孙铭英
- 作品数：11 被引量：32H指数：4
- 供职机构：辽宁出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划辽宁省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学理学更多>>
- 进境鱼传播传染性造血器官坏死病风险分析模型的建立被引量：3
- 2014年
- 世界动物卫生组织(OIE)将传染性造血器官坏死病(IHN)列为必须报告的动物疫病,我国将其列为二类动物疫病。本文运用风险分析理论,从危害确定(流行地区、传播方式和传染源、临床症状和潜伏期、发病机理及病理变化等)、传入概率、社会经济危害、风险管理(产地选择、时间限制、预防免疫、实验室检疫等)和风险交流(主要为检疫系统评价)等角度切入,建立了进境鱼传播IHN的风险分析模型。风险分析结果:从IHN流行地区进口一尾鲑传入IHN的概率为4.2×10-3。
- 吴斌孙铭英于畅蔡晓萍
- 关键词：鱼苗风险分析模型
- 建立Taqman探针实时荧光PCR检测食品中肠炎沙门氏菌的方法被引量：5
- 2012年
- 目的利用Taqman探针实时荧光PCR检测食品中肠炎沙门氏菌。方法根据沙门氏菌属共有基因序列和肠炎沙门氏菌的特异序列分别设计2组引物及探针,运用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验。结果采用沙门氏菌属探针可检测到25种不同血清型沙门氏菌(共49株),而11株阴性对照菌株未得到扩增;利用肠炎沙门氏菌探针可从25种不同血清型的沙门氏菌(共49株)和11株阴性对照菌株中特异性的检测出全部15株肠炎沙门氏菌;以肠炎沙门氏菌系列稀释度菌液DNA为模板进行实时荧光PCR扩增,菌株的模板浓度与Ct值之间呈现良好线性关系,线性系数(R2)0.993,扩增效率87%,最低检测浓度260cfu/mL;分别接种肠炎沙门氏菌于四种样品进行模拟样品检测,实时荧光PCR检测结果与经典培养鉴定方法的检测结果相吻合。结论实时荧光PCR检测食品中肠炎沙门氏菌的方法特异性强、敏感度高,可应用于食品中肠炎沙门氏菌的检测。
- 荣策孙铭英那晗曹际娟
- 关键词：TAQMAN探针实时荧光PCR肠炎沙门氏菌沙门氏菌属
- 多种野生、经济动物物种鉴定及系列相关疫病检疫关键技术的研究
- 贾赟袁文泽黄素文耿庆华尹伟力孙铭英王伟利谢之景胡传伟李艳武
- 为保护国家珍稀动物（梅花鹿等），建立陆生、水生动物生物资源库，减少濒危动物物种的灭绝；为减少国内某些企业用伪品冒充真品出口，影响中国的国际贸易形象，开展生物物种鉴定方法，同时，也对影响经济动物健康养殖的多种相关疫病检测技...
- 关键词：
- 关键词：经济动物
- 蓝舌病病毒VP7蛋白的原核表达及免疫原性鉴定被引量：5
- 2015年
- 为获得蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)25型的VP7原核表达蛋白,本试验以蓝舌病病毒重组质粒为模板,PCR扩增VP7基因,将其克隆于pET-24b(+)表达载体中,获得pET-24b-BTV-VP7重组质粒。经酶切和测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3)受体菌,IPTG诱导表达His-BTV-VP7蛋白。在变性条件下用镍亲和层析柱纯化His-BTV-VP7蛋白,经Western blotting及ELISA鉴定其免疫原性。结果显示,His-BTV-VP7蛋白以包涵体形式表达,大小约为40ku;Western blotting和ELISA检测此原核表达蛋白能与山羊阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫原性。本研究为后续建立蛋白芯片检测方法奠定了基础。
- 贾赟王贞钧孙铭英张雪张永宁栾慎顺王全凯孙颖杰
- 关键词：蓝舌病病毒原核表达WESTERNBLOTTINGELISA
- 食品农产品及餐饮垃圾中有害生物分析鉴定与无害化处理技术研究
- 曹际娟王金玲徐君怡刘冉吴建国孙铭英于兵贾东李正义金礼吉徐静肖姗姗李一尘
- 该项目研究建立了鸡肉制品中禽流感病毒、麦类作物及副产品中小麦矮腥黑穗病菌、餐饮生活垃圾中致病芽孢菌的风险预测与风险分析;建立了麦类作物中小麦矮腥黑穗病菌和餐饮垃圾中致病性芽孢菌的分子生物学诊断鉴定方法;利用农作物秸秆与禽...
