张方
- 作品数：44 被引量：121H指数：6
- 供职机构：南京军区南京总医院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金江苏省博士后科研资助计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 胸腺基质淋巴细胞生成素受体剔降的未成熟树突状细胞调节哮喘小鼠Thl/Th2失衡的研究被引量：6
- 2010年
- 目的树突细胞疫苗是治疗哮喘的新途径,文中探讨经鼻滴注基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoetin,TSLP)受体剔降的未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)对哮喘模型小鼠过敏性气道炎症及Th1/Th2免疫失衡的影响,为免疫调节治疗哮喘提供理论和实验基础。方法36只C57BL/6小鼠随机分为胸腺TSLP受体剔降的imDC治疗组(A组)、imDC治疗组(B组)和哮喘组(C组)。以卵蛋白(ovalbumin,OVA)、氢氧化铝免疫建立哮喘模型,A组和B组分别于激发前气道内滴注100μl的细胞悬液,分别含有1×106TSLPR剔降的imDC、imDC,C组气道内滴注100μl的PBS;各组激发后肺泡灌洗分析细胞组份,分离肺淋巴细胞测定细胞因子分泌水平,以流式细胞仪检测CD4+干扰素-γ(interferonγ,IFN-γ)+、CD4+白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)+百分比及IFN-γ+/IL-4+比值,比较各组肺组织学改变。结果TSLP受体剔降的imDC治疗组与其他组比较:①可明显抑制OVA抗原激发后气道内嗜酸性粒细胞的浸润(P<0.01);②明显抑制肺淋巴细胞产生IL-4、IL-5,增加了IFN-γ的产生;③肺淋巴细胞CD4+IFN-γ+百分比及IFN-γ+/IL-4+明显升高(P<0.01),而CD4+IL-4+百分比则明显下降(P<0.01);④明显抑制哮喘鼠气道内及肺泡内的过敏性炎症反应。结论激发前经鼻滴注TSLP受体剔降的imDC对哮喘小鼠过敏性气道炎症有明显的防治作用,其机制可能与抑制树突细胞TSLP-TSLP受体信号通路,调整Thl/Th2失衡有关。
- 李子玲张方钱桂生罗向东索立俊宋勇施毅
- 关键词：哮喘未成熟树突状细胞TH1/TH2失衡免疫调节
- 融合蛋白mTSLPR-Ig体外抑制TSLP对树突状细胞的活化被引量：4
- 2010年
- 胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)通过结合树突状细胞(dendritic cell,DC)表面TSLP受体(TSLPR)活化DC,在导致哮喘Th1/Th2失衡中发挥重要作用。本研究探讨TSLPR可溶性受体mTSLPR-Ig(小鼠TSLPR胞外段与小鼠Ig Fc段的融合蛋白)体外抑制TSLP活化DC的可行性。实验包括分离培养及鉴定小鼠髓系DC;在TSLP作用DC(TSLP-DC)培养体系中加入mTSLPR-Ig,通过FCM检测mTSLPR-Ig对TSLP-DC表面共刺激分子CD80、CD86、CD40表达的影响;将TSLP、抗原OVA脉冲处理的DC以及DO11.10小鼠脾脏CD4+T细胞在体外共培养,MTT法检测体系中加入mTSLPR-Ig对CD4+T细胞增殖能力的影响,同时ELISA法检测上清中细胞因子IL-4、IL-5、IFN-γ以及IL-10表达水平的变化。结果表明,融合蛋白mTSLPR-Ig显著抑制TSLP-DC表面共刺激分子CD80、CD86、CD40的表达;mTSLPR-Ig体外显著抑制TSLP-DC对抗原特异性T细胞的增殖效应,促进上清中IL-10、IFN-γ表达水平,同时抑制IL-4、IL-5表达水平。mTSLPR-Ig通过抑制TSLP-DC活化及所致的Th2偏移,该融合蛋白有望在哮喘或变应性皮炎等TSLP相关性疾病的治疗中发挥重要作用。
- 张方施毅李子玲胡波宋勇
- 关键词：树突状细胞TSLP哮喘
- 融合蛋白mTSLPR-Ig的表达、纯化及其鉴定
- 2011年
- 目的:构建含小鼠TSLPR胞外段与小鼠Ig Fc段融合基因的腺病毒表达载体(Ad-mTSLPR-Ig),体外表达、纯化并鉴定可溶性融合蛋白mTSLPR-Ig。方法:运用PCR方法从小鼠胸腺cDNA文库中扩增mTSLPR胞外段基因,构建并鉴定mTSLPR胞外段与小鼠Ig Fc段融合基因的腺病毒表达载体(Ad-mTSLPR-Ig);将Ad-TSLPR-mIg转染COS-7细胞,收集细胞上清液;采用双抗体ELISA夹心法检测上清中融合蛋白表达;经蛋白A亲和层析,制备纯化可溶性融合蛋白mTSL-PR-Ig。结果:经测序证实,所构建表达载体的目的基因片段mTSLPR-Ig序列正确,成功包装出腺病毒表达载体Ad-mTSL-PR-Ig;ELISA法检测到上清中融合蛋白mTSLPR-Ig的表达;通过亲和层析法获得纯化的融合蛋白,经Western blot鉴定融合蛋白表达无误。结论:成功获得可溶性融合蛋白mTSLPR-Ig,为进一步研究其生物学特性奠定基础。
- 张方施毅黄钢李子玲胡波宋勇
- 关键词：可溶性受体TSLP哮喘
- LPS致大鼠肺泡巨噬细胞NF-κB促进TNF-α分泌被引量：16
- 2007年
- 目的:观察脂多糖(LPS)致大鼠肺泡巨噬细胞(AMs)中核因子NF-κB活性及其调控肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌的作用。方法:LPS作用大鼠AMs后,用电泳迁移率改变分析法(EMSA)测NF-κB活性;用特异的反义寡核苷酸阻断NF-κB亚基(p65)后,Western blotting检测p65表达变化;ELISA法检测细胞上清中TNF-α的含量。结果:于LPS作用AMs后4h,NF-κB活性达到峰值,24h仍维持在高水平;作用后4h上清中TNF-α的含量达到峰值。反义寡核苷酸阻断NF-κB亚基(p65)表达后,LPS致AMs上清中TNF-α的含量显著低于未阻断组(P<0.01)。结论:LPS致大鼠AMs中NF-κB正向调控TNF-α分泌。
- 张方李子玲施毅赵明辛晓峰钱桂生
- 关键词：肺泡NF-ΚB脂多糖类
- mTSLPR-Ig调节树突细胞诱导哮喘小鼠免疫耐受的研究
- 目的研究纯化蛋白mTSLPR-Ig(小鼠TSLPR的胞外段与小鼠IgFc段的融合蛋白)逆转哮喘小鼠Th1/Th2失衡以及改善哮喘气道炎症的可行性,并探讨mTSLPR-Ig调节树突细胞(DC)诱导哮喘免疫耐受的机制。方法用...
