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金黄色葡萄球菌荧光定量PCR计数法的建立被引量：2: 2012年; 目的建立一种简便、特异的荧光定量PCR检测方法,用于对金黄色葡萄球菌计数。方法根据金黄色葡萄球菌nuc基因序列(GenBank:DQ399678.1),设计并合成引物和荧光标记探针,建立和优化反应体系,用已知浓度的金黄色葡萄球菌DNA模板作为外部参照,建立标准曲线。用加入金黄色葡萄球菌的模拟牛奶样品,把Baird-Parker平板计数结果和PCR定量检测结果进行比较,以评价体系性能。结果平板计数和荧光定量PCR的检测结果做比较,采用配对t检验,t=0.58,v=32,P>0.05,其结果差异无统计学意义。结论所建立的金黄色葡萄球菌荧光定量PCR计数法,操作较传统的方法简单直接,能有效地缩短整个检测的时限,并有较好的灵敏度和特异性,与传统方法相比,有较明显的优势。; 刘志勇赵雪涛钱子煜; 关键词：金黄色葡萄球菌荧光定量 PCR 计数

一种基于精准定位的标准品智能管理系统: 本发明公开了一种基于精准定位的标准品智能管理系统，涉及标准品智能管理技术领域，包括：存储模块：包括存储器；中控模块：包括与存储器连接的处理器，当所述一个或多个程序被处理器执行时，使所述处理器实现一种基于精准定位的标准品智...; 刘志勇刘兰侠陈翔倪蓉路凌怡邱建

Real-time PCR测定食品中蜡样芽胞杆菌的数量被引量：5: 2012年; 目的:采用Real-time PCR的定量方法对食品中所含蜡样芽胞杆菌的数量进行快速的检测。为食物中毒的快速检测提供有力依据。方法:采用蜡样芽胞杆菌的肠毒素基因(Genebank D17312)作为靶基因,建立PCR反应体系。用已定量的蜡样芽胞杆菌DNA提取液作为外部参照,建立标准曲线进行定量检测。准备模拟样品,把PCR定量方法和国家标准方法的结果进行比较。结果:该反应体系的灵敏度和特异性均能够达到要求。对国标法和PCR定量方法的结果采用T检验分析,t=0.38,v=33,P>0.05,其结果无显著性差异。结论:本实验所采用的Real-time PCR定量方法检测食品中的蜡样芽胞杆菌数量,比国标法操作简单,所需时间短,并有较好的灵敏度和特异性,可以运用到日常工作中。; 刘志勇赵雪涛陆敏; 关键词：蜡样芽胞杆菌 REAL-TIMEPCR 食品

重组酶介导的等温扩增结合CRISPR/Cas12a检测志贺氏菌和克罗诺杆菌: 2024年; 目的应用重组酶介导的等温扩增技术(recombinase-aided amplification,RAA)结合成簇规则的间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR),建立志贺氏菌和克罗诺杆菌的快速检测方法。方法通过筛选志贺氏菌和克罗诺杆菌特异性基因,设计特异扩增引物、CRISPR脱氧核糖核酸(CRISPR deoxyribonucleic acid,crDNA)和探针,将靶标进行RAA扩增后,建立CRISPR检测方法。对方法的灵敏度、特异性和应用性进行评价,并与国标检测方法进行对比。结果本研究对志贺氏菌和克罗诺杆菌纯菌液DNA最低检出限分别为4.9×10^(3) CFU/mL、4.4×10^(4) CFU/mL,基因组DNA最低检出限为6.8×10^(‒3) ng/μL、5.7×10^(‒3 )ng/μL,特异性好,与其他病原菌无交叉反应。同时,该方法成功检测出加标猪肉样品和人工污染奶粉中的志贺氏菌和克罗诺杆菌,比国家标准检出限更低。结论本研究建立的RAA-CRISPR方法可有效应用于志贺氏菌和克罗诺杆菌的检测,这为快速筛查食品中是否污染这两种病原菌提供重要价值。; 张欣悦杨钰娟孔祥翔杨捷琳钮冰陈沁刘志勇; 关键词：志贺氏菌

