李瑶琛
- 作品数：28 被引量：42H指数：4
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人ECK基因外显子3的实验研究被引量：3
- 2003年
- 目的 建立人eck基因外显子 3(exon 3)的克隆与鉴定方法 ,研究其在ZR 75 1细胞系中的突变情况。方法 设计一对eck基因exon 3特异性引物 ,提取人正常皮肤组织和乳腺癌细胞系ZR 75 1基因组DNA ,并以此作为模板 ,采用聚合酶链反应 (PCR)技术扩增eck基因exon 3片段 ,克隆入中介载体pUCm T中构建重组质粒 ,转化JM10 9大肠杆菌 ,扩增后经酶切、PCR初步鉴定后 ,进行序列分析。结果 ①从正常皮肤组织上皮细胞、ZR 75 1细胞系基因组DNA中 ,经PCR扩增 ,获得了人eck基因exon 3片段 ;②建立了正常皮肤组织、ZR 75 1细胞系eck基因exon 3片段的克隆 ;③ZR 75 1细胞系中eck基因exon 3片段存在突变。结论 从人组织与细胞系基因组DNA中 ,成功地构建了人类eck基因exon 3的克隆 ,并证实eck基因exon 3在ZR 75 1乳腺癌细胞系中有突变 ,为进一步研究eck基因exon
- 孔令洪李瑶琛王一理司履生
- 关键词：基因克隆聚合酶链反应基因测序
- 重组人突变型471TNF-α及野生型TNF-α的表达及活性初步鉴定被引量：4
- 2003年
- 目的 采用原核表达系统 ,表达人突变型 471TNF α蛋白 ,并检测其生物学活性。方法 采用PCR技术扩增突变型 471TNF α及野生型TNF αcDNA片段 ,克隆入中间载体pUCm T中 ,并测序证实。以限制性内切酶切下目的片段 ,克隆入pBV2 2 0中 ,转入大肠杆菌DH5α ,温度诱导表达野生型及突变型 471TNF α蛋白。初步纯化蛋白后 ,采用MTT法评估两者对L92 9细胞的杀伤作用。结果 ①获得了测序正确的野生型TNF α及突变型 471TNF α的cDNA克隆 ;②构建了正常人野生型TNF α及突变型 471TNF α重组表达质粒 ;③经温度诱导 ,TNF α及突变型 471TNF α蛋白均获得了表达 ;④初步的生物学活性研究表明 ,突变型 471TNF α蛋白的杀伤作用显著高于野生型。结论 突变型 471TNF α的生物学活性优于野生型TNF α ,为进一步开展TNF
- 李瑶琛孔令洪王一理尚宁宽耿宜萍司履生
- 关键词：TNF-Α突变体蛋白表达
- 磷酸化、乙酰化修饰对p53功能的影响被引量：8
- 2002年
- 李瑶琛孔令洪王一理司履生
- 关键词：磷酸化乙酰化修饰P53结核
- P^(53)、PCNA在甲状腺肿瘤中的表达及DNA含量分析
- 2000年
- 目的 研究甲状腺良恶性肿瘤中的P53蛋白及PCNA的表达 ,并对肿瘤细胞的DNA含量、倍体进行分析。方法 利用免疫组织化学方法检测甲状腺瘤细胞的P53蛋白及PCNA ,并用图像分析系统进行DNA倍体分析。结果 甲状腺恶性肿瘤细胞的P53蛋白、PCNA计数及DNA非整倍体率均显著高于良性肿瘤 ,且它们之间俩俩呈正相关。结论 P53基因突变在甲状腺肿瘤发生中有重要意义 ,结合P53蛋白、PCNA及DNA含量可以充分反映肿瘤细胞增殖活性 ,估计预后 ,为临床提供有意义的资料。
- 李瑶琛李士瑛
- 关键词：甲状腺肿瘤P^53蛋白增殖细胞核抗原免疫组织化学
- 突变型人肿瘤坏死因子-α工程菌发酵培养的实验研究被引量：8
- 2003年
- 目的 优化基因重组人突变型 4 71肿瘤坏死因子 α(TNF α)工程菌的发酵和表达条件。方法 通过改变培养基的组分、pH值、培养温度和诱导表达的条件等 ,采用测定细菌生物量和蛋白表达量等方法 ,确定最适的发酵和表达条件 ,并考察工程菌中重组质粒的遗传稳定性。结果 突变型 4 71rhTNF α工程菌在 pH值 7.5的SOC培养基中 ,30℃培养、4 2℃诱导 5h时 ,其表达量最大。而且 ,所构建的重组质粒在工程菌DH5α中传代稳定 ,目的蛋白的表达不受影响。结论 优化了基因重组人突变型 4 71rhTNF α工程菌的发酵和表达的最适条件 ,为进一步开发人突变型 4 71rhTNF
