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肺靶向转移性人肝癌细胞株及其建立方法: 本发明提供了肺靶向转移性人肝癌细胞株及其建立方法。所述的肺靶向转移性人肝癌细胞株，其特征在于，母细胞为红色荧光蛋白表达肝癌细胞HCCLM3-R，所述细胞为分类命名：肺靶向转移人肝癌细胞株HCCLM3-R-LM1，保藏编号...; 吴伟忠陶中华李薇薇孙惠川汤钊猷樊嘉钦伦秀王鲁; 文献传递

芳香烃受体核易位蛋白2基因表达对HCCLM6细胞侵袭和迁移的影响: 2010年; 目的探讨短发夹（sh）RNA芳香烃受体核易位蛋白（ARNT）2i慢病毒表达载体对高转移肝癌细胞HCCLM6侵袭和迁移的影响。方法以ARNT2为目的基因，化学合成4条干扰RNA，与经MluⅠ和ClaⅠ酶切后的pLVTHM载体连接过夜，筛选并鉴定阳性克隆。利用脂质体2000将ShRNA—ARNT2i，pCMV—dR8．74，pMD2G共转染293T细胞，获得shRNA—ARNT2i慢病毒颗粒，进一步感染HCCLM6靶细胞，并分为转染shRNAARNT2i组、未转染的空白对照组和转染阴性对照序列组。用荧光实时定量PCR和Westernblot检测ARNT2基因的干扰效率。应用划痕和Boyden小室法观察ARNT2表达下调对HCCLM6侵袭和迁移能力的影响。用SPSS16．0统计软件对数据进行独立样本t检验和方差分析，其中多组资料两两比较采用LSD法。结果荧光实时定量PCR检测转染shRNAARNT2i组，未转染的空白对照组和转染阴性对照序列组3组ARNT2mRNA相对表达值分别为0．154±0．024、0．860±0．145、1．004±0．009，F=113．14，P〈0．01，差异有统计学意义；Westernblot显示转染stLRNA—ARNT2i组ARNT2蛋白的表达量为16．45±1．6，转染阴性对照序列组ARNT2蛋白的表达量为44．56±2．07，两组比较，t=18．58，P〈0．01，差异有统计学意义；转染shRNA—ARNT2i组细胞在划痕48h后基本愈合，而转染阴性对照序列组和未转染的空白对照组划痕依然可见；转染shRNAARNT2i组穿膜细胞数为（13．25±1．04）个，而未转染的空白对照组和转染阴性对照序列组的穿膜细胞数分别为（6．50±2．56）个、（6．75±2．05）个，F=29．645，P〈0．01，差异有统计学意义。结论shRNA—ARNT2i载体能显著下调HCCLM6细胞ARNT2基因和蛋白的表达，促进HCCLM6细胞的运动和侵袭。; 李薇薇吴伟忠梁英肖春丽陶中华王鲁孙惠川樊嘉; 关键词：肝细胞肿瘤迁移细胞

新型自体T细胞回输治疗晚期实体肿瘤的安全性及疗效分析被引量：1: 2021年; 目的:探讨采用程序性死亡因子-1(programmed cell death-1,PD-1)单克隆抗体、白细胞介素2(IL-2)及IL-15诱导制备的新型自体T细胞免疫治疗晚期实体肿瘤的疗效及安全性。方法:前瞻性入组2018年3月至2020年12月复旦大学附属中山医院收治的进行单独新型自体T细胞治疗及新型自体T细胞治疗联合标准治疗的晚期实体肿瘤患者10例,进行Ⅰ期临床研究。主要观察指标为安全性,即治疗相关不良反应的发生率和严重程度;次要观察指标为有效性,包括生活质量评分、无进展生存期等,并分析治疗后患者免疫状态变化。结果:10例患者中包括肝细胞肝癌3例、肠道肿瘤5例、胰腺癌1例和肺癌1例。细胞治疗后28 d内,未发生与治疗有关的严重不良事件。生活质量调查问卷显示,细胞治疗后,患者生活质量改善。其中,躯体功能、总体健康状况、疲倦改善较明显(P<0.05)。3例单用新型T细胞治疗的患者均短期内出现疾病进展;联合治疗患者的疾病控制率为71.4%。联合治疗无效患者的外周血调节性T细胞(Treg)处于较高水平,治疗后28 d高于治疗有效患者(P=0.03)。结论:新型自体T细胞治疗实体肿瘤安全可靠,具有一定的抗肿瘤作用,联合标准治疗可显示良好的疗效,值得进一步扩大研究。; 李伟卢莉莉肖淑秀白金金王志明程莉莎宋正清吴伟忠周宇红; 关键词：实体肿瘤过继性细胞免疫治疗 T细胞

干扰素α治疗肝细胞癌的若干问题与对策: 2008年; 肝细胞癌（以下简称肝癌）的发生率在世界范围内都呈上升趋势；虽经数十年的努力，5年总体生存率并无显著提高，绝大多数患者仍在1年内死亡。在我国，由于庞大的乙型肝炎感染人群，作为其转归之一，肝癌位列所有癌症死亡原因的第二位。肝癌药物研发的进展缓慢，目前只有sorafenib通过严格的临床随机对照研究显示了其治疗肝癌的效果，因而获得美国FDA批准可用于治疗不能切除的肝癌。; 孙惠川王鲁吴伟忠汤钊猷钱永兵张巨波庄鹏远张伟; 关键词：肝细胞癌干扰素Α 随机对照研究 FDA批准

