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一种安全性慢病毒载体及其应用: 本发明公开了一种安全性慢病毒载体及其应用。本慢病毒载体携带了整合酶Cre基因表达盒，并且在3’LTR的U3区含有LoxP位点序列，在U3区中并在LoxP位点的下游含有用于导入外源基因的限制性酶切位点。本慢病毒载体介导基因...; 曾溢滔方彧聃张敬之

HIV－1载体中存在着提高转录和翻译基因的元件: 2010年; 目的研究HIV-1载体中的一些元件如Rev和Tat蛋白对其骨架的转录及外源基因表达水平的影响。方法将HIV-1表达GFP载体（FUGW）单独或分别与Rev蛋白表达质粒（pLP2）、Tat蛋白表达质粒（pcDNA3.1-Tat），及表达Rev和Tat蛋白的质粒（△8．9）等摩尔共转染人293T细胞后，经实时定量RT-PCR、FACS、荧光显微镜镜检等方法检测，比较其表达量。结果Rev与RRE结合后，载体骨架及外源基因的转录是单独转染FUGW时的3倍，Tat与TAR结合后，则提高其骨架及外源基因的转录近4倍，而Rev和Tat蛋白的协同作用，其转录本则可提高至6倍。FACS和荧光显微镜镜检也显示GFP蛋白表达量明显提高。F-TPO载体（HIV-1载体乳腺特异表达促血小板生成素）与△8．9在小鼠乳腺上皮细胞HC-11共转染和表达，则TPO蛋白的表达量接近pcDNA3．1-TPO载体的8倍。结论HIV-1载体中存在着提高转录和翻译基因的元件，可提高其骨架的转录和外源基因的表达，且该现象并不依赖于细胞类型和外源基因的种类。; 孙凤强方彧聃王娟张帆马海燕张敬之; 关键词：TAT蛋白

基因座控制区HS2、HS3元件调控的GFP报道基因转基因小鼠及其子代体内的表达行为研究: 颜景斌任兆瑞陈美珏方彧聃吴昊李颖; 1、GFP的组织特异性表达：成年的HS2/GFP转基因小鼠中，GFP在各红系组织，如骨髓、脾脏、外周血中均有表达，尤其以骨髓中表达量最高；而在肝脏、肺、肾脏、脑等非红系组织中，没有检测到GFP的表达。表明HS2元件及1....; 关键词：; 关键词：转基因小鼠

一种低通读率慢病毒载体及方法: 本发明公开了一种低通读率慢病毒载体及降低慢病毒载体通读率的方法。该低通读率慢病毒载体是在慢病毒载体的3’LTR的U3区插入了cHS4的400bp核心序列和SV40的2×USE两种元件中的任何一种或两种所得的。插入的片段最...; 曾溢滔张敬之方彧聃孙凤强; 文献传递

利用TALEN治疗β654地中海贫血模型小鼠: 目的:β珠蛋白第2内含子的第654位碱基C→T突变(IVS-2-654 C→T,β654)是导致中国人β地贫特有的、也是最常见的突变类型之一。该突变会产生IVS-2剪接异常的β-珠蛋白mRNA,导致β地贫表现型。TALE...; 方彧聃龚秀丽巩芷娟鲁丹桑晓杨冠恒朱怡文蔡勤张敬之; 文献传递

用慢病毒载体作为模型研究具有保护内含子作用的元件: 在I型获得性免疫缺陷病毒（HIV-1）的生命周期中，病毒通过不同的剪接方式产生了40多种不同类型的mRNA,这些mRNA翻译出的功能蛋白能将完整的转录本重新包装成新的病毒。例如，Rev蛋白将完整长度的或是单一剪接的转录本...; 方彧聃; 关键词：获得性免疫缺陷病毒生命周期慢病毒载体内含子; 文献传递

