孙凤强
- 作品数：6 被引量：1H指数：1
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- 一种低通读率慢病毒载体及方法
- 本发明公开了一种低通读率慢病毒载体及降低慢病毒载体通读率的方法。该低通读率慢病毒载体是在慢病毒载体的3’LTR的U3区插入了cHS4的400bp核心序列和SV40的2×USE两种元件中的任何一种或两种所得的。插入的片段最...
- 曾溢滔张敬之方彧聃孙凤强
- 文献传递
- HIV－1载体中存在着提高转录和翻译基因的元件
- 2010年
- 目的研究HIV-1载体中的一些元件如Rev和Tat蛋白对其骨架的转录及外源基因表达水平的影响。方法将HIV-1表达GFP载体（FUGW）单独或分别与Rev蛋白表达质粒（pLP2）、Tat蛋白表达质粒（pcDNA3.1-Tat），及表达Rev和Tat蛋白的质粒（△8．9）等摩尔共转染人293T细胞后，经实时定量RT-PCR、FACS、荧光显微镜镜检等方法检测，比较其表达量。结果Rev与RRE结合后，载体骨架及外源基因的转录是单独转染FUGW时的3倍，Tat与TAR结合后，则提高其骨架及外源基因的转录近4倍，而Rev和Tat蛋白的协同作用，其转录本则可提高至6倍。FACS和荧光显微镜镜检也显示GFP蛋白表达量明显提高。F-TPO载体（HIV-1载体乳腺特异表达促血小板生成素）与△8．9在小鼠乳腺上皮细胞HC-11共转染和表达，则TPO蛋白的表达量接近pcDNA3．1-TPO载体的8倍。结论HIV-1载体中存在着提高转录和翻译基因的元件，可提高其骨架的转录和外源基因的表达，且该现象并不依赖于细胞类型和外源基因的种类。
- 孙凤强方彧聃王娟张帆马海燕张敬之
- 关键词：TAT蛋白
- cHS4和SV40的2×USE的联合作用能够有效降低慢病毒载体的通读率
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- 慢病毒载体转录通读率检测方法的建立被引量：1
- 2013年
- 慢病毒载体作为一种有效的生物研究和基因治疗载体,近年来正受到广泛关注,而转录通读现象则是限制其被使用的主要生物安全性瓶颈之一。为了评估慢病毒载体在整合入染色体后的转录通读的实际情况,需要建立一种有效的检测转录通读率的方法。文中运用分子生物学等手段,将相关质粒瞬时转染入293T细胞,模拟野生型和自灭活型慢病毒载体整合入染色体后的情况,利用实时荧光定量PCR分别定量转录通读和总转录本在慢病毒载体上的特征序列,并计算出转录通读率;同时使用流式细胞计数等技术,检测转录通读后的GFP蛋白产物。两种检测结果均与理论相符,即自灭活型载体具有更高的转录通读率。说明文中所建立的方法有效可靠,为进一步评估和降低慢病毒载体的转录通读率,提高慢病毒载体的生物安全性的研究提供技术支持。
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- 关键词：慢病毒载体安全性
- 寡核苷酸介导的基因原位修复
- 2009年
- 基因原位修复是指一种利用细胞的自身修复机制,定点修复靶基因中突变碱基的策略。目前,基因原位修复在大肠杆菌、酵母菌、哺乳动物细胞甚至动植物模型都有许多成功例子的报道。近年来,该技术在阐明其机制及提高其修复效率等方面取得了一些进展,但仍然面临着一些挑战,需要更深入地了解其潜力及局限性,使之成为治疗许多遗传性疾病的一种有效的方法。
- 孙凤强张敬之
- cHS4和SV40的2×USE的联合作用能够有效降低慢病毒载体的通读率
- 慢病毒载体相对其他载体具有诸多优势,而成为一种重要的基因转移工具。因此,对其生物安全性的研究变得尤为重要。在慢病毒载体的研发过程中,为了改善其生物安全性,自我灭活(self-inactivating,SIN)的慢病毒载体...
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- 文献传递
