刘影
- 作品数：7 被引量：2H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大鼠心脏报告基因显像的放射性自显影研究
- 目的:心脏疾病的基因治疗具有良好的应用前景,但是对治疗基因表达的监测一直缺乏有效、无创和可重复的手段,核素报告基因显像为这一目的提供了良好的方法。但是目前该方法大多数用于肿瘤中,而在心脏中应用较少。本研究应用 HSV1-...
- 兰晓莉刘影吴涛张亮尹小花王瑞华张永学
- 文献传递
- 报告基因在大鼠心肌中表达的放射性自显影
- 2009年
- 目的以单纯疱疹病毒1-胸苷激酶（HSV1-tk）为报告基因，以^131I标记的氟．碘阿糖基脲嘧啶（FIAU）为报告探针，对转染HSV1-tk基因的大鼠心肌组织行放射性自显影（ARG）研究，以探讨该报告系统用于心脏报告基因显像的可行性，并为显像的最佳病毒滴度和显像时间提供理论基础。方法制作腺病毒（Ad）为载体携带HSV1-tk基因的重组体Ad5-tk及空载病毒（Ad5-null），SD大鼠心肌内注射Ad5-tk及Ad5-null。根据目的不同进行分组如下：（1）转染报告基因后时间对显像的影响：心肌内转染1×10^8 pfu Ad5-tk后第1、2、3、5、7天注射^131I-FIAU；（2）转染不同病毒滴度对显像的影响：心肌内注射不同滴度的Ad5-tk（5×10^8，1×10^8，5×10^7，1×10^7pfu），2d后注射^131I-FIAU。对照组均采用注射同体积的Ad5-null。注射^131I-FIAU 24h后断颈法处死大鼠，取出心脏，测量γ计数值，行ARG研究，逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）从mRNA水平证实，并对ARG图像和RT-PCR图像行半定量分析。结果ARG及RT-PCR图像上均可见局部报告基因的表达随感染滴度的增加而增高，随感染时间的延长而降低。半定量分析证实在滴度和时间上RT-PCR及γ计数与放射性自显影呈相关关系：不同滴度Ad5-tk转染大鼠心肌细胞，RT—PCR与ARG相关系数r^2=0．963，P〈0．05，γ计数与ARG相关系数r^2=0．996，P〈0．01；不同时间Ad5-tk转染大鼠心肌细胞，RT—PCR与ARG相关系数r^2=0．950，P〈0．05，γ计数与ARG相关系数r^2=0．980，P〈0．01。结论应用ARG方法证实HSV1-tk为报告基因，FIAU为报告探针的系统可以用于心肌报告基因显像，显像最佳的转染滴度为1×10^8pfu，最佳的显像时间为转染后24～48h，为在体进行报告基因心脏显像提供了理论基础。
- 刘影兰晓莉吴涛尹小花张永学
- 关键词：心脏放射自显影术
- 单纯疱疹病毒1-胸苷激酶报告基因显像研究进展
- 2007年
- 放射性核素报告基因显像技术作为监测基因治疗表达的一种有效手段，是目前研究的热点。报告基因系统主要有三类，其中酶的报告基因系统中的单纯疱疹病毒1-胸苷激酶由于其良好的理化特性，适合作为报告基因而对其进行了深入、广泛的研究，它的两类底物是嘌呤核苷衍生物和无环鸟苷衍生物，目前已经用不同放射性核素进行标记而达到显像目的。
- 刘影兰晓莉张永学
- 关键词：放射性核素显像
- 腺病毒载体介导的HSV1-tk报告基因感染心肌细胞后摄取^(125)I-FIAU的实验研究
- 2008年
- 携带HSV1-tk的重组腺病毒(Ad5-tk)以感染复数(MOI)为20、40、80的病毒滴度感染体外培养的乳鼠原代心肌细胞;通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测感染后心肌细胞活力;应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测基因转导后心肌细胞内HSV1-tkmRNA的表达情况,并研究对报告探针125I-FIAU的摄取情况。结果显示:不同滴度Ad5-tk感染组心肌细胞存活率与时间均呈负相关,且病毒滴度越大,心肌细胞存活率越低;心肌细胞感染Ad5-tk后24h,RT-PCR即可检测到HSV1-tkmRNA的表达,且MOI=40感染组的表达量高于MOI=20感染组(P<0.01);心肌细胞感染不同滴度Ad5-tk后对125FIAU的摄取与时间呈正相关,且MOI=40感染组在各时间点的摄取率高于其余各组(P<0.01)。表明腺病毒载体介导的报告基因HSV1-tk进入心肌细胞后,能表达生成有活性的磷酸化酶HSV1-TK,使心肌细胞对核素标记报告探针125I-FIAU有明确的摄取,摄取程度与时间呈正相关,且感染滴度为40时摄取率最高,这为活体报告基因心脏显像提供了细胞水平依据。
