mL);C组接种等量生理盐水。各组隔离饲养,收集种蛋进行孵化。无菌采集孵化不同阶段的死亡鸭胚的胚脑、尿囊液或卵黄膜以及新生雏鸭和死亡弱雏的脑组织,进行病毒分离和半套式RT-PCR检测。结果显示,在种蛋的卵黄膜,死亡鸭胚的尿囊液、卵黄膜和胚脑,新生雏鸭和死亡弱雏的脑组织中均能检测并分离到TMUV。其中,A组种蛋、死亡鸭胚、1日龄雏鸭、15日龄雏鸭和死亡雏鸭中TMUV阳性率分别为60%,67.44%,35.48%,16.67%和100%。B组种蛋、死亡鸭胚、1日龄雏鸭、15日龄雏鸭和死亡雏鸭中TMUV阳性率分别为50%,51.35%,46.88%,10%和71.43%。C组各样品中均未检测到TMUV。结果表明,TMUV可在种鸭中经种蛋垂直传播。
- 张英赵丹丹刁有祥陈浩提金凤张璐杨国平
- 关键词：种鸭
- 25株H9N2亚型禽流感病毒HA基因的遗传进化分析被引量：7
- 2016年
- 为了解山东省不同地区H9N2亚型禽流感病毒（AIV）的变异情况,本研究汇集了2012-2013年间从山东省不同地区发病家禽中分离到的25株H9N2亚型AIV,采用RT-PCR技术扩增其HA基因,并进行测序和遗传进化分析。结果显示,25株病毒HA基因的开放阅读框全长为1 683bp,共编码560个氨基酸,其核苷酸和氨基酸同源性分别为94.5%-100.0%和93.8%-100.0%;遗传进化分析表明25株病毒分离株均属于欧亚分支中的Y280-like亚分支;HA蛋白有7-9个潜在糖基化位点,其中218位糖基化位点缺失,145位新增糖基化位点;25株病毒分离株HA蛋白裂解位点均为RSSR↓GIF,符合低致病力AIV的特征。受体结合位点较保守,234位受体结合位点均为L（亮氨酸）,仅198位受体结合位点存在变异。分离的病毒株具有与人唾液酸α-2,6受体结合的特性,此类毒株的流行在公共卫生上值得重视。
- 程冰花王爱华刁有祥李川川张英张璐杨国平赵丹丹
- 关键词：H9N2亚型禽流感病毒HA基因遗传进化分析
- 坦布苏病毒NS5蛋白单克隆抗体的制备与鉴定及快速检测胶体金试纸条方法的建立
- 2010年春夏之交，我国江浙和山东等地区均报道了以一种引起鸭产蛋率大幅下降、生长发育迟缓、卵巢出血为主要症状的急性传染病，之后广泛传播到我国的大部分地区，并给蛋鸭的养殖业造成了很大的经济损失。感染鸭群主要表现为采食量和产...
- 杨国平
- 关键词：单克隆抗体胶体金试纸条
- 文献传递
- 一种快速诊断坦布苏病毒的胶体金试纸条
- 本发明提供了一种快速诊断坦布苏病毒的胶体金试纸条，包括PVC底板，所述的底板一端设置有样品垫，样品垫的一端通过金标垫与硝酸纤维素膜相连接，硝酸纤维素膜的另一端与吸水垫相连接，所述的金标垫上包被有抗坦布苏病毒E蛋白单克隆抗...
- 刁有祥陈浩冯强杨国平唐熠张英
- 文献传递
- 一种快速检测鸭坦布苏病毒免疫胶体金试纸条方法
- 坦布苏病毒感染是我国水禽养殖地区新发生的一种传染病.感染鸭主要表现鸭产蛋率大幅下降，食欲下降，发热，生长发育迟缓，卵巢出血等.给鸭的养殖业造成了很大的经济损失.因此，建立一种高效的检测方法是防控该病的重要措施.本研究建立...
- 于观留杨国平唐熠刁有祥
- 关键词：病毒检测胶体金免疫层析
- 鸭瘟病毒单抗的制备及胶体金试纸条检测方法的建立
- 为了建立鸭瘟病毒(DPV)胶体金快速检测方法,本研究原核表达了DPV-gB蛋白,以此为抗原制备抗DPV-gB蛋白单克隆抗体,利用制备的单抗建立胶体金检测方法.共获得4株抗DPV-gB蛋白的单抗,亚类分别为IgG2b、Ig...
- 赵丹丹杨国平刁有祥陈浩提金凤张璐张英李川川
- 关键词：鸭瘟病毒原核表达单克隆抗体胶体金试纸条
- 抗鸭坦布苏病毒NS5蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
- 2016年
- 【目的】制备抗鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)NS5蛋白的单克隆抗体。【方法】将实验室保存的PET28a-NS5载体转化入Rosetta(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,利用纯化的鸭坦布苏病毒NS5蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,应用淋巴瘤细胞杂交技术结合有限稀释法制备单抗,并对单抗的特异性、反应性及其抗原表位和亚类进行鉴定。【结果】筛选获得2株稳定分泌针对DTMUV的NS5蛋白单抗的杂交瘤细胞,分别命名为A4D1和B4B8。此2株杂交瘤细胞诱导BALB/c小鼠的抗体效价均可达到1∶64 000。间接ELISA、Western blot和间接免疫荧光(IFA)检测结果表明,所获细胞分泌的抗体能与DTMUV及纯化的NS5蛋白发生特异性反应。经鉴定2株单抗的亚类均为IgG1型,通过叠加ELISA方法,初步判定2株单抗识别不同的抗原表位。【结论】成功获得了抗鸭坦布苏病毒NS5蛋白的单克隆抗体,为研究NS5蛋白的功能奠定了基础。
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- 关键词：单克隆抗体
- 鸭瘟病毒gB蛋白单克隆抗体的制备被引量：1
- 2016年
- 【目的】制备鸭瘟病毒(DPV)gB蛋白单克隆抗体,为建立DPV快速诊断方法及进一步鉴定DPV的抗原表位奠定基础。【方法】克隆DPVgB基因,构建其表达载体并进行原核表达,纯化DPV gB蛋白,以其作为抗原免疫8周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,进行间接ELISA及亚克隆筛选,并对单抗亚类及抗原性进行鉴定。【结果】PCR扩增出915bp的目的基因,成功连接于pET-28a载体,并转化大肠杆菌Rosetta进行诱导表达,获得4株稳定分泌抗DPV gB蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为A8D7、E6C3、H11F8、H6F6,间接ELISA检测其腹水效价分别为1∶103、1∶103、1∶105、1∶103,亚类鉴定结果分别为IgG2b、IgG2a、IgG2b、IgG1,轻链均为kappa链。Western blot结果显示4株单抗均能与DPV gB蛋白特异性结合,IFA结果表明4株单抗是针对DPV产生的。【结论】成功获得了特异性针对DPV gB蛋白的单克隆抗体。
- 赵丹丹刁有祥杨国平陈浩提金凤张璐
- 关键词：鸭瘟病毒单克隆抗体
- 一种快速诊断坦布苏病毒的胶体金试纸条
- 本发明提供了一种快速诊断坦布苏病毒的胶体金试纸条，包括PVC底板，所述的底板一端设置有样品垫，样品垫的一端通过金标垫与硝酸纤维素膜相连接，硝酸纤维素膜的另一端与吸水垫相连接，所述的金标垫上包被有抗坦布苏病毒E蛋白单克隆抗...
- 刁有祥陈浩冯强杨国平唐熠张英
