徐维加
- 作品数：13 被引量：23H指数：3
- 供职机构：云南出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家高技术研究发展计划广东省重大科技专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 荧光定量RT-PCR检测猪日本脑炎病毒被引量：6
- 2007年
- 通过RT-PCR方法克隆了日本脑炎病毒(JEV)N基因片段序列,构建重组质粒作为标准阳性模板,同时根据GenBank中的靶序列设计了荧光定量RT-PCR的1对引物和1条TaqMan探针。通过条件优化,以定量的10倍系列稀释的质粒为标准品进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了JEV检测的荧光定量PCR方法。结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μL,线性范围为109～100,达10个数量级;对起始浓度为1.0×109、1.0×108和1.0×107拷贝/μL的标准品的最终实际测得值(Ct)分别为17.33、20.52和23.90,变异系数分别为0.54%、0.74%和0.53%,均小于5%。对阳性组织病料的检测表明该方法的灵敏度高出常规PCR,与套式PCR(nested-PCR,nPCR)具有相近的灵敏度。
- 孙彦伟刘建营徐维加田云王晶钰宋长绪
- 关键词：日本脑炎病毒荧光定量PCRTAQMAN探针
- 基于TaqMan探针的猪圆环病毒1型实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：5
- 2007年
- 采用PCR方法克隆了猪圆环病毒1型(PCV1)ORF2基因,构建了重组质粒pMD-ORF2并将其作为标准阳性模板。通过对反应条件进行优化,以定量的10倍系列稀释的质粒pMD-ORF2为标准品进行荧光定量PCR扩增,建立了检测PCV1的荧光定量PCR方法。结果显示,该方法的检测灵敏度可达1.0×101拷贝/μL;对起始浓度为1.0×107、1.0×106、1.0×105拷贝/μL标准品的最终实际测得值分别为1.001×107、0.869×106和0.988×105拷贝/μL,变异系数分别为4.758%、1.865%和3.836%。表明,此方法具有良好的准确性和重现性。
- 张福良宋长绪朱道中徐维加
- 关键词：猪圆环病毒1型实时荧光定量PCRTAQMAN探针
- BTV VP7抗原基因的表达及抗原性研究
- 花群义徐自忠徐维加董俊杨晶焰杨云庆贾建军周晓黎肖荣海
- 该项目研究成果是应用基因工程技术，将BTV VP7蛋白基因克隆到pBAD/Thio-TOPO表达载体中，构建的BTV VP7蛋白基因表达重组质粒，获得了BTV VP7蛋白稳定、高效表达的工程菌株，建立起基因工程生产BTV...
- 关键词：
- 关键词：抗原基因蓝舌病毒
- pBAD原核高效表达VSV N蛋白群特异性抗原的研究
- 花群义徐自忠徐维加董俊杨晶焰杨云庆贾建军
- 1、该项目进行了VSV蛋白基因的克隆、序列分析、表达及在ELISA中的应用。成功构建了水泡性口炎病毒编码群特异性抗原N基因重组表达载体。经L-Arabinose诱导表达，可稳定、高效地表达N蛋白抗原。其表达产量约占菌体总...
- 关键词：
- 关键词：特异抗原水泡性口炎病毒动物病毒
- BTVVP7抗原基因的表达及抗原性研究
- 花群义徐自忠徐维加董俊杨晶焰杨云庆贾建军
- 该项目研究应用基因工程技术，将BTVVP7蛋白基因克隆到pBAD/Thio-TOPO表达载体中，构建的BTVVP7蛋白基因表达重组质粒，获得了BTVVP7蛋白稳定、高效表达的工程菌株，建立起基因工程生产BTVVP7蛋白抗...
