姚志芳
- 作品数：11 被引量：46H指数：3
- 供职机构：南方医科大学基础医学院肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金广东省卫生厅资助课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人诱导性多潜能干细胞(iPS细胞)系的建立被引量：2
- 2011年
- 掌握建立人iPS细胞系(induced pluripotent stem cells,iPSCs)的技术,以便为人肿瘤细胞重编程为iPS细胞建立技术平台.在人胚胎干细胞的培养条件下,通过携带Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4 4个混合因子的慢病毒感染人皮肤成纤维细胞(CCD-1079SK细胞),从而诱导成干细胞样的克隆.根据人胚胎干细胞的特性进行如下鉴定:克隆形态、碱性磷酸酶活性、核型和CCD-1079SK细胞来源的克隆拟胚体(embryoid bodies,EBs)形成及分化等.结果显示,在人胚胎干细胞的培养环境中,导入Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4 4个因子的CCD-1079SK细胞产生了一株iPSC克隆,这株iPSC克隆在细胞形态、增殖能力、胚胎细胞特异性表面抗原以及基因表达与人胚胎干细胞相似,此外,iPSC克隆在体外悬浮培养中形成拟胚体并分化成3个胚层.人iPS细胞系的成功建立为利用iPS细胞技术开展肿瘤细胞重编程研究奠定了坚实基础.
- 姚志芳史俊文贾俊双申红芬林晓琳肖高芳张晟肖东姚开泰
- 关键词：肿瘤治疗
- 借助慢病毒将EGFP基因导入西藏小型猪胎儿成纤维细胞
- ：借助慢病毒将EGFP基因导入西藏小型猪胎儿成纤维细胞(Porcine embryonic fibroblasts，PEFs)，以基于PEFs建立慢病毒介导的外源基因体外投递系统。 方法：取35天西藏小型猪胚胎，...
- 张晟肖高芳黄黎珍那顺巴雅尔贾俊双姚志芳申红芬肖东顾为望
- 关键词：慢病毒西藏小型猪绿色荧光蛋白
- 慢病毒载体法制备红色荧光蛋白转基因小鼠被引量：3
- 2010年
- 目的利用慢病毒介导的转基因方法制备红色荧光蛋白(mRFP)转基因小鼠,并建立转基因小鼠的技术平台。方法将携带mRFP基因的慢病毒注入ICR鼠单细胞受精卵卵周隙以感染受精卵,胚胎移植进假孕母鼠以获得仔代鼠,然后应用小动物活体成像仪、体视荧光显微镜和PCR等鉴定并获得mRFP转基因鼠。结果移植卵周隙注射有慢病毒的胚胎40枚给2只假孕母鼠,共获得仔鼠6只;利用体视荧光显微镜检测mRFP表达,在蛋白水平证实6只F0代中,2只(R3和R4)鼠耳高表达mRFP,其余的弱表达mRFP(R1、R2和R5)或荧光强度(R6)与野生型ICR鼠无明显差别,而DNA水平检测证实,6只F0代中,5只(R1、R2、R3、R4和R5)基因组中整合有外源转基因hUb-mRFP,预示基因型鉴定结果很好验证了体视荧光显微镜鉴定结果。此外,mRFP转基因首建鼠基因组中整合的mRFP基因可稳定遗传和表达。结论建立了慢病毒法快速制备转基因小鼠的技术平台,这为针对不同基因建立相应转基因小鼠以实现恒定或条件性的转基因过表达或RNA干涉(RNAi),并进而在体内解析相应基因功能和建立人类疾病模型等奠定了坚实基础。
- 贾俊双肖高芳林晓琳张晟姚志芳杜文婷申红芬刘科饶子亮孙妍姚开泰肖东
- 关键词：红色荧光蛋白转基因小鼠
- 诱导性多潜能干细胞(iPS cells)——现状及前景展望被引量：36
- 2009年
- 主要从iPS细胞发展历程、获得iPS细胞的几个关键步骤(如基因导入方式、诱导iPS细胞所需因子组合与小分子化合物运用和体细胞种类选择等)、病人或疾病特异性iPS细胞、iPS细胞体内外诱导分化与其衍生物的临床应用和制备无遗传修饰的(genetic modification-free)iPS细胞的可行性与前景等方面对iPS细胞最新研究进展做评述.日本和美国研究小组先后用4种基因将小鼠(2006年8月)和人(2007年11～12月)的体细胞在体外重编程为诱导性多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS cells),此后在短短两年多时间内,iPS细胞的研究和关注度呈爆炸式增长.体细胞重编程、去分化和多潜能干细胞来源等一系列热点问题再次成为干细胞和发育生物学等研究的热点和焦点.与胚胎干细胞(embryonic stem cells,EScells)一样,iPS细胞在体内可分化为3个胚层来源的所有细胞,进而参与形成机体所有组织和器官.迄今,在体外已由iPS细胞定向诱导分化出功能性的多种成熟细胞.因此,iPS细胞研究不仅具有重要理论意义,而且在再生医学、组织工程和药物发现与评价等方面极具应用价值.
