吴涛
- 作品数：15 被引量：25H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属协和医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 分子影像报告基因系统的研究进展
- 2010年
- 分子影像报告基因系统的应用使基因治疗从实验阶段逐渐走向了临床应用，为无创性监测治疗基因的表达及进行定量分析提供了方法学技术。目前研究最多、最成熟的仍是放射性核素报告基因系统，近年来磁共振报告基因系统和光学报告基因系统的兴起和发展，极大地丰富和完善了分子影像报告基因系统的内容，并且在与应用化学和分子生物学等多学科交叉合作的基础上，涌现出了很多新型的修饰或改良的报告基因和分子探针。该文主要概述各类报告基因系统的优缺点和发展趋势。
- 吴涛安锐
- 关键词：基因分子探针分子影像技术
- 重组质粒pcDNA3.1-TK-IRES-BDNF的构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达
- 2010年
- 目的体外构建携带报告基因胸腺嘧啶核苷激酶(TK)和治疗基因脑源性神经营养因子(BDNF)的重组质粒载体pcDNA3.1-TK-IRES-BDNF,并检测其在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的表达。方法采用密度梯度离心法分离获得BMSCs,进行细胞免疫化学鉴定;应用PCR技术获得HSV1-TK、内部核糖体进入位点(IRES)、BDNF的cD-NA序列,酶切后依次插入到pcDNA3.1的多克隆位点(MSC)中,酶切和序列分析鉴定;脂质体介导重组质粒pcD-NA3.1-TK-IRES-BDNF转染BMSCs,RT-PCR和Western blot检测其目的基因表达。结果重组质粒pcDNA3.1-TK-IRES-BDNF经酶切和序列分析鉴定与预期设计一致;RT-PCR和Western blot检测证实TK和BDNF在IRES介导下可同时表达。结论成功构建重组质粒pcDNA3.1-TK-IRES-BDNF并在BMSCs中有效表达,为下一步核素活体示踪转基因BMSCs治疗脑血管疾病奠定了实验基础。
- 张斌青安锐吴涛孙逊
- 关键词：骨髓间充质干细胞报告基因
- 利用报告基因rNIS监测大鼠骨髓间充质干细胞移植大鼠心肌的可行性研究被引量：4
- 2010年
- 目的 研究大鼠钠碘转运体（rNIS）作为报告基因监测大鼠骨髓间充质干细胞（rBMSC）移植至大鼠心肌的可行性.方法 构建含rNIS/增强绿色荧光蛋白（EGFP）基因的重组腺病毒载体（Ad/rNIS/EGFP）,转染rBMSC后应用荧光显微镜观察细胞表达EGFP情况.按随机数字表法将健康大鼠分为3组,rNIS组大鼠心肌内移植转染rNIS的rBMSC 抑制组大鼠心肌内移植转染rNIS的rBMSC,γ显像前口服高氯酸纳 对照组大鼠心肌内移植未转染病毒的rBMSC.细胞移植到大鼠心肌后,以99TcmO4-作为报告探针对大鼠进行γ显像,随后进行生物学分布实验,用实时聚合酶链反应（PCR）和Western blot分别检测心肌组织中rNIS基因和蛋白表达水平,免疫组织化学检测心肌组织中CD11b、CD29、CD34、CD44、CD45和CD90表达情况.组间计量资料的差异用t检验分析.结果 重组腺病毒转染后,荧光显微镜下可见到高表达EGFP的rBMSC.rNIS转染的rBMSC移植到大鼠心肌后,γ显像能清晰显示移植部位的心肌,心肌/右前肢放射性比值（RUR）为6.7±0.4,对照组RUR为3.0±0.2,二者之间比较差异有统计学意义,t=2.78,P=0.03.生物学分布实验中,对照组心肌组织的每克组织百分注射剂量率（%ID/g）为2.5±0.4,明显低于rNIS组的60.2±20.8,差异有统计学意义,t=7.13,P＜0.001.移植心肌组织中rNIS的基因和蛋白都高表达,而对照组心肌组织rNIS表达较低.移植转染细胞的心肌组织中,CD29、CD44、CD90表达阳性,CD11b表达弱阳性,CD34、CD45表达阴性.结论 rNIS可作为报告基因有效监测rBMSC移植大鼠心肌.