靶向肝癌标志物GPC3的核酸适配体、载药脂质体及其制备方法和应用: 本发明公开了靶向肝癌标志物GPC3的核酸适配体、载药脂质体及其制备方法和应用，其中核酸适配体为靶向肝癌标志物GPC3蛋白的核酸适配体APS613‑1，其5’端修饰荧光基团和3’端修饰胆固醇基团得到靶向探针，本发明还提供载...; 吴伟忠周宏鑫李玉环

靶向Arnt的RNAi慢病毒载体的构建及其在HCCLM6中对Arnt基因表达的影响被引量：3: 2008年; 目的:构建并鉴定Arnt基因特异性RNAi慢病毒载体,将其导入HCCLM6肝癌细胞中,筛选有效抑制ARNT表达的稳定细胞株。方法:针对已经筛选确定的Arnt基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经HpaI和XhoI酶切后的pLVTHM载体连接[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]产生LV-shArnt慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用LV-shArnt载体,pCMV-dR8.74载体,pMD2G载体三质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白表达水平测定病毒滴度,挑选细胞克隆,收获病毒上清,将病毒上清转染HCCLM6中,经过GFP筛选得到稳定抑制Arnt表达的HCCLM6细胞株,通过RT-PCR鉴定抑制Arnt表达的效果。结果:双酶切与测序鉴定证实成功构建了ArntshRNA的慢病毒载体,转染包装病毒细胞株获得的病毒上清成功转染了HCCLM6,并且抑制了Arnt的表达。结论:运用pLVTHM载体构建的LV-shArnt慢病毒载体可有效抑制Arnt在肝癌细胞株HCCLM6中的表达,为观察转染shRNA慢病毒表达载体的肿瘤细胞的恶性生物学行为变化奠定了实验基础。; 梁英吴伟忠李薇薇张宁孙惠川王鲁夏景林; 关键词：ARNT RNA干扰慢病毒载体

Janus激酶／信号传导子和转录激活子信号通路重建对MHCC97细胞干扰素α应答的影响被引量：2: 2006年; 目的阐明原发性肝癌M H C C97细胞中Janus激酶／信号传导子和转录激活子信号通路对干扰素α抗肿瘤增殖作用的影响。方法用Dosper转染干扰素调节因子9(IRF9)表达质粒入MHCC97细胞;用Western blot和寡核苷酸迁移率实验分别检测肝癌细胞中IRF 9、细胞周期调控蛋白和干扰素刺激基因因子3的表达;用四甲基偶氮唑盐和流式细胞术分别检测细胞的增殖水平及各期细胞的分布情况。结果通过高表达1 R F 9因子可恢复M H C C 9 7细胞对干扰素α抗增殖的应答能力,同时阻滞细胞由S期过渡到G 2 期。结论完整的Janus激酶／信号传导子和转录激活子信号通路对介导干扰素α抗肝癌MHCC97细胞的增殖作用至关重要。; 吴伟忠孙惠川高艳琴王鲁汤钊猷刘康达; 关键词：信号传导干扰素Α

一种高记忆表型肿瘤浸润T淋巴细胞的培养方法: 本发明公开了一种高记忆表型肿瘤浸润T淋巴细胞的培养方法，包括：无菌切取肿瘤组织置于培养液中，在无菌冷链条件下将瘤体机械剪碎、消化，获取单细胞悬液，分离提取肿瘤浸润T淋巴细胞，加入到含有分离诱导培养液的培养基中进行体外扩增...; 顾建英周宇红卢莉莉孙磊吴伟忠卫传元高子煦肖淑秀宋正清白金金

酪丝缬肽对人肝癌裸鼠移植瘤的抗血管生成作用及其机制: 2009年; 目的探讨三肽化合物酪丝缬肽（YSV）对人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤的抑制作用及其抗血管生成机制。方法建立人肝癌SMMC-7721裸鼠移植瘤模型，免疫组织化学法观察YSV对肿瘤组织中微血管密度（MVD）的影响；应用血管生成相关基因芯片分析YSV对肿瘤组织血管生成相关基因的影响；应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）验证相关基因的表达情况，最后酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定血清中目的因子的含量。结果YSV能显著抑制人肝癌SMMC-7721裸鼠移植瘤的生长，当给药剂量为320μg／kg·d^-1。时效果最为显著，抑瘤率为60．66％。免疫组织化学法证实YSV能够降低肿瘤组织中微血管密度，YSV作用组MVD平均值36．0±11．6，对照组平均值为114．5±26．5。与生理盐水组比较，在113个候选基因中有18个基因下调2倍以上，其中血管内皮生长因子（VEGF）与白细胞介素（IL）-8基因下调最显著；RT—PCR法证实YSV能够抑制肿瘤组织中VEGF与IL-8在mRNA水平上的表达；ELISA亦证明YSV作用组血浆中因子VEGF及IL-8浓度降低。结论YSV能显著抑制人肝癌SMMC-7721裸鼠移植瘤生长，通过抑制肿瘤组织中促血管生成因子的表达来发挥抗肿瘤活性。; 张宁王鲁梁英吴伟忠樊嘉汤钊猷; 关键词：肝细胞酪丝缬肽血管生成 IL-8

miR-17-92基因簇对肝癌侵袭转移的调控作用及其分子机制研究: 吴伟忠刘东丽刘杨冬黎黎史冬敏文铎

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