- 关键词：
- 关键词：抗原基因淋巴细胞杂交瘤蓝舌病病毒动物检疫
- 华南地区猪圆环病毒1型与2型感染情况调查及相互关系被引量：3
- 2007年
- 根据已发表的猪圆环病毒1型(PCV-1)与猪圆环病毒2型(PCV-2)的全基因组序列,设计4对特异性引物,用套式PCR方法对广东地区的规模养猪场或个体养殖户送检的144份猪血清进行了PCV- 1与PCV-2病毒检测。结果显示PCV-1阳性血清21份,PCV-2阳性血清40份,PCV-1与PCV-2均为阳性的血清7份,PCV-1阳性率为14.6％,PCV-2阳性率为27．8％;PCV-1与PCV-2均为阳性的阳性率为4．9％,从数据上的比较可知PCV-2的感染率高于PCV-1的感染率。说明PCV-2感染比较普遍,患病猪群中也存在一定比例的PCV-1病毒感染。
- 孙丽华徐维加刘燕玲蒋智勇郝永清宋长绪李旭阳
- 羊痘诊断和预防的研究进展被引量：4
- 2007年
- 羊痘又名羊“天花”,是所有动物痘病最为严重的一种,严重影响国际贸易和养羊业的发展。本文主要从羊痘的诊断和预防疫苗方面做一综述。现在已有了一组针对羊痘的简单而高效检测方法和诊断试剂用于实验室诊断,但各有千秋。目前控制该病最有效的方法还是使用高效疫苗对易感动物进行免疫接种。利用羊痘病毒基因组做载体构建重组疫苗来同时预防小反刍兽的其他疾病,具有很大的潜力。
- 徐维加康文玉徐自忠
- 关键词：羊痘病毒山羊痘绵羊痘疫苗
- 猪圆环病毒2型ORF2和ORF1-2串联基因重组腺病毒对小鼠的免疫效果被引量：1
- 2008年
- 为了研究含有猪圆环病毒2型(porcine circovirus type2,PCV2)基因的重组腺病毒作为基因工程疫苗的潜在应用价值,利用本实验室构建的PCV2的ORF2和ORF1-2串联基因的重组腺病毒对小鼠进行了免疫并对其免疫效果进行了研究。分别用表达ORF2和OFR1-2基因的重组腺病毒Ad-ORF2、Ad-ORF1-2经肌肉途径免疫Balb/c小鼠,对免疫后小鼠的血清抗体和脾淋巴细胞中各细胞亚群的比例及其增殖反应、自然杀伤活性和特异性杀伤活性进行了检测和比较。结果表明,用表达ORF2基因和ORF1-2串联基因的重组腺病毒Ad-ORF2、Ad-ORF1-2经肌肉途径免疫Balb/c小鼠后,随着免疫次数的增加,小鼠产生的针对PCV2ORF2基因的特异性抗体水平不断升高,第3次免疫后2周达到最高,但第3次免疫后4周有所下降;免疫重组腺病毒的试验组小鼠的脾淋巴细胞增殖活性、CTL杀伤活性和NK细胞杀伤活性与免疫空载体的对照组和免疫PBS的对照组比较均有显著的差异(P<0.05)。本研究为PCV-2基因工程疫苗的深入研究及应用奠定了基础。
- 刘建营丛丽媛赵路易王建龙王晶钰徐维加宋长绪
- 关键词：猪圆环病毒ORF2基因重组腺病毒免疫效果
- pBAD原核高效表达VSVN蛋白群特异性抗原的研究
- 花群义徐自忠徐维加董俊杨晶焰杨云庆贾建军
- 1、该项目进行了VSV蛋白基因的克隆、序列分析、表达及在ELISA中的应用。成功构建了水泡性口炎病毒编码群特异性抗原N基因重组表达载体。经L-Arabinose诱导表达，可稳定、高效地表达N蛋白抗原。其表达产量约占菌体总...
- 关键词：
- 关键词：基因表达特异抗原原核表达
- 猴B病毒gB基因在昆虫细胞中的表达被引量：2
- 2012年
- 目的研发猴B病毒ELISA检测试剂盒中替代全病毒的抗原。方法根据已报道的猴B病毒E2490株gB蛋白基因序列(GenBank登录号:AF533768)人工合成gB基因,通过XbaⅠ和EcoRⅠ特异性酶切,将gB基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTA,经PCR、酶切、测序鉴定后,成功构建了携带gB基因的重组质粒pFastBac-HTa-gB。结果该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10BAC感受态细胞,经抗生素、PCR筛选,获得转座的杆粒bacmid-gB。在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,细胞变大变圆细胞核扩大,收获重组杆状病毒,再感染细胞,收获目的蛋白。通过SDS-PAGE和Western blot分析及间接免疫荧光检测,结果表明该蛋白得到表达,且具有良好的生物活性,大小约为98kDa。实验结果表明已成功构建了携带目的基因的重组质粒pFastBac-HTa-gB和转座的杆粒bacmid-gB,转染后在sf9昆虫细胞上得到表达。结论研究结果为下一步以表达的gB蛋白为诊断抗原,替代现阶段以病毒作为抗原的猴B病毒ELISA检测试剂盒的研制奠定了基础。
- 段博芳王琼段纲毛永杨叶玲玲杨建明徐维加董俊周晓黎艾军
- 关键词：GB基因昆虫细胞