- 胡硕兰晓莉曹卫曹国祥张国鹏张斌青吴涛常伟张永学
- 关键词：心肌干细胞钠碘转运体放射性核素显像
- 家兔心脏报告基因表达的单光子发射计算机断层显像研究
- 2009年
- 目的以单纯疱疹病毒1-胸苷激酶（HSV1-tk）为报告基因，以131^I标记的氟-碘阿糖基脲嘧啶（FIAU）为报告探针，对心肌内转染HSV1-tk的家兔行心脏报告基因单光子发射计算机断层（SPECT）显像，以探讨该报告系统应用于SPECT心脏报告基因显像的可行性，为SPECT报告基因心脏显像最佳转染滴度、显像时间选择提供依据。方法制作腺病毒（Ad）为载体携带HSV1-tk基因的重组体Ad—tk，家兔心肌内注射Ad-tk。实验分2部分：（1）转染报告基因后不同时间对显像的影响：家兔心肌注射不同滴度的Ad—tk（1×10^9、5×10^8、1×10^8、5×10^7、1×10^7pfu），2d后耳缘静脉注射131^I—FIAU600μCi行6、24、48和72h心肌SPECT显像，注射1×10^9pfu Ad—tk的家兔继续行96和120h显像。（2）不同Ad-tk滴度对显像的影响：家兔心肌注射不同滴度的Ad-tk（1×10^9、5×10^8、1×10^8、5×10^7、1×10^7pfu），2d后耳缘静脉注射131^I-FIAU600μCi行6、24和48h心肌SPECT显像，显像结束后处死家兔，取出心脏，测量γ计数值，行逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）研究，并对SPECT图像和RT-PCR图像行半定量分析。结果SPECT图像可见Ad-tk在注射局部表达，而非注射部位未见表达，对照组心肌除6h可隐约显影外，其余时间均未见显影。RT-PCR证实HSV1-tk在注射部位表达。不同的Ad-tk滴度，SPECT靶／非靶比值与γ计数值呈正相关（r^2=0．933，P〈0．01），与HSV1-tk的表达亦呈正相关（r^2=0．877，P〈0．01）。SPECT可检测到滴度低至1×10^7pfu的Ad—tk在心肌内的表达。结论应用HSV1-tk为报告基因，FIAU为报告探针的SPECT心肌报告基因显像是可行的。SPECT心肌报告基因显像可半定量地监测报告基因在体内的表达。
- 刘影兰晓莉张亮吴涛蒋日烽张永学
- 131I-FIAU／TK报告基因系统监测大鼠脑梗死模型中移植细胞的研究被引量：3
- 2011年
- 目的检测经不同途径移植骨髓间充质干细胞后大鼠脑梗死模型中131I一氟一碘阿糖呋喃基尿嘧啶（FIAU）的生物分布及脑组织中胸苷激酶（TK）基因的表达，为核素报告基因显像无创性监测细胞移植治疗脑梗死提供实验依据。方法制备携带TK一内部核糖体连接位点一脑源性神经生长因子（IRES—BDNF）基因的腺病毒重组体Ad5一TK—IRES—BDNF一增强型绿色荧光蛋白（EGFP）；线栓法制作大鼠脑梗死模型；将转基因的干细胞分别通过脑实质、侧脑室、颈动脉和尾静脉注射人大鼠脑梗死模型中，以正常大鼠为对照组；Iodogen固相氧化法标记氟·阿糖呋喃基尿嘧啶（FAU）后进行生物分布研究，计算％ID／g；采用实时定量PCR和Westernblot定量分析TK基因的表达；数据分析采用独立样本t检验、单因素方差分析及Pearson相关分析。结果原位移植组梗死侧脑组织中的％ID／g为0．124±0．013，明显高于侧脑室移植组（0．052±0．004）、颈动脉移植组（0．061±0．002）、尾静脉移植组（0．059±0．005）和对照组（0．005±0．001），差异有统计学意义（t=2．913～5．652，P均〈0．05），其他移植细胞组组间差异无统计学意义（￡=0．694—1．448，P均〉0．05）。所有移植细胞组内两侧脑组织％ID／g的差异有统计学意义（f=9．004～15．734，P均〈0．05），而对照组两侧间差异无统计学意义（t=1．511，P=0．182）。此外，原位移植组梗死侧脑组织中TK基因的表达高于其他各组，差异有统计学意义（t=7．482～12．371，P均〈0．05）；且脑组织TK基因表达的相对量与％ID／g呈正相关（r=0．971，P〈0．001）；脑组织内TK／[3一actin的比值与％ID／g呈正相关（r=0．899，P：0．002）。结论原位注射是治疗脑梗死的最佳细胞移植途径；选择适当示踪剂，可利用PET或SPECT进行无创性活体监测细胞移植治疗脑梗死�
- 吴涛安锐张斌青孙逊郎军涛
- 关键词：碘放射性同位素
- 大鼠脑梗死模型中移植转基因骨髓间充质干细胞后的放射自显影研究
- 目的通过放射自显影方法验证活体报告基因显像的可行性,获得最佳的显像条件,并且采用荧光显微镜间接监测细胞移植后的存活情况。方法线栓法制备大鼠脑梗死模型,Iodogen固相氧化法标记FAU,于立体定位仪上进行细胞原位移植,麻...