- 关键词：
- 水貂阿留申病毒地方强毒株ADV-LN的分离鉴定
- 2016年
- 本研究采用对流免疫电泳方法(CIEP)检测辽宁水貂养殖场疑似水貂阿留申病毒(aleutian mink disease virus,ADV)水貂血清抗体,采集抗体阳性水貂的肝脏、脾脏、肾脏和肠系膜淋巴结组织,电镜观察存在细小病毒样颗粒。组织液研磨无菌处理后,接种CRFK细胞,盲传6代,取病毒细胞分离液用PCR方法检测,呈ADV阳性。将病毒分离液纯化后接种健康水貂,隔离观察,接种后3d即出现食欲减退,贫血,被毛无光泽,后期出现拒食、狂饮、死亡,个别水貂出现神经症状,表现抽搐、痉挛、步态蹒跚、共济失调,证明分离获得的病毒为ADV强毒株,命名为ADV-LN株。
- 贾赟李艳伍孙铭英张雪张岩岩宋大贺刘钊王全凯孙颖杰
- 关键词：水貂阿留申病毒
- 建立实时荧光PCR快速鉴定鸡制品中鸡伤寒沙门氏菌的方法被引量：5
- 2014年
- 建立基于Taqman探针实时荧光PCR检测鸡伤寒沙门氏菌(Salmonella gallinarum)的方法.根据GenBank公布的鸡伤寒沙门氏菌基因序列,设计引物和Taqman探针,采用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验.结果表明:特异性引物和探针可从34株鸡伤寒沙门氏菌菌株、26株其他血清型沙门氏菌和7株非沙门氏菌菌株中检测出全部的34株鸡伤寒沙门氏菌.以鸡伤寒沙门氏菌梯度稀释菌液DNA为模板进行实时荧光PCR实验,菌株模板浓度与Ct值呈良好线性关系,线性系数(R2)为0.999,扩增效率为88.2%,最低检测浓度为5cfu/mL.对已接种鸡伤寒沙门氏菌的模拟样品同时进行实时荧光PCR检测和传统方法鉴定,两者结果一致.该方法特异性好、灵敏度高,是快速鉴定鸡伤寒沙门氏菌的有效方法.
- 刘冉赵玉琢孙铭英曹际娟
- 关键词：实时荧光PCR鸡伤寒沙门氏菌
- 超声-固相萃取高效液相色谱-串联质谱法测定红鳍东方豚中的河豚毒素被引量：4
- 2015年
- 目的建立快速、准确检测红鳍东方豚中河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)的分析方法。方法样品用0.1%乙酸水溶液超声提取,C18固相萃取柱净化,用亲水性色谱柱ZIC?-c HILIC(150 mm×2.1 mm,3μm)洗脱,乙腈-0.1%甲酸水为流动相。选择正离子多反应监测(MRM)模式,[M+H]+,m/z 320.3/302.2为定量离子,进行HPLC-MS/MS测定,外标法定量。结果河豚毒素在5~100 ng/m L的范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.9997,回收率为82%~91%,相对标准偏差RSD为5.3%~15.7%,方法的定量限为5 ng/m L。结论该方法快速准确,灵敏度高,适用于红鳍东方豚中河豚毒素的测定。
- 李军黄莲芝孙铭英徐静曹际娟
- 关键词：高效液相色谱-串联质谱法红鳍东方豚河豚毒素
- 小反刍兽疫病毒核蛋白的原核表达及免疫原性分析被引量：2
- 2016年
- 为了获得小反刍兽疫病毒特异性抗原N蛋白,用于血清中抗小反刍兽疫病毒抗体检测方法的建立,根据Gen Bank中已发表的小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白核苷酸序列,设计引物,扩增N基因。扩增片段通过NdeⅠ和HindⅢ酶切位点插入表达载体p ColdⅠ。重组蛋白通过p ColdⅠ载体转化,在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了原核表达,经SDS-PAGE和Western Blotting检测表明,表达产物为58 k D的融合蛋白,可被PPRV感染动物血清识别,重组蛋白具有良好的反应原性。用纯化的重组N蛋白作为包被抗原,建立了检测PPRV血清的间接ELISA方法,与国外标准ELISA试剂盒的符合率达98.3%,为建立快速检测小反刍兽疫病毒抗体的检测方法奠定了基础。
- 张雪贾赟孙铭英张永宁栾慎顺刘钊孙颖杰包永明
- 关键词：小反刍兽疫病毒N蛋白基因原核表达间接酶联免疫吸附试验
- PCR检测食品中致敏原虾源性成分被引量：7
- 2012年
- 目的建立食品中致敏原虾源性成分的PCR检测方法。方法选择虾的16SrRNA基因作为物种鉴定的特异性标记基因,设计适合于PCR扩增的引物,进行虾的16SrRNA基因特异性和灵敏性检测。结果通过对14种虾、5种蟹、24种鱼、12种贝类以及章鱼等56种样品进行PCR检测,结果表明,可以很好地鉴别虾源性成分。为研究食品加工过程对检测灵敏度的影响,以虾肉和鱼肉为代表,进行133℃热处理30min的过程,检测灵敏度可达到在鱼肉粉中检出0.05%含量的虾源性成分。结论该方法特异、灵敏、准确,适于食品中致敏原虾源性成分的检测。
- 曹际娟赵彤彤刘冉孙铭英刘洋
- 关键词：PCR致敏原
