朱立鑫
- 作品数：15 被引量：35H指数：4
- 供职机构：江西科技师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江西省教育厅科学技术研究项目江西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程医药卫生农业科学化学工程更多>>
- 赭曲霉毒素A无毒ELISA检测
- 2015年
- [目的]研究赭曲霉毒素A毒素的替代ELISA检测。[方法]采用噬菌体展示技术筛选赭曲霉毒素A模拟表位,得到赭曲霉毒素A(OTA)模拟表位序列为IR(V)PMV(L)XX(X为任意氨基酸),化学合成法体外合成OTA模拟表位肽,通过化学交联法将OTA模拟表位肽与BSA连接,做成无毒抗原,建立无毒OTA间接竞争ELISA检测方法,同样通过化学交联法将OTA多肽-BSA与HRP相联,建立OTA无毒直接竞争ELISA检测方法。[结果]OTA多肽-BSA间接竞争ELISA检测50%抑制浓度(IC_(50))为5 ng/ml,OTA多肽-BSAHRP一步直接竞争ELISA检测法IC_(50)为2.5 ng/ml,二步直接竞争ELISA检测法IC_(50)为2 ng/ml。[结论]OTA模拟表位多肽能用于代替OTA毒素作为检测抗原使用,并建立无毒ELISA检测方法。
- 裘雪梅朱立鑫刘敏周双铭
- 关键词：赭曲霉毒素A模拟表位ELISA检测
- 建立免疫亲和柱联合高效液相色谱法检测苏丹红Ⅰ
- 本研究采用环氧氯丙烷活化琼脂糖凝胶4FF(Sepharose4FF),通过ε-氨基己酸(AHA)修饰,获得免疫亲和基质,并与抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体偶联,制备苏丹红Ⅰ免疫亲和柱,同时建立了免疫亲和柱联高效液相色谱法(Immu...
- 朱立鑫
- 关键词：环氧氯丙烷高效液相色谱食品检测
- 基于赭曲霉毒素A模拟表位的无毒素ELISA方法被引量：7
- 2010年
- 以抗赭曲霉毒素A的单克隆抗体亲和筛选随机7肽库,ELISA方法鉴定阳性克隆,DNA测序推导出赭曲霉毒素A的模拟表位肽,共获得了11个模拟表位肽,共有序列为IRPMV。将化学合成的模拟表位肽与载体BSA偶联后,以之建立无毒素的竞争酶联免疫检测方法,并与常规酶联免疫吸附检测方法及高效液相色谱比较。结果表明:以赭曲霉毒素A模拟表位建立的竞争ELISA方法的线性范围和检测下限都与常规竞争ELISA方法结果相近,样品测试结果与常规竞争ELISA方法及高效液相色谱一致,显示良好的应用前景。
- 刘仁荣徐玲裘雪梅陈兴龙朱立鑫
- 关键词：噬菌体展示肽库赭曲霉毒素A
- 一种改性壳聚糖的生产方法
- 本发明属于生物工程领域，涉及壳聚糖改性，本发明通过加入蛋白或多肽，加入谷氨酰胺转胺酶，调节pH，充分反应后，去除沉淀，脱盐，干燥进行改性。本发明技术方案生产的改性壳聚糖水溶性好，pH3-10不沉淀，粘度小，还保留壳聚糖原...
- 刘仁荣朱立鑫
- 化学发光酶联免疫法检测苏丹红Ⅰ被引量：10
- 2015年
- 为检测食品中苏丹红Ⅰ残留,建立间接竞争化学发光酶联免疫分析(chemiluminescent enzyme immunoassay,CLEIA)法。通过优化包被抗原中本抗原与载体物质的量比、包被抗原质量浓度、抗体稀释比例,建立竞争抑制曲线。线性范围为0.156~5 ng/m L,最低检测限为0.078 9 ng/m L,IC50为0.679 ng/m L。CLEIA回收率为75.08%~112.18%,变异系数为8.89%~15.61%;通过与酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法进行比较,在相同抗原抗体质量浓度条件下,CLEIA法测定的IC50较ELISA方法降低30%,具有较高的灵敏度。
- 范艳孟玮朱立鑫刘仁荣许龙裘雪梅杨帆帆
- 关键词：酶联免疫吸附分析
- 丝状噬菌体pⅧ展示系统表达赭曲霉毒素A模拟表位及应用研究被引量：1
- 2012年
- 目的传统赭曲霉毒素A(OTA)竞争抗原毒性强、成本高、制备难度大。将OTA模拟表位展示于丝状噬菌体pⅧ表面,获得无毒、易于制备的OTA竞争抗原替代物。方法构建带有OTA模拟表位的重组噬菌粒pC89-COTA,为了提高OTA模拟表位与抗体的结合率,在OTA模拟表位序列5'端引入了肠激酶酶切位点。噬菌粒转化进大肠杆菌XL1-blue后再经野生KM13噬菌体感染,获得带有OTA模拟表位的重组噬菌体。用该噬菌体代替竞争抗原建立OTA的无毒ELISA分析方法。结果成功表达出带有OTA模拟表位的重组噬菌体,经肠激酶酶切的OTA模拟表位噬菌体与OTA抗体的结合效率显著高于未酶切的噬菌体。利用酶切后的噬菌体建立OTA的无毒ELISA分析方法,其最低检出限为100pg/ml,线性范围为250pg/ml～1000pg/ml。进行加标回收实验,回收率为99.8%～112.3%,相对标准偏差为8.19%～11.64%,测试16份市售样品,阳性率为31.25%。结论成功表达了OTA模拟表位噬菌体,建立了OTA的无毒ELISA检测方法。
- 陈兴龙徐玲刘仁荣裘雪梅朱立鑫
- 关键词：噬菌体展示赭曲霉毒素A酶联免疫吸附测定
- 脱氧雪腐镰刀菌烯醇模拟表位的2种融合蛋白的表达及其在无毒酶联免疫吸附方法中的应用
- 2014年
- 脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol,DON）的模拟表位（CDON）,是从噬菌体展示随机肽库中淘选出来的七肽,可模拟DON与抗DON抗体结合.为了在酶联免疫吸附方法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）中用重组蛋白替代DON偶联物,以期开发出能代替偶联DON人工抗原的无毒检测DON的ELISA方法,通过构建重组表达载体pGEX-CDON和pC89S4-CDON,并在大肠杆菌表达系统中分别表达和纯化GST-CDON和pⅧ-CDON融合蛋白,比较测定2种融合蛋白与抗DON抗体的结合效果.ELISA方阵滴定结果显示：纯化的融合蛋白具有良好的反应原性.在间接竞争性ELISA中,当以融合蛋白GST-CDON为包被抗原时,检测限为31 ng/mL,线性范围为31～500 ng/mL,IC50为194 ng/mL,加标回收率为54.1％～65.4％,变异系数为6.28％～13.37％;当以融合蛋白pⅧ-CDON为包被抗原时,检测限为15 ng/mL,线性范围为15～500 ng/mL,IC50为94 ng/mL,加标回收率为81.7％～89.0％,变异系数为3.15％～7.55％.
- 徐富勇孟玮刘仁荣徐玲裘雪梅朱立鑫
- 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇模拟表位质粒
- 辣椒粉中苏丹红Ⅰ的免疫亲和柱-高效液相色谱法检测被引量：1
- 2013年
- 目的建立用免疫亲和柱分离净化、高效液相色谱法测定食品中苏丹红I的方法。方法将制备好的苏丹红Ⅰ单克隆抗体与经修饰的琼脂糖凝胶Sepharose-4FF偶联,制成苏丹红Ⅰ免疫亲和柱,样品经乙腈提取,并用PBS缓冲液稀释成20%乙腈-PBS溶液后,过实验室自制的苏丹红Ⅰ免疫亲和柱净化,建立IAC-HPLC法检测苏丹红Ⅰ含量。结果测得辣椒粉中SudanI的回收率为29.12%～90.32%,并随机抽检了市售的及自种的四种辣椒粉,检测结果均为阴性。结论成功制备了苏丹红Ⅰ免疫亲和柱,并建立了免疫亲和柱-HPLC法测定辣椒粉中的苏丹红I的方法。
- 裘雪梅朱立鑫徐玲徐富勇刘仁荣
- 关键词：免疫亲和柱高效液相色谱
- 基于噬菌体展示技术的赭曲霉毒素A高密度模拟表位的表达研究被引量：2
- 2012年
- 通过噬菌体展示技术展示赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)模拟表位。将带有OTA模拟表位序列的寡核苷酸双链克隆至载体pC89-COTA。利用噬菌体展示技术,通过优化辅助噬菌体感染复数、IPTG加入的时间与剂量等培养条件获得表达有高密度OTA模拟表位的噬菌体。再通过酶联免疫吸附检测(ELISA)方法比较不同的条件下的表达效果,探索最优表达条件。结果表明:成功获得高密度表达OTA模拟表位的噬菌体,辅助噬菌体感染复数与IPTG加入量对模拟表位表达量影响不大,IPTG加入时间对模拟表位表达量有较大影响,优化后模拟表位表达量大大高于优化前。
- 陈兴龙徐玲刘仁荣裘雪梅朱立鑫
- 关键词：噬菌体展示赭曲霉毒素A
- 次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷型产抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体杂交瘤细胞的筛选被引量：1
- 2012年
- 目的筛选次黄嘌呤-氨基喋呤-胸腺嘧啶(HAT)敏感型产抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体杂交瘤细胞株,为双特异性抗体的制备作好准备。方法在培养瓶中培养产抗苏丹红I单克隆抗体杂交瘤细胞株H6,取长到对数生长期的细胞,加入1.25μg/ml的8-氮鸟嘌呤,继续培养,当细胞长到60%左右时,弃去一部分细胞,加入2.5μg/ml的8-氮鸟嘌呤,继续培养,重复以上操作,倍比提高8-氮鸟嘌呤的含量,直至8-氮鸟嘌呤浓度达到20μg/ml,取细胞上清ELISA检测其产抗体情况。结果成功诱导筛选到HAT敏感的次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷型杂交瘤细胞6株,均能分泌抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体。结论该方法能成功筛选HAT敏感型抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体杂交瘤细胞。
- 裘雪梅刘仁荣徐玲朱立鑫
- 关键词：杂交瘤
