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刘俊娥: 作品数：18 被引量：94H指数：4; 供职机构：内蒙古大学生命科学学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金内蒙古自治区教育厅重点研究项目转基因生物新品种培育专项更多>>; 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>

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中国锦鸡儿属的分子系统发育被引量：10: 2008年; 测定了中国锦鸡儿属Caragana各属下分类群20个代表种的ITS、trnL-F和trnS-G序列。基于3种DNA片段的单独分析所获得的系统发育树具有相似的拓扑结构;3种片段的合并分析提高了各分支的支持度,并获得了相似的系统发育树。落轴亚属subgen.Caragana的种类构成了一个在系统树上首先分化出来的单系分支,与形态特征和地理分布的研究一致。短齿系ser.Occidentales和长齿系ser.Bracteolatae的代表种构成了1个单独的分支,因此短齿系应被放入长齿系所属刺叶组sect.Longspina而不是针刺组sect.Spinosae或sect.Pruinosa。分子系统学证据支持依据叶片宽窄在掌叶组sect.Frutescentes中再划分2个系的形态学研究结论;但ser.Dasyphyllae和针刺系ser.Spinosae的亲缘关系较近,系统发育分析的结果似乎不支持在针刺组中单独划分2个系。宿轴类的物种聚成一个单系的分支,因此应被处理为一个组——鬼箭组sect.Jubatae;荚果里面被毛和无毛的种类各自构成2个小支,支持依据该特征在组下分系。系统树显示Sanczir定义的sect.Tragacanthoides显然为多系类群,应将该组中所包含的刺叶组、针刺组、和鬼箭组的种类划分出来。基于ITS的遗传距离表明卷叶锦鸡儿C.ordosica与藏锦鸡儿C.tibetica应该是2个不同的种。; 侯鑫刘俊娥赵一之; 关键词：锦鸡儿属 ITS 系统发育 TRNL-F

大肠杆菌-长双歧杆菌穿梭载体的构建及PTEN在长双歧杆菌中的表达被引量：22: 2006年; 长双歧杆菌可特异地定植于实体瘤低氧区,可用做肿瘤靶向性基因治疗的载体,而构建大肠杆菌-长双歧杆菌穿梭质粒则被证明是外源基因在长双歧杆菌中稳定表达的有效途径。为了构建能在长双歧杆菌中稳定表达外源基因的穿梭质粒并检测携带抑癌基因的工程菌对小鼠实体瘤的抑制效果,利用软件设计并合成了48条部分序列相互重叠的引物,通过PCR合成了长双歧杆菌质粒pMB1序列及长双歧杆菌HU启动子区序列,插入克隆载体pMD18-T,构建穿梭载体pMB-HU,该载体可在大肠杆菌DH5α及长双歧杆菌L17中稳定复制。PTEN基因编码具有蛋白质和酯类双重特异性磷酸酶活性的抑癌因子。将PTEN基因cDNA序列插入载体pMB-HU中HU启动子下游,构建重组质粒pMB-HU-PTEN,电击转化长双歧杆菌后,Western blot检测表明,表达产物中存在55kDa的PTEN蛋白特异条带。抑癌试验表明:与对照组相比,携带PTEN基因的长双歧杆菌可显著抑制小鼠实体瘤的生长。上述结果为以长双歧杆菌为载体的实体瘤靶向性基因治疗研究奠定了基础。; 侯鑫刘俊娥; 关键词：PTEN基因基因治疗

流感病毒和西尼罗病毒囊膜蛋白重要结构域的研究: 流感是由RNA病毒引起的、流行于人群和多种其它动物中的急性、高度传染性疾病。流感病毒的快速变异导致流感病毒疫苗的研发一直滞后，同时，多种亚型的流感病毒出现了耐药毒株，因此，迫切需要研制新型的流感病毒抑制剂。依据流感病毒血...; 刘俊娥; 关键词：流感病毒西尼罗病毒囊膜蛋白免疫荧光

基于ITS序列和trnL-F序列探讨小叶锦鸡儿、中间锦鸡儿和柠条锦鸡儿的种间关系被引量：41: 2006年; 中间锦鸡儿CaraganadavazamciiSancz.的分类处理一直存在争议,它与小叶锦鸡儿C.microphyllaLam.和柠条锦鸡儿C.korshinskiiKom.的关系尚不清楚。该种被处理为一个独立的种或后两个种的变种。本文利用ITS序列和叶绿体trnL-F序列,综合形态和地理分布,探讨了中间锦鸡儿的起源及与另外两个种的种间关系。结果显示,中间锦鸡儿的trnL-F序列与小叶锦鸡儿完全一致,而与柠条锦鸡儿有明显差异。中间锦鸡儿的ITS序列高度纯合,不支持该种可能是杂交起源的假设。相反,另外两个种的ITS序列均出现多个位点杂合,克隆后均得到2种不同的序列。中间锦鸡儿的ITS序列与小叶锦鸡儿2种序列中的1种完全一致。该结果表明,中间锦鸡儿可能作为亲本之一参与了小叶锦鸡儿的杂交起源,或者基因流是造成这两个种形态相似的主要原因。中间锦鸡儿与柠条锦鸡儿形态上的相似可能是趋同进化的表现。; 侯鑫刘俊娥赵一之赵利清; 关键词：小叶锦鸡儿中间锦鸡儿柠条锦鸡儿 ITS序列 TRNL-F序列

PJ综合症相关抑癌基因LKB1/STK11的逆转录PCR法克隆及序列分析被引量：2: 2005年; 从正常人胎盘组织中克隆出人野生型PJ综合症相关抑癌基因LKB1/STK11cDNA片段