- 张方施毅李子玲胡波宋勇
- 文献传递
- 胸腺基质淋巴生成素与支气管哮喘
- 2009年
- 胸腺基质淋巴生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)是一种新近发现的、与白介素7类似的并与过敏性疾病密切相关的细胞因子,它在特应性皮炎、变应性鼻炎、变应性支气管哮喘(简称哮喘)患者明显表达。研究表明,在变应性哮喘患者中,TSLP活化树突状细胞,进而形成有利于Th2增殖极化的微环境,是导致Th1/Th2比例失衡的重要因素。TSLP可能是哮喘发病机制的免疫学机制中的一个关键因子,从而为哮喘的治疗提供一个潜在的靶点。
- 索立俊施毅张方
- 关键词：胸腺基质淋巴生成素哮喘
- RNA干扰her2／neu基因表达抑制肺癌A549细胞增殖的研究被引量：9
- 2009年
- 目的:HER2/neu表达对肺癌细胞生物学的影响尚不明了,文中运用RNA干扰技术抑制HER2/neu表达,并观察对肺癌A549细胞体外增殖的影响。方法:构建针对her2/neu基因的RNA干扰真核表达载体,运用脂质体介导转染A549细胞并用G418筛选出阳性克隆株;半定量RT-PCR和Western检测转染后HER2/neu mRNA及蛋白的表达水平;FCM检测细胞周期分布;MTT法绘制细胞生长曲线观察体外细胞的增值能力。结果:成功构建针对her2/neu基因的RNA干扰真核表达载体(命名为psilence3.1-HER2),转染后使A549细胞HER2/neu mRNA和蛋白的表达较未转染组和阴性对照质粒转染组均显著下调;细胞G0/G1期细胞增加,S期细胞减少;细胞生长曲线右移、增殖速度明显减慢。结论:psilence3.1-HER2能够稳定、高效、特异地抑制肺癌A549内her2/neu基因的表达,可显著抑制细胞增殖。针对her2/neu基因的RNAi策略有望成为肺癌的基因治疗的新选择。
- 申萍张方吴学玲施毅钱桂生罗向东胡波宋勇
- 关键词：HER2/NEURNA干扰A549细胞细胞增殖
- 铜绿假单胞菌ampC基因分布和产酶状况对药敏的影响
- 目的了解147株铜绿假单胞菌ampC基因分布和产酶状况对药敏的影响。方法通过聚合酶链反应(PCR)法检测ampC基因分布情况,PCR产物克隆测序;通过酶提取物三维试验检测AmpC酶;纸片扩散法检测铜绿假单胞菌的药敏情况。...
- 张方施毅辛晓峰宋勇赵明李子玲钱桂生罗向东
- 文献传递
- 脂多糖诱导人气道上皮细胞hBD-2表达及核转录因子κB活性的变化被引量：8
- 2007年
- 目的:观察脂多糖(LPS)诱导人气道上皮细胞人β防御素-2(hBD-2)的表达及核转录因子κB(NF-κB)活性的变化,探讨NF-κB在LPS诱导人气道上皮细胞hBD-2表达中的作用。方法:体外培养人气道原代上皮细胞,用不同剂量LPS刺激,RT-PCR法检测hBD-2mRNA的表达,凝胶迁移试验(EMSA)检测不同时相NF-κB活性的变化。结果:LPS刺激2h后可见人气道上皮细胞hBD-2mRNA表达,并呈时间、剂量依赖性;NF-κB在LPS刺激1h后明显活化,并与LPS剂量正相关,抗体超迁移率实验结果显示NF-κB的异型二聚体p65-p50参与了NF-κB的活化。结论:一定剂量的LPS可诱导人气道上皮细胞hBD-2mRNA表达,NF-κB在LPS诱导气道上皮细胞hBD-2mRNA起重要的调控作用。
- 廖伟钱桂生雷撼张方
- 关键词：气道脂多糖类
- mTSLPR-Ig调节树突细胞诱导哮喘小鼠免疫耐受的研究
- 张方施毅李子玲胡波宋勇
