- 细胞内源蛋白TTRAP与HIV-1整合酶的相互作用及其对慢病毒整合的影响
- TTRAP是一个最近发现的与NF-kB通路相关的PML核体蛋白。在这项研究中,通过酵母双杂交分析,TTRAP被鉴定为一个HIV-1整合酶相互作用蛋白。这样的相互作用被进一步通过免疫共沉淀,GST pull down和细胞...
- 张健琦
- 关键词：整合酶慢病毒病毒载体抗病毒药物
- 文献传递
- 一个phiC31相互作用的蛋白:人锌指蛋白403功能分析被引量：2
- 2009年
- 背景:phiC31是重要的基因治疗工具酶,其与细胞内蛋白的相互作用可能影响细胞内各种通路,从而关系到基因治疗的安全性。目的:构建锌指蛋白403基因原核表达载体,观察其在真核细胞的表达情况。设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-10/2008-12在复旦大学遗传工程国家重点实验室完成。材料:大肠杆菌DH5α菌株及大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株均为实验室保存。方法:用pLexA-phiC31作为"诱饵",对人胎脑cDNA文库通过酵母双杂交进行筛查,分离阳性克隆。对锌指蛋白403基因构建原核表达载体并纯化鉴定。脂质体介导真核细胞进行转染并细胞定位观察。主要观察指标:锌指蛋白403的原核表达载体的构建、纯化及在真核细胞细胞质中定位的结果。结果:酵母双杂交进行筛查后分离61个阳性克隆中,有1个包含17号染色体17q12上的基因序列,其具有一个锌指结构,故名锌指蛋白403。成功构建了锌指蛋白403的原核表达载体,并纯化组氨酸标记的锌指蛋白403。在真核细胞中,构建了绿荧光融合载体,证明了此蛋白在细胞质中的定位。结论:实验结果发现了一个新的phiC31整合酶相互作用蛋白,成功构建了znf403基因的原核表达载体,znf403蛋白主要在细胞质中聚集和分布。
- 张健琦李文娟王瑧瑧田聆薛京伦陈金中
- 关键词：基因治疗蛋白表达
