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文献类型

  • 4篇期刊文章
  • 2篇专利
  • 1篇学位论文

领域

  • 3篇生物学
  • 3篇医药卫生

主题

  • 4篇基因
  • 2篇植物
  • 2篇质粒
  • 2篇片段
  • 2篇克隆
  • 2篇活性
  • 2篇基因克隆
  • 2篇基因片段
  • 2篇合成酶
  • 2篇红树
  • 2篇杆菌
  • 2篇肠杆菌
  • 2篇纯化
  • 2篇大肠杆菌表达
  • 1篇蛋白
  • 1篇蛋白酶解
  • 1篇凋亡
  • 1篇氧化物歧化酶
  • 1篇荧光
  • 1篇荧光定量

机构

  • 7篇暨南大学

作者

  • 7篇张自德
  • 5篇吴秋红
  • 4篇张光
  • 4篇王峰
  • 3篇李秀英
  • 2篇黄璐圆
  • 2篇王峰
  • 1篇江仁望
  • 1篇孙华
  • 1篇张玉波
  • 1篇高辉

传媒

  • 1篇中国生物制品...
  • 1篇广西植物
  • 1篇中草药
  • 1篇暨南大学学报...

年份

  • 1篇2016
  • 1篇2014
  • 5篇2013
7 条 记 录,以下是 1-7
排序方式:
重组人过氧化氢酶在大肠杆菌中的表达、纯化和活性检测
2014年
为了了解人过氧化氢酶在各种常见肿瘤细胞中的表达情况,构建人过氧化氢酶的原核表达载体,在大肠杆菌中表达、纯化人过氧化氢酶,并进行活性检测.我们通过常规分子克隆手段构建原核表达载体pET-15bhCAT,将其转化大肠杆菌Rosetta-gami,经过IPTG诱导,表达产物经超声破碎后用Ni-NTA柱进行亲和层析纯化,用试剂盒检测重组hCAT酶活性,然后检测其对DNA氧化损伤的保护作用.通过荧光定量PCR(qPCR)测定hCAT基因在HLF-1正常细胞与几种常见肿瘤细胞中的表达情况.本研究成功构建了pET-15b-hCAT的原核表达载体,SDSPAGE检测结果表明,IPTG诱导表达出一条分子质量约为59.7 ku的目的蛋白,该蛋白主要以可溶的形式存在,活性检测表明经纯化得到的rhCAT比活力为62.9 U/mg,pUC19质粒氧化损伤保护实验显示rhCAT对DNA有一定的损伤保护作用.qPCR检测显示hCAT基因在U937、K562、PC3、HeLa、HT-1080、HepG-2等肿瘤细胞中的表达量明显低于HLF-1正常细胞.成功构建了人过氧化氢酶的原核表达载体,利用大肠杆菌Rosetta-gami获得了hCAT的可溶性表达,纯化的rhCAT具有活性,hCAT基因在U937、K562、PC3、HeLa、HT-1080、HepG-2等肿瘤细胞中的表达量明显低于HLF-1正常细胞.这为后续功能研究及性质实验奠定了基础.
孙华张自德江仁望王峰
关键词:过氧化氢酶表达纯化过氧化氢酶活性荧光定量PCR
一种具有穿膜功能的hMnSOD-R9及其制备方法与应用
本发明公开了一种具有穿膜功能的hMnSOD-R9及其制备方法与应用,属于分子生物学与生物化学领域。通过设计引物进行PCR扩增得到引入R9的MnSOD的hMnSOD-R9基因片段,将该片段连接到pET15b构建表达质粒pE...
王峰张自德黄璐圆吴秋红张光李秀英
文献传递
穿膜型重组hMnSOD-R9蛋白的表达纯化及体外抗肿瘤活性研究
目的:将人锰超氧化物歧化酶(hMnSOD)和九聚精氨酸(R9)蛋白转导域用基因重组的方法进行融合,用大肠杆菌表达具有穿膜功能hMnSOD-R9融合蛋白并检测其体外抗肿瘤活性。方法:把编码hMnSOD和R9的DNA片段克隆...
张自德
关键词:抗癌凋亡
文献传递
红树林植物杯萼海桑法呢基焦磷酸合酶的基因克隆及序列分析被引量:4
2013年