- 申红芬姚志芳肖高芳贾俊双肖东姚开泰
- 关键词：体细胞重编程胚胎干细胞诱导性多潜能干细胞细胞治疗
- 慢病毒载体法制备红色荧光蛋白转基因小鼠
- ：基于慢病毒介导的转基因方法制备红色荧光蛋白(mRFP)转基因小鼠以建立基于该转基因方法制作转基因小鼠的技术平台。 方法：将携带mRFP基因的慢病毒注射入ICR小鼠单细胞受精卵卵周隙以感染受精卵，胚胎移植进假孕母...
- 贾俊双肖高芳申红芬姚志芳杜文婷孙妍肖东姚开泰
- 关键词：红色荧光蛋白慢病毒载体
- 借助慢病毒将EGFP基因导入西藏小型猪胎儿成纤维细胞被引量：6
- 2010年
- 目的借助慢病毒将EGFP基因导入西藏小型猪胎儿成纤维细胞(porcine embryonic fibroblasts,PEFs),以基于PEFs建立慢病毒介导的外源基因体外投递系统。方法取35d西藏小型猪胚胎,酶消化法分离培养西藏小型猪的PEFs;按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒(携带EGFP基因)包装(脂质体介导的瞬时转染),随后用病毒上清感染PEFs,24～48h后荧光显微镜下观察是否见绿色荧光以证实慢病毒是否成功生产和成功感染PEFs。结果成功分离培养西藏小型猪的PEFs,按标准程序生产的携带EGFP基因慢病毒高效率感染西藏小型猪的PEFs。结论针对西藏小型猪的PEFs建立了相应的慢病毒介导的外源基因体外投递系统,为相关后续研究打下了良好基础。
- 张晟肖高芳黄黎珍那顺巴雅尔贾俊双姚志芳肖东顾为望
- 关键词：慢病毒绿色荧光蛋白
- 携带人Kif4和EGFP基因慢病毒表达载体构建被引量：1
- 2011年
- 目的:构建携带人Kruppel-like factor4(Kif4)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒表达载体pFUKGW。方法:Xho I线性化pLenti-EF1a-Kif4-IRES-EGFP,回收片段并补平XhoI酶切位点,接着BamH I酶切该片段,回收2.842kb片段而获连接用Kif4-IRES-EGFP;EcoR I线性化pFUGW,回收并补平EcoR I酶切位点,然后BamH I酶切该片段,回收9.174kb片段获连接用载体片段,最后使用DNA连接试剂盒中的Solution I将其与连接用Kif4-IRES-EGFP连接,连接产物转化,次日挑选单菌落,提取质粒并行酶切鉴定。所构建载体命名为pFUKGW。获pFUKGW后,按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒包装和确认慢病毒是否成功生产;将携带Kif4和EGFP基因的慢病毒感染人肿瘤细胞株CNE1、C666和SW620以建立相应病毒感染体系。结果:酶切证实成功构建了pFUKGW,按标准程序生产的携带Kif4和EGFP基因的慢病毒上清高效率感染CNE1、C666和SW620。结论:本实验成功构建携带人Kif4和EGFP基因的慢病毒表达载体pFUKGW,为开展肿瘤细胞重编程研究打下了良好基础。
- 闫春江李国炜姚志芳肖高芳肖东
- 关键词：EGFP慢病毒载体
- 人诱导性多潜能干细胞（iPS）系的建立
- 2006年8月,Yamanaka小组将24种转录因子基因排列组合导入小鼠成纤维细胞,最终确定最少有4种转录因子组合——3ct4、Sox2、c-Myc和Klf4即可将成纤维细胞重编程为诱导性多潜能干/(iPS/)细胞,20...
