张煜
- 作品数：6 被引量：61H指数：3
- 供职机构：深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室更多>>
- 发文基金：深圳市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 里氏木霉内切葡萄糖苷酶Ⅳ在毕赤酵母中的表达被引量：29
- 2005年
- 进行了内切葡萄糖苷酶Ⅳ(EGⅣ)在毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中的表达。采用RT-PCR的方法从里氏木霉(Trichoderma reesei)中分离到eg4基因。将eg4基因与毕赤酵母表达载体pPICZαA连接,得到重组质粒pPICZαA-eg4。将该重组质粒线性化后转化毕赤酵母GS115,eg4基因通过同源重组被整合到毕赤酵母的染色体上,并处于酵母α因子的下游,得到重组菌株P.pastoris-EGⅣ1。在甲醇诱导下,重组菌株P.pastoris-EGⅣ1可以合成并分泌EGⅣ,培养液的CMC活力达到2.11 U/mL。
- 汤新刘刚田生礼张煜邢苗
- 关键词：纤维素酶里氏木霉毕赤酵母
- 磁场对地衣芽孢杆菌产酶周期及耐高温α-淀粉酶活性的影响
- 本文用强度1500高斯的恒定磁场对地衣芽孢杆菌的摇瓶发酵过程进行处理,比较了磁场处理前后地衣芽孢杆菌所产生的耐高温α-淀粉酶的产酶周期及酶活性的变化.发现恒定磁场对地衣芽孢杆菌产淀粉酶的影响主要与磁场处理时间及处理的起始...
- 余少文张煜胡萍
- 关键词：耐高温Α-淀粉酶地衣芽孢杆菌恒定磁场
- 文献传递
- 里氏木霉Swollenin在毕赤酵母中的表达被引量：2
- 2006年
- 通过设计合适的引物,经RT-PCR方法从里氏木霉的总RNA中扩增出Swollenin基因,并将该基因连接到PMD18-T Simple载体,得到该基因的克隆菌株,经酶切并将该基因连接到巴氏毕赤酵母表达载体pPICZαA,得到重组质粒pPICZαA-swo1.将该重组质粒线性化后,通过电转化方法转化毕赤酵母GS115,得到重组菌株P.pastoris-swo1.该菌株的发酵液可使滤纸纤维强度降低,纤维素膨胀及崩解效果明显,表明重构表达的Swollenin可用于木质纤维素的预处理.
- 漆传凤余少文邢苗刘刚张煜
- 关键词：里氏木霉纤维素毕赤酵母膨胀素
- 里氏木霉纤维二糖水解酶Ⅱ在毕赤酵母中的高效表达被引量：31
- 2005年
- 本工作采用巴氏毕赤酵母Pichiapastoris表达系统进行了里氏木霉Trichodermareesei纤维二糖水解酶Ⅱ(CellobiohydrolaseII)的表达。用RT-PCR的方法从经稻草粉诱导的里氏木霉培养物中分离出纤维二糖水解酶Ⅱ的基因,将其插入到巴氏毕赤酵母的表达载体pPICZαA中,并使之处于α-因子信号肽序列的下游,得到重组质粒pPICZαA-cbh2。通过电穿孔的方法用线性化的pPICZαA-cbh2转化巴氏毕赤酵母GS115菌株,经过大量筛选后得到可以高效表达纤维二糖水解酶的毕赤酵母菌株P.pastorisCBHⅡ1。在甲醇诱导的条件下培养P.pastorisCBHⅡ1,培养液中的CMC活性可达到3.82U/mL,SDS-PAGE分析结果表明纤维二糖水解酶在P.pastorisCBHⅡ1中的表达量远远高于里氏木霉。对表达产物进行了LC-MS分析,结果表明所表达的蛋白为里氏木霉的纤维二糖水解酶。
- 张煜刘刚余少文汤新邢苗
- 关键词：纤维素酶液质联用羧甲基纤维素
- 血红蛋白基因在产CBHⅡ毕赤酵母工程菌中的表达被引量：2
- 2007年
- 目的:提高毕赤酵母工程菌P.pastoris-CBHⅡ液体发酵产纤维二糖水解酶(CBHⅡ)的能力。方法:分别构建了用于胞外及胞内表达透明颤菌血红蛋白(VHb)基因的毕赤酵母重组表达质粒pPICZαA-vhb与pPICZαA(-s)-vhb。通过电转化将两种质粒转化巴氏毕赤酵母重组菌体P.pastoris-CBHⅡ菌株,经过筛选分别获得可正确表达具有生物活性的VHb蛋白的重组菌株P.pastoris-CBHⅡ-vhb(胞内表达VHb)及P.pastoris-CBHⅡ-vhb(-s)(胞外表达VHb)。结果:摇瓶发酵实验表明,血红蛋白在贫氧条件下可促进CBHⅡ的分泌表达,培养液上清的CMC酶活分别从出发菌株P.pastoris-CBHⅡ的1.81U/ml提高到2.04U/ml(胞内表达VHb)与1.93U/ml(胞外表达VHb)。VHb蛋白胞内表达菌株比胞外表达菌株效果更明显。
- 余河斌余少文汤新张煜邢苗
- 关键词：纤维二糖水解酶透明颤菌血红蛋白胞内表达分泌表达毕赤酵母
