尚宁宽
- 作品数：8 被引量：21H指数：3
- 供职机构：西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人重组TNF-α突变体471蛋白的初步纯化及生物学活性被引量：3
- 2003年
- 目的 :在利用原核表达系统表达重组人突变体 4 71TNF α蛋白的基础上 ,对该蛋白进行初步纯化及生物学活性检测。方法 :利用最佳发酵和表达条件 ,诱导基因重组的人突变体4 71TNF α工程菌表达目的蛋白。收集菌体 ,经超声破碎 ,分离人突变体 4 71TNF α的包涵体 ,并观察变性剂及蛋白浓度对蛋白折叠的影响。采用MTT比色法检测并比较人野生型及突变体 4 71TNF α的生物学活性。结果 :在适当的变性与复性条件下 ,已成功地将突变体 4 71TNF α折叠并聚合形成具有生物学活性的三聚体。突变体 4 71TNF α对L92 9的细胞毒活性高于野生型TNF α的 15倍。结论 :原核表达系统中表达的人突变体 4 71TNF α经复性处理后具有显著的生物学活性 。
- 李瑶琛孔令洪王一理尚宁宽耿宜萍司履生
- 关键词：蛋白纯化MTT比色法生物学活性
- 突变型人肿瘤坏死因子-α工程菌发酵培养的实验研究被引量：8
- 2003年
- 目的 优化基因重组人突变型 4 71肿瘤坏死因子 α(TNF α)工程菌的发酵和表达条件。方法 通过改变培养基的组分、pH值、培养温度和诱导表达的条件等 ,采用测定细菌生物量和蛋白表达量等方法 ,确定最适的发酵和表达条件 ,并考察工程菌中重组质粒的遗传稳定性。结果 突变型 4 71rhTNF α工程菌在 pH值 7.5的SOC培养基中 ,30℃培养、4 2℃诱导 5h时 ,其表达量最大。而且 ,所构建的重组质粒在工程菌DH5α中传代稳定 ,目的蛋白的表达不受影响。结论 优化了基因重组人突变型 4 71rhTNF α工程菌的发酵和表达的最适条件 ,为进一步开发人突变型 4 71rhTNF
- 孔令洪李瑶琛王一理尚宁宽耿宜萍司履生
- 关键词：工程菌发酵重组质粒肿瘤细胞
- 同系细胞瘤苗对低免疫原性小鼠黑色素瘤治疗作用的研究被引量：6
- 2002年
- 齐旭周伊王一理马军闫晓彩韩俊宏来宝长尚宁宽耿宜萍司履生
- 关键词：黑色素瘤肿瘤疫苗佐剂
- 用垂直转头密度梯度超速离心法快速分级分离多聚核糖体被引量：1
- 2002年
- 目的 :测定多聚核糖体含量及多聚程度的分布。方法 :采用PRV - 5 0T垂直转头 40PA离心管 ,梯度为 15 % - 5 5 %连续蔗糖梯度。离心条件 :温度 10℃ ,转速 40 0 0 0r/min ,时间 9min。DGF -U型梯度仪液面跟踪法收集 ,同时与TH6 41摆平转头进行对比。结果 :采用垂直转头具有分离效果好 ,重现性强 ,操作简单 ,特别是离心管体积大 ,离心过程中产生的重定向作用使梯度容量大大增加 ,分离路径大大缩短 ,时间相应减少。结论 :为快速和大量制备、分析多种多聚核糖体提供一种良好方法。
- 林元喜马志义尚宁宽周娟刘进军
- 用垂直转头密度梯度超速离心法快速分级分离多聚核糖体
- 目的:多聚核糖体在细胞中的含量和聚集程度直接反映蛋白质的合成能力和活性,测定它的分布在研究生物组织的生理生化现象和代谢过程有重要意义。离心法常规使用角转头、摆平吊兰转头,但分离样品量少,单次离心时间长。本文旨在采用PRV...
- 林元喜马志义尚宁宽周娟刘进军
- 文献传递
- 生物样品中含砷量测定—石墨炉原子法被引量：3
- 2002年
- 建立了石墨炉原子化法测定生物样品中砷含量的方法 ,经过大批量样品分析测试 ,重复实验、加标回收实验表明 ,该法简便易行 ,具有较高的灵敏度和良好的准确度及精密度 ,加标回收率血液样品为 89.3 %～ 96 .7% ,肝脏组织为 91 .5 %～ 97.8% ,相对标准差血样为 7.6 % ,肾脏为 6 .3 %。砷含量在 0～ 5 0 ng/ml范围内 ,线性关系良好 r=0 .
- 张敬华张志峰张联合罗定强席小平尚宁宽
- 关键词：生物样品
- pcDNA3.1/hIL-18真核表达载体的构建及表达被引量：3
- 2003年
- 目的 :构建重组真核表达质粒pcDNA3.1/IL 18,并在哺乳动物细胞COS 7和Rlc310中进行瞬时和稳定性表达。方法 :从含hIL 18基因的中介载体 pGEM TEasy( pGEM T/hIL 18)中 ,以限制性内切酶酶切方法获得目的片段 ,克隆入真核表达质粒 pcDNA3.1( + )中。以脂质体法转染COS 7和Rlc310细胞 ,用RT PCR检测IL 18mRNA的水平 ,免疫组化染色法检测蛋白表达。结果 :构建了hIL 18基因的重组真核表达质粒pcDNA3.1/IL 18,并可在哺乳动物细胞中瞬时、稳定表达 ,获得了可稳定表达hIL 18基因的Rlc310细胞株。结论 :pcDNA3.1/IL 18的构建及表达 ,为IL
- 孔令洪李瑶琛王一理尚宁宽来宝长耿宜平司履生
- 关键词：免疫组织化学细胞培养
- HPV-6/11 L1/E6、HPV-6/11 L1/E7嵌合DNA疫苗质粒的构建
- 2003年
- 目的 构建HPV 6 / 11L1/E6、HPV 6 / 11L1/E7预防、治疗性DNA疫苗质粒。方法 运用PCR扩增HPV 6 /11L1、E6、E7序列 ,PCR产物连接至pGEMT Easy质粒 ,测序鉴定正确后 ,分别连接至真核表达载体pVAX ,再用酶切、连接而构建成HPV 6 / 11L1 E6 /E7 pVAX质粒。运用电穿孔法将所获得质粒转染COS 7细胞 ,免疫组化检测蛋白表达情况。结果 所构建质粒的插入目的片段测序正确 ;免疫组化检测在胞浆胞核可见棕黄色点状阳性产物沉积。结论 所构建的HPV 6 / 11L1 E6 /E7 pVAX融合蛋白表达质粒可在体外表达L1 E6 /L1 E7蛋白 。
- 刘鹏李昂马军尚宁宽来宝长司履生王一理
- 关键词：DNA疫苗聚合酶链反应