应用PCR法筛检沙门菌的探讨被引量：2: 2005年; 赵雪涛刘志勇; 关键词：《中华人民共和国食品卫生法》《公共场所卫生管理条例》公共场所从业人员筛检肠道病原菌沙门菌检测

基于PCR-免疫试纸条法的空肠弯曲菌快速检测: 2023年; 空肠弯曲菌引起的食源性腹泻疾病已经成为突出的公共卫生问题之一,快速检测食品中空肠弯曲菌污染对于保障人类健康具有重要意义。本研究以空肠弯曲菌lpxA基因序列为检测靶基因,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增产物上标记的地高辛和异硫氰酸盐(isothiocyanate,ITC)分子与试纸条上抗体特异性结合,建立了一种PCR-试纸条检测方法。所有空肠弯曲菌标准菌株均为阳性结果,其他弯曲菌以及食源性病原菌均为阴性结果,检测特异性为100%;最低检出限为3.1×103 CFU/mL;在对食品的实际检测中,该方法与现有国标检测方法结果一致。将本方法用于空肠弯曲菌的检测降低了成本,简化了操作步骤,为食源性空肠弯曲菌检测提供了一种实用、简便的手段。; 李鑫岗刘志勇申进玲郭德华赵丽娜于婕陈瑜周甜甜王璇徐博捷只帅; 关键词：空肠弯曲菌聚合酶链式反应

一种条码采样处理系统及方法: 本发明公开了一种条码采样处理系统及方法，包括标本信息登记模块，用于接收采样任务并记录采样对象信息；标本编码模块，用于对标本进行编码；条码标码模块，用于编码标本条码后发放条码，并产生可对应多个标本条码的箱码；应急检测数据库...; 钱子煜刘志勇邵晶李梦施建华祝晓峰

荧光定量PCR方法在沙门菌鉴定中的应用被引量：10: 2005年; [目的 ]　用taqman技术建立沙门菌荧光定量聚合酶链反应 (PCR)检测方法 ,尝试快速、准确地鉴定沙门菌。　 [方法 ]　根据沙门菌GenBankAccessionNOU2 5 3 5 2基因序列 ,设计并合成引物和荧光标记探针。将PCR扩增的沙门菌基因片段克隆导入载体 ,构建的重组质粒经筛选、鉴定后 ,作为阳性模板 ,用于标准曲线的制定。利用荧光定量聚合酶链反应 (PCR)技术进行各类菌株的定性鉴定。　 [结果 ]　应用重组质粒制作的定量曲线 ,其循环阈值与模板浓度的对数值具有良好的线性关系 ,相关系数为 0 .999。检测各类菌株 ,其中沙门菌 41株、H抗原丢失的沙门菌 16株均阳性 ;非沙门菌 10 9株均阴性。　 [结论 ]　建立了鉴定沙门菌的荧光定量PCR方法 ,该方法简便、快速、准确。; 赵雪涛陈军刘志勇; 关键词：荧光定量聚合酶链反应沙门菌

上海市徐汇区2011年感染性腹泻病原学及流行病学特征分析被引量：14: 2013年; [目的]了解上海市徐汇区感染性腹泻的病原学及流行病学特征,为感染性腹泻的有效控制提供依据。[方法]对徐汇区6家医院肠道门诊的腹泻病例进行流行病学分析,并采用PCR方法检测其常见致病菌,对肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)阳性菌株进行耐热肠毒素(ST)和不耐热肠毒素(LT)基因检测和药敏试验。[结果]共检出常见致病菌54株,检出率为9.31%,其中ETEC占阳性菌株的57.41%,20～39岁年龄段人群致病菌检出率最高(14.15%),ETEC肠毒素类型以ST为主(ST>LT>ST/LT),ETEC对头孢他啶全部敏感。[结论]ETEC是徐汇区感染性腹泻的主要致病菌,应对ETEC引起的感染性腹泻给予足够的重视。; 张春华赵雪涛张俊婕刘志勇; 关键词：感染性腹泻流行病学致病菌

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刘志勇