- 孔令洪李瑶琛王一理尚宁宽耿宜萍司履生
- 关键词：工程菌发酵重组质粒肿瘤细胞
- PTPσ受体在视皮层可塑性关键期前后的表达研究
- 刘慧阴正勤姚军平李瑶琛
- 嗅鞘细胞治疗视网膜色素变性的实验研究
- 阴正勤李瑶琛霍殊佳谢晶
- 光敏感蛋白melanopsin表达与功能研究
- 李春实李瑶琛
- 嗅鞘细胞移植后通过分泌MMP-3在RCS-P^+大鼠视网膜中迁移
- 2012年
- 目的初步研究将嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)及嗅球成纤维细胞(olfactory nerve fibroblasts,ONF)混合细胞移植到皇家外科学院大鼠(Royal College of Surgeon rat,RCS-P+rat)的视网膜下腔后,OECs/ONF迁移进入视网膜的机制。方法离体实验中,取成年RCS-rdy+-P+大鼠的嗅球培养OECs/ONF至14 d行OECs/ONF的基质金属蛋白酶-3(matrix-metalloproteinase-3,MMP-3)细胞免疫荧光染色。收集5、8、11、14 d OECs/ONF培养液上清,与普通培养液超滤后进行酶联免疫吸附实验(ELISA),检测MMP-3的含量变化。在体实验中,制作40只RCS-P+大鼠单眼视网膜下腔细胞移植,并以对侧眼作为伪手术组以及相同天龄未处理大鼠作为对照组。术后7、14、21、28 d用ELISA法检测细胞移植组、伪手术组及未处理组大鼠视网膜中MMP-3含量的变化。将携带绿色荧光的慢病毒感染后的OECs/ONF移植到4只RCS-P+大鼠视网膜下腔,激光共聚焦显微镜观察移植后7、14、21 d及28 d OECs/ONF在视网膜中迁移情况。结果离体实验中,培养14 d时OECs/ONF的MMP-3免疫细胞化学染色阳性。OECs/ONF培养液上清MMP-3含量分别为5 d(2.83±0.80)、8 d(6.34±1.12)、11 d(11.65±1.35)、14 d(19.11±2.11),明显高于普通D/F12+10%FBS培养液(1.65±0.44)(P<0.01);在体实验中,移植后21 d及28 d,OECs/ONF移植组视网膜MMP-3的含量[(1.80±0.29)、(3.96±0.51)]明显高于伪手术组[(1.17±0.20)、(1.83±0.26)]和未处理组[(1.19±0.17)、(1.92±0.25)](P<0.01),伪手术组与未处理组之间无明显统计学差异(P>0.05)。激光共聚焦显微镜观察可见移植后7～28 d,OECs/ONF在视网膜中迁移,最远能够达到神经节细胞层。结论 OECs/ONF移植到RCS视网膜下腔后,可能通过分泌MMP-3在RCS-P+大鼠视网膜中迁移。
- 谢晶李瑶琛阴正勤
- 关键词：嗅鞘细胞视网膜迁移基质金属蛋白酶-3
- 人重组TNF-α突变体471蛋白的初步纯化及生物学活性被引量：3
- 2003年
- 目的 :在利用原核表达系统表达重组人突变体 4 71TNF α蛋白的基础上 ,对该蛋白进行初步纯化及生物学活性检测。方法 :利用最佳发酵和表达条件 ,诱导基因重组的人突变体4 71TNF α工程菌表达目的蛋白。收集菌体 ,经超声破碎 ,分离人突变体 4 71TNF α的包涵体 ,并观察变性剂及蛋白浓度对蛋白折叠的影响。采用MTT比色法检测并比较人野生型及突变体 4 71TNF α的生物学活性。结果 :在适当的变性与复性条件下 ,已成功地将突变体 4 71TNF α折叠并聚合形成具有生物学活性的三聚体。突变体 4 71TNF α对L92 9的细胞毒活性高于野生型TNF α的 15倍。结论 :原核表达系统中表达的人突变体 4 71TNF α经复性处理后具有显著的生物学活性 。
- 李瑶琛孔令洪王一理尚宁宽耿宜萍司履生
- 关键词：蛋白纯化MTT比色法生物学活性