- 尹小花兰晓莉王瑞华刘影张永学
- 关键词：报告基因腺病毒细胞摄取心肌细胞
- 家兔心脏报告基因表达的SPECT显像研究
- 兰晓莉刘影张亮吴涛何勇蒋日烽张斌青安锐张永学
- 家兔心脏报告基因表达的单光子发射计算机断层显像研究
- 2009年
- 目的以单纯疱疹病毒1-胸苷激酶（HSV1-tk）为报告基因，以131^I标记的氟-碘阿糖基脲嘧啶（FIAU）为报告探针，对心肌内转染HSV1-tk的家兔行心脏报告基因单光子发射计算机断层（SPECT）显像，以探讨该报告系统应用于SPECT心脏报告基因显像的可行性，为SPECT报告基因心脏显像最佳转染滴度、显像时间选择提供依据。方法制作腺病毒（Ad）为载体携带HSV1-tk基因的重组体Ad—tk，家兔心肌内注射Ad-tk。实验分2部分：（1）转染报告基因后不同时间对显像的影响：家兔心肌注射不同滴度的Ad—tk（1×10^9、5×10^8、1×10^8、5×10^7、1×10^7pfu），2d后耳缘静脉注射131^I—FIAU600μCi行6、24、48和72h心肌SPECT显像，注射1×10^9pfu Ad—tk的家兔继续行96和120h显像。（2）不同Ad-tk滴度对显像的影响：家兔心肌注射不同滴度的Ad-tk（1×10^9、5×10^8、1×10^8、5×10^7、1×10^7pfu），2d后耳缘静脉注射131^I-FIAU600μCi行6、24和48h心肌SPECT显像，显像结束后处死家兔，取出心脏，测量γ计数值，行逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）研究，并对SPECT图像和RT-PCR图像行半定量分析。结果SPECT图像可见Ad-tk在注射局部表达，而非注射部位未见表达，对照组心肌除6h可隐约显影外，其余时间均未见显影。RT-PCR证实HSV1-tk在注射部位表达。不同的Ad-tk滴度，SPECT靶／非靶比值与γ计数值呈正相关（r^2=0．933，P〈0．01），与HSV1-tk的表达亦呈正相关（r^2=0．877，P〈0．01）。SPECT可检测到滴度低至1×10^7pfu的Ad—tk在心肌内的表达。结论应用HSV1-tk为报告基因，FIAU为报告探针的SPECT心肌报告基因显像是可行的。SPECT心肌报告基因显像可半定量地监测报告基因在体内的表达。
- 刘影兰晓莉张亮吴涛蒋日烽张永学
- 131^I-FIAU在不同载体介导的HSV1-tk转导心肌细胞中的实验研究被引量：2
- 2009年
- 目的为以单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因（HSV1-tk）为报告基因的核素心脏显像寻找合适的载体并提供依据。方法以胶原酶单次消化法获得乳鼠原代心肌细胞，分别应用重组腺病毒Ad5-HSV1-tk（Ad5-tk）和脂质体lipofectamine^TM2000包裹的重组质粒pDC316-tk（pDC316-tk／lipoplex）将报告基因HSV1-tk转导入细胞，以空载体腺病毒作为对照；采用Iodogen固相氧化法对特异性报告探针氟-碘阿糖呋喃基脲嘧啶（FIAU）进行131^I标记，经Sep-Pak C18反相色谱层析柱纯化后，测定标记物的标记率和放化纯；比较各组细胞对131^I-FIAU的摄取情况，并应用半定量反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫细胞化学方法，在mRNA和蛋白质水平检测不同载体介导HSV1-tk转导心肌细胞后HSV1-tk的表达。结果131^I-FIAU的标记率为（53．82±2．05）％，放化纯为（94．85±1．76）％，标记物在体外稳定存在；转导后5h，Ad5-tk感染组和pDC316-tk／lipoplex转染组对131^I-FIAU的摄取率分别为（12．55±0．37）％、（2．09±0．34）％，且各时间点摄取率前者均明显高于后者（t=12．978～38．253，P均〈0．01）；2种载体介导心肌细胞转导后24h，RT—PCR即可检测到HSV1-tk mRNA的表达，且Ad5-tk感染组的表达水平明显高于pDC316-tk／lipoplex转染组（3．11±0．14与1．60±0．05，t=17．663，P〈0．01）；免疫细胞化学检测中二者阳性率分别为（81．70±0．40）％、（22．06±0．32）％，差异有统计学意义（t=23．237，P〈0．01）。结论腺病毒载体介导HSV1-tk感染心肌细胞的效率和对标记探针的摄取率均明显高于脂质体介导组，其可做为活体报告基因心脏显像的载体，可得到更为清晰的显像图。
- 尹小花兰晓莉王瑞华刘影张永学
- 关键词：心肌细胞转导碘放射性同位素
