方春
- 作品数：10 被引量：32H指数：3
- 供职机构：浙江大学更多>>
- 发文基金：“十一五”国家科技支撑计划浙江省科技厅公益技术研究农业项目留学人员科技活动项目择优资助经费更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学轻工技术与工程更多>>
- 单核细胞增生李斯特菌谱系Ⅲ强毒株与弱毒菌株比较基因组及致病力差异机制
- 单核细胞增生李斯特菌（简称单增李斯特菌，Listeria monocytogenes）为革兰氏阳性无芽孢杆菌，对环境耐受性强，可以在宽泛的pH(4.5-9)和温度(0-45℃)以及高盐(10％ NaCl)条件存活并增殖。...
- 方春
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌弱毒菌株比较基因组学致病力
- 虾仁中副溶血弧菌灭活动力学模型的建立被引量：2
- 2013年
- 【目的】建立醋酸、乳酸和柠檬酸对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)在生理盐水和虾仁中的灭活动力学模型,指导有机酸应用于虾仁加工过程中的抑菌保鲜。【方法】测定副溶血弧菌在生理盐水和新鲜虾仁中经不同浓度有机酸溶液浸泡处理10min后的存活率P,虾仁中的细菌存活率与有机酸浓度呈良好的线性关系;生理盐水中的存活率通过ln[P/(1-P)]转换成logit(P),与有机酸浓度之间的线性拟合度显著提高。通过拟合方程计算有机酸的50%和90%有效抑菌浓度(EC50和EC90),比较不同有机酸的抑菌能力以及在不同基质中的作用差异。【结果】副溶血弧菌在生理盐水中对有机酸较为敏感,在虾仁中的杀菌效果相对较差,虾仁中乳酸与柠檬酸的有效抑菌浓度(EC50或EC90)是生理盐水中浓度的160-200倍,醋酸的浓度比其在生理盐水中的浓度高出70倍以上,表明食品基质对有机酸的抑菌作用有显著影响,但采用的有机酸在虾仁中的EC90并未超过美国农业部规定的2.5%上限。以有机酸的总摩尔浓度比较,柠檬酸的抑菌能力最强,乳酸次之,醋酸最弱。【结论】抑菌剂效应呈非线性时,细菌存活率进行对数转换,可显著提高线性拟合度R2;食品基质对有机酸的抑菌作用有明显影响;应用浓度为2%的3种有机酸可以有效降低水产品中弧菌的污染量,提高产品的卫生质量。
- 刘媛方春程昌勇方维焕
- 关键词：虾仁副溶血弧菌有机酸
- 主要食源性致病菌的PCR检测方法优化及在冷鲜猪肉病原污染调查中的应用被引量：3
- 2012年
- 为优化针对主要食源性致病菌的PCR鉴定体系,以及了解猪肉制品中主要食源性致病菌的污染状况,对文献中报道的沙门氏菌属(鼠伤寒沙门氏菌及肠炎沙门氏菌)的5套PCR体系及大肠杆菌O157:H7的6套PCR体系进行比较分析,结果筛选出2套最优体系。基于这两套体系以及本实验室研究人员建立的单增李斯特菌的特异性检测方法,对从杭州市场上采集的50份常温鲜猪肉及150份冷鲜猪肉中单增李斯特菌、沙门氏菌及大肠杆菌O157:H7的污染状况进行调查。调查结果显示,200份样品中致病菌总检出率为21%。冷鲜猪肉中的致病菌检出率(24.7%)明显高于常温鲜猪肉(10%)。单增李斯特菌在常温鲜猪肉中的检出率为2%,而在冷鲜猪肉中检出率达14.7%;沙门氏菌在冷鲜猪肉中的检出率(11.3%)亦高于常温鲜猪肉(8.0%);大肠杆菌O157:H7均未检出。在检出的沙门氏菌中,有4株为鼠伤寒沙门氏菌,均来自冷鲜猪肉。本研究结果提示,市场上冷鲜猪肉存在微生物性安全隐患,这可能是由于其较为复杂的生产流通环节受到污染所致。
- 张培培刘媛方春单颖陈健舜方维焕
- 关键词：食源性致病菌单增李斯特菌大肠杆菌O157:H7
- 人兽共患单核细胞增生性李斯特菌致病力及其抗酸机制
- 单核细胞增生性李斯特菌是重要的食源性人兽共患病原,具有较强的环境抗性,易污染各类食品和青贮饲料,引发人和动物的李斯特菌病.本文结合本实验室的工作和国内外研究现状,概要叙述单增李斯特菌在食品中的污染、分子多样性与致病力以及...