人血小板生成素基因乳腺特异表达载体的构建和表达被引量：1: 2007年; 目的为了获得能在转基因动物乳汁中高效表达人血小板生成素(TPO)的特异表达载体。方法将山羊β-乳球蛋白基因5′端上游-3.9kb和-1.9kb调控序列及β-酪蛋白启动子分别与人TPO基因连接,构建了pB3.9T、pB1.9T和pPT3个乳腺特异表达载体。将上述载体分别进行瞬间转染和稳定整合筛选实验,从mRNA及蛋白水平检测TPO基因的表达。结果BLG3.9、BLG1.9和P1A33种调控元件都可以启动人TPO在乳腺细胞中特异表达。瞬时转染时3种载体表达水平依次为pPT>pB3.9T>pB1.9T。但当外源基因稳定整合入细胞基因组后,TPO表达量持续升高,且pB3.9T表达量明显超过另外两种载体。结论证实了BLG转录子去阻遏和激活转变调节的存在,可能在其5′端-3.9kb与-1.9kb之间存在这一调节区域。并且与BLG1.9相比,BLG3.9能更有效地启动人TPO基因在乳腺细胞中的表达,也说明在-3.9至-1.9kb之间可能存在特殊的增强序列。; 刘茵颜景斌王强方彧聃潘树标黄英; 关键词：血小板生成素

转基因小鼠中外源基因遗传及表达稳定性的研究被引量：6: 2002年; Two transgenic mouse strains , in which the expression of human factor IX (hFIX) in the milk were different significantly, were bred, and the foreign gene integration as well as the content of hFIX in the milk were detected by PCR, Southern blot, FISH and ELISA, respectively. The results showed that approximately 50% offsprings were transgenic positive. Foreign gene integrated in mouse chromosomes was intact. The hFIX expression of each mouse in the same strain was different, the content of hFIX in the milk was (43.32±5.41)μg/mL in FIX-33 transgenic strain and (1.16±0.45)μg/mL in FIX-124 transgenic strain. Meanwhile, the hFIX gene expression between the two strains was different remarkably (P<0.01). We conclude that the characteristics of inheritance and expression in the founder were able to be transferred to their offsprings stably.; 颜景斌肖艳萍方彧聃奚鹰黄文英黄英; 关键词：转基因小鼠外源基因

转导α血红蛋白稳定蛋白(AHSP)对β地中海贫血小鼠表型的影响: 目的 α血红蛋白稳定蛋白(α-hemoglobin stabilizing protein,AHSP)是一种小的、高丰度的α珠蛋白(αHb)的重要伴侣蛋白,能够结合并稳定机体内游离的αHb,帮助血红蛋白的正常合成。β地中...; 王宝斌方彧聃郭歆冰任兆瑞张敬之; 关键词：Β地贫转基因小鼠

人/山羊造血干细胞嵌合模型的分子检测被引量：1: 2002年; 目的　使用分子生物学技术对人 /山羊造血干细胞嵌合模型进行检测。方法　从 11只胚胎期移植了人造血干细胞的山羊外周血中分别抽提DNA和总RNA ,然后分别对 11只山羊DNA进行人CD3 4 基因、GPA基因、SRY基因的PCR扩增 ,对其中 5只山羊的人CD3 4 基因及另 6只山羊的GPA基因表达进行了RT PCR检测 ,并用人α 微卫星序列片段作为探针对 8只实验山羊DNA进行了Southernblot杂交 ,同时还用人Y染色体探针进行荧光原位杂交 (FISH)。结果　经PCR检测 ,所有 11只实验山羊的DNA中均可扩增出人CD3 4 基因和GPA基因 ,5只实验山羊的DNA中可扩增出人SRY基因。South ernblot、RT PCR和FISH的结果亦均显示阳性。结论　通过分子检测证实人造血干细胞已在山羊体内存活。用该方法对人 /山羊造血干细胞嵌合模型进行检测是可行的。; 陈美珏颜景斌方彧聃任兆瑞肖艳萍黄淑帧; 关键词：造血干细胞分子检测

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方彧聃