- 姚志芳
- 关键词：人胚胎干细胞诱导性多潜能干细胞体细胞重编程
- 文献传递
- 携带人miR302和EGFP基因慢病毒表达载体构建
- 2009年
- 目的构建携带人miR302和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒表达载体pFUM3GW。方法NheⅠ和NotⅠ双酶切pmiR302ApE以释放miR302,接着补平酶切位点而获连接用miR302;BamHⅠ酶切携带EGFP的慢病毒载体pFUGW,接着补平酶切产物,并去磷酸化而获连接用载体片段,最后使用DNA连接试剂盒(TaKaRa)中的SolutionI将其与连接用miR302连接,连接产物转化,次日挑选单菌落,PCR筛选正向阳性克隆,随后将选定的含有阳性克隆的单菌落摇菌,提取质粒并行酶切鉴定及对插入的miR302测序。所构建载体命名为pFUM3GW。获pFUM3GW后,按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒包装和确认慢病毒是否成功生产;携带miR302和EGFP基因的慢病毒感染鼻咽癌细胞株C666-1、CNE1和5-8F以建立相应病毒感染体系。结果PCR、酶切和测序证实成功构建了pFUM3GW,按标准程序生产的携带miR302和EGFP基因的慢病毒上清高效率感染小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)及鼻咽癌细胞株C666-1、CNE1和5-8F。结论成功构建携带人miR302和EGFP基因的慢病毒表达载体pFUM3GW,为相关后续研究打下了良好基础。
- 申红芬贾俊双肖高芳姚志芳肖东姚开泰
- 关键词：EGFP慢病毒载体
- 携带人Sox2和EGFP基因慢病毒表达载体构建被引量：2
- 2010年
- 目的构建携带人Sox2和EGFP基因的慢病毒表达载体pFUSGW。方法XhoⅠ线性化pLenti-EF1a-Sox2-IRES-EGFP,回收片段并补平XhoⅠ切口,接着BamHⅠ酶切该片段,回收2.356kb片段而获连接用Sox2-IRES-EGFP;EcoRⅠ线性化pFUGW,回收并补平EcoRⅠ切口,然后BamHⅠ酶切该片段,回收9.174kb片段获连接用载体片段,最后使用DNA连接试剂盒(TaKaRa)中的SolutionⅠ将其与连接用Sox2-IRES-EGFP连接,连接产物转化,次日挑选单菌落,提取质粒并行酶切鉴定。所构建载体命名为pFUSGW。获pFUSGW后,按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒包装和确认慢病毒是否成功生产;携带Sox2和EGFP基因的慢病毒感染小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)、人胚肺成纤维细胞(HLFs)和人神经胶质瘤细胞(U87)以建立相应病毒感染体系。结果酶切证实成功构建了pFUSGW,按标准程序生产的携带Sox2和EGFP基因的慢病毒上清高效率感染MEFs、HLFs及U87。结论成功构建携带人Sox2和EGFP基因的慢病毒表达载体pFUSGW,为相关后续的研究打下了良好的基础。
- 姚志芳肖高芳史俊文王赫申红芬肖东姚开泰
- 关键词：SOX2EGFP慢病毒载体