- 吴涛安锐郎军涛
- 报告基因在大鼠心肌中表达的放射性自显影
- 2009年
- 目的以单纯疱疹病毒1-胸苷激酶（HSV1-tk）为报告基因，以^131I标记的氟．碘阿糖基脲嘧啶（FIAU）为报告探针，对转染HSV1-tk基因的大鼠心肌组织行放射性自显影（ARG）研究，以探讨该报告系统用于心脏报告基因显像的可行性，并为显像的最佳病毒滴度和显像时间提供理论基础。方法制作腺病毒（Ad）为载体携带HSV1-tk基因的重组体Ad5-tk及空载病毒（Ad5-null），SD大鼠心肌内注射Ad5-tk及Ad5-null。根据目的不同进行分组如下：（1）转染报告基因后时间对显像的影响：心肌内转染1×10^8 pfu Ad5-tk后第1、2、3、5、7天注射^131I-FIAU；（2）转染不同病毒滴度对显像的影响：心肌内注射不同滴度的Ad5-tk（5×10^8，1×10^8，5×10^7，1×10^7pfu），2d后注射^131I-FIAU。对照组均采用注射同体积的Ad5-null。注射^131I-FIAU 24h后断颈法处死大鼠，取出心脏，测量γ计数值，行ARG研究，逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）从mRNA水平证实，并对ARG图像和RT-PCR图像行半定量分析。结果ARG及RT-PCR图像上均可见局部报告基因的表达随感染滴度的增加而增高，随感染时间的延长而降低。半定量分析证实在滴度和时间上RT-PCR及γ计数与放射性自显影呈相关关系：不同滴度Ad5-tk转染大鼠心肌细胞，RT—PCR与ARG相关系数r^2=0．963，P〈0．05，γ计数与ARG相关系数r^2=0．996，P〈0．01；不同时间Ad5-tk转染大鼠心肌细胞，RT—PCR与ARG相关系数r^2=0．950，P〈0．05，γ计数与ARG相关系数r^2=0．980，P〈0．01。结论应用ARG方法证实HSV1-tk为报告基因，FIAU为报告探针的系统可以用于心肌报告基因显像，显像最佳的转染滴度为1×10^8pfu，最佳的显像时间为转染后24～48h，为在体进行报告基因心脏显像提供了理论基础。
- 刘影兰晓莉吴涛尹小花张永学
- 关键词：心脏放射自显影术
- ^18F-FDG PET—CT对上消化道肿瘤手术和放化疗后复发转移的评估被引量：4
- 2011年
- 目的评估^18F—FDGPET—CT对上消化道肿瘤手术加放化疗后复发转移的诊断价值。方法回顾性分析51例上消化道肿瘤（食管癌21例．胃癌30例）手术和放化疗后的PET-CT显像资料．图像分析采用目视法及半定量分析法（最大标准摄取值，SUVmax）。结果51例患者PET-CT显像阳性32例．其中单纯局部复发为7例．单纯远处转移11例，局部复发并转移为14例。PET—CT诊断局部复发的敏感度为100％（18／18），特异度为90．9％（30／33）；诊断远处转移的敏感度为92．6％（25／27），特异度为100％（25／25）。结论ISF—FDGPET—CT对上消化道肿瘤手术加放化疗后复发或转移具有较高的诊断价值。
- 吴涛安锐张斌青孙逊张永学
- 关键词：上消化道肿瘤正电子发射断层显像
- 家兔心脏报告基因表达的SPECT显像研究
- 兰晓莉刘影张亮吴涛何勇蒋日烽张斌青安锐张永学
- ^(18)F-FDG PET/CT对不明原因发热病因的诊断价值被引量：9
- 2010年
- 目的:探讨18F-脱氧葡萄糖(FDG)PET/CT显像对不明原因发热(FUO)的影像学表现及病因诊断价值。方法:回顾性分析常规检查未能明确诊断FUO病因的45例患者18F-FDG PET/CT显像资料,根据病理检查或临床随访结果分析18F-FDG PET/CT显像结果,测量异常摄取病灶最大标准摄取值(SUVmax)。采用SPSS 11.0软件进行数据处理,SUVmax两样本均数比较采用t检验。结果:45例患者中35例18F-FDG PET/CT全身显像发现至少有1处异常放射性浓聚灶,随访证实其中9例为恶性肿瘤,26例为感染或炎性病变,二者病变的SUVmax分别为6.09±1.46和2.57±1.33,差异有显著性意义(t=6.67,P<0.05);10例18F-FDG PET/CT显像阴性患者,6例病因不明,4例为风湿性疾病。18F-FDGPET/CT显像有助于临床FUO病因诊断。结论:全身18F-FDG PET/CT显像在其它检查方法未能明确诊断FUO病因时,可为临床进一步诊断提供重要的参考价值。
- 张斌青张永学吴涛孙逊安锐
- 关键词：正电子发射断层显像术肿瘤