目的对杯萼海桑Sonneratia alba萜类化合物生物合成途径的关键酶法呢基焦磷酸合成酶(Farnesyl pyrophosphate synthase,FPS)基因的编码cDNA序列进行克隆,为研究杯萼海桑萜类化合物生物合成与基因调控奠定基础。方法结合杯萼海桑根的转录组注释,根据编码区序列设计引物,通过PCR方法克隆杯萼海桑FPS(SaFPS)基因的编码区cDNA。结果PCR扩增了一个长1 029 bp的基因片段,该片段编码由342个氨基酸组成的SaFPS。同源性比对结果显示基因编码蛋白与甘草的FPS具有氨基酸一致性达86%。其具有异戊烯基转移酶的2个典型保守功能域。进化树分析结果显示,与甘草Glycyrrhiza uralensis、苜蓿Medicago truncatula、羽扇豆Lupinus albu具有较近的亲缘关系。实时荧光定量PCR结果显示SaFPS基因在花中表达量较高,果实、茎、叶中表达量相对较低。结论首次从红树林植物杯萼海桑中克隆FPS基因获得其编码区序列,SaFPS基因具有组织表达特异性。本研究为分析基因表达特性及其在生物合成中的功能奠定基础。
王峰吴秋红高辉张自德李秀英张光
关键词:基因克隆PCR
红树植物杯萼海桑SAMS基因的克隆与生物信息学分析被引量:3
2013年
红树植物杯萼海桑是最耐盐的红树植物之一。S-腺苷甲硫氨酸合成酶(S-adenosylmethionine synthetase,SAMS)是S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)生物合成途径的关键酶。SAMS作为一个逆境胁迫响应蛋白在植物的耐盐调控中发挥着极其重要的作用。本文结合杯萼海桑根的转录组注释,根据编码区序列设计引物,通过PCR克隆杯萼海桑SAMS基因的编码区cDNA,并对其进行生物信息分析,为研究杯萼海桑适应逆境的机制奠定理论基础。结果显示PCR扩增了一个长1 182 bp的基因片段,该片段编码由393个氨基酸组成的S-腺苷甲硫氨酸合成酶。同源性比对及进化树分析显示杯萼海桑的SAMS氨基酸序列进化上相对保守。本研究首次从红树林植物杯萼海桑中克隆S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因,并获得其编码区序列,为进一步研究杯萼海桑应对逆境胁迫的分子生物学机制与胁迫相关基因调控网络奠定基础。
吴秋红张自德王峰
关键词:S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因克隆
重组人锰超氧化物歧化酶的胃蛋白酶酶解特性及其稳定性被引量:1
2013年
目的探讨重组人锰超氧化物歧化酶(rhMn-SOD)的胃蛋白酶酶解特性及其稳定性。方法在37℃条件下,用模拟胃液(0.084 mol/L HCl,35 mmol/L NaCl,pH 2.0,4 000 U胃蛋白酶)处理rhMn-SOD不同时间,SDS-PAGE分析酶解效果;使用总SOD测定试剂盒检测rhMn-SOD在不同温度(25、37、45、55、65、75℃)下保存不同时间(10、20、30、40、50、60 min)、不同pH(4.0~10.0)、不同化合物(氯仿、甘油、DMSO、10%SDS、β-巯基乙醇、苯酚、30%H2O2)处理后及日光和紫外照射后的相对活力。结果 rhMn-SOD在模拟胃液中处理2 min即可完全酶解。在25~55℃范围内,rhMn-SOD具有较好的热稳定性,在65~75℃范围内,rhMn-SOD的热稳定性较差;在pH 6.0~8.0范围内,rhMn-SOD具有较好的稳定性;rhMn-SOD对甘油和氯仿不敏感,经DMSO、SDS处理后,活力大幅下降,经β-巯基乙醇、苯酚、30%H2O2处理后,基本失活;rhMn-SOD经日光和紫外照射3 h,活力基本不变。结论分析了rhMnSOD的胃蛋白酶酶解特性、热稳定性、pH稳定性、对不同化合物的敏感性以及光稳定性,为其广泛应用于化妆品、药品、食品添加剂等领域奠定了基础。
张自德张玉波吴秋红张光王峰
关键词:胃蛋白酶蛋白酶解稳定性酶活力
一种具有穿膜功能的hMnSOD-R9及其制备方法与应用
本发明公开了一种具有穿膜功能的hMnSOD-R9及其制备方法与应用,属于分子生物学与生物化学领域。通过设计引物进行PCR扩增得到引入R9的MnSOD的hMnSOD-R9基因片段,将该片段连接到pET15b构建表达质粒pE...
王峰张自德黄璐圆吴秋红张光李秀英
文献传递
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