- 程昌勇陈健舜方春夏叶单颖宋厚辉方维焕
- 关键词：单增李斯特菌致病力食品污染
- 文献传递
- 斑马鱼胚胎的简易无菌培养体系及单增李斯特菌感染试验
- 2016年
- 【目的】斑马鱼的生活环境中微生物众多,会激活其先天免疫系统,从而影响相关试验结果,因此需建立适合于感染与免疫研究的斑马鱼无菌培养体系。【方法】建立了基于受精卵短时消毒和温控正压无菌隔离器的培养流程;根据无菌动物标准对斑马鱼胚胎及其生活环境进行微生物检测;并通过定量PCR检测无菌斑马鱼先天免疫相关基因(TLRs)表达水平;利用无菌斑马鱼胚胎模型进行了单增李斯特菌感染试验。【结果】本研究成功建立了斑马鱼培育的无菌操作系统,无菌检验结果显示其生活环境及体内不含病原微生物,先天免疫分子TLRs表达量较低或不表达,而常规培养斑马鱼以及浸泡感染单增李斯特菌的无菌斑马鱼中这些基因转录水平较高。无菌斑马鱼对单增李斯特菌强毒株EGDe静脉注射感染很敏感,100 CFU感染量能导致鱼在1周内全部死亡,而其mpl或plc B基因缺失株感染后致死率显著下降(分别为70%和40%)。巨噬细胞在亲本株EGDe浸泡感染的鱼肠道周围聚集,而mpl或plc B基因缺失株感染的鱼中几乎观察不到这一聚集现象。【结论】通过简易培养体系获得的无菌斑马鱼胚胎可用于先天免疫和病原感染机制等研究。
- 单颖张亦凯程昌勇方春彭金荣方维焕
- 关键词：先天免疫单核细胞增生李斯特菌
- 单增李斯特菌膜裂解相关基因缺失突变株的构建及生物学特性鉴定被引量：9
- 2016年
- 拟探明单核细胞增多性李斯特菌(单增李斯特菌)分离株M7可能的低致病力机制。利用SOE-PCR及同源重组法构建M7膜裂解相关基因hly及plcB单缺失(M7-Δhly和M7-ΔplcB)及双缺失突变株(M7-Δhly/plcB),比较它们与亲本株的生物学特性差异。结果如下:PCR及反转录PCR表明突变株构建成功。突变株M7-Δhly和M7-Δhly/plcB因hly缺失致其溶血活性丧失。plcB缺失突变株M7-ΔplcB和M7-Δhly/plcB无可见溶脂活性。单缺失突变株M7-ΔplcB、M7-Δhly与M7具有相似的细胞黏附及增殖能力(P>0.05)。MOI为1 000时,双缺失突变株M7-Δhly/plcB对Caco-2细胞毒性最低(11.10%),M7-Δhly次之(23.53%)(P<0.05)。空斑试验表明菌株M7和M7-ΔplcB仅能在无庆大霉素培养基中形成空斑。hly及plcB缺失致单增李斯特菌对免疫抑制小鼠毒力降低。单增李斯特菌M7低致病力可能与hly及plcB的高水平表达有关,致细菌对宿主细胞毒性增强而从细胞内逸出,使其不能躲避宿主免疫系统而被清除。
- 江玲丽高有领周向阳白帆方春钱国英方维焕
- 关键词：单增李斯特菌细胞毒性生物学特性
- Mmp-9通过非蛋白酶作用介导单增李斯特菌感染斑马鱼巨噬细胞向脑室迁移
- 单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李斯特菌)是四大食源性病原之一,在环境中广泛存在,且对环境的耐受能力较强。人和动物食用了单增李斯特菌污染的食物后,细菌进入消化道并跨越宿主肠道屏...
- 单颖张亦凯方春辛永萍方维焕
- 单核细胞增生李斯特菌抗酸应激机制被引量：3
- 2017年
- 单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李斯特菌)是重要的人畜共患食源性病原,在青贮饲料、发酵食品、宿主胃内以及巨噬细胞吞噬体内都会遭遇酸应激。该菌有多种抗酸应激系统,如F0F1-ATPase、谷氨酸脱羧酶(Glutamate decarboxylase system,GAD)、精氨酸脱亚胺酶(Arginine deiminase,ADI)、鲱氨酸脱亚胺酶(Agmatine deiminase,Ag DI)系统等。在环境pH(pHex)4.5条件下可维持其细胞内pH(pHi)稳态,在pHex 3.5时仍能存活;用温和酸应激(pHex 4.5)预处理单增李斯特菌,可以通过酸耐受反应(Acid tolerance response)提高其在致死性酸性环境中的存活率,这一过程受σB正调控,即σB激活可以保护单增李斯特菌应对多种环境应激。因此,σB可以作为新型抗菌药物的靶标。更为重要的是,弱酸性发酵食品要严格控制李斯特菌的污染,以降低消费者的感染风险。
- 何珂何珂方春方春方维焕
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌
- Mmp-9通过非蛋白酶作用介导单增李斯特菌感染斑马鱼巨噬细胞向脑室迁移
- 单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李斯特菌)是四大食源性病原之一,在环境中广泛存在,且对环境的耐受能力较强.人和动物食用了单增李斯特菌污染的食物后,细菌进入消化道并跨越宿主肠道屏...
- 单颖张亦凯方春辛永萍方维焕
- 关键词：巨噬细胞基质金属蛋白酶MMP-9
- 文献传递
- 单增李斯特菌在冷鲜猪肉中的生长预测模型比较被引量：12
- 2011年
- 【目的】探讨单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)在冷鲜猪肉中的生长及现有预测软件GP(Growth Predictor)、PMP(Pathogen Modeling Programme)及CP(ComBase Predictor)对LM在冷鲜猪肉中生长的预测准确性。【方法】测定LM在4℃、8℃、12℃及16℃冷鲜猪肉中的生长,并用DMFit软件对生长数据进行拟合,计算各个温度点下的迟滞期(Lag phase duration,LPD)、生长率(Growth rate,GR)、最大生长密度(Maximum population density,MPD),同时用3种预测模型对相同条件下LM在猪肉中的生长进行预测,将实测值与预测值进行比较分析。【结果】冷鲜猪肉在16℃,经过2.6h LM即进入对数生长期。从8℃提高至12℃时,LM在冷鲜猪肉中的生长率从0.017log(cfu/g).h-1增至0.038log(cfu/g).h-1。在4℃-16℃,PMP预测的GR要比实测值低,而LPD则高于实测值。GP在8℃及以上的温度范围内,所预测LPD比实测值偏高。3种预测模型中,GP对GR的预测稍高于实测值,偏差因子(Bf)为1.01,准确因子(Af)为1.38;CP对LPD的预测值与实测值更为接近,Af及Bf分别为4.33及2.83。【结论】在冷鲜猪肉生产和销售过程中,严格控制温度尤为重要。PMP的预测较为保守,不适于冷鲜猪肉中LM生长的预测;建议用GP对GR进行预测,而CP对LPD的预测仅作为参考。
- 张培培刘媛方春俞盈陈健舜方维焕
- 关键词：单增李斯特菌冷鲜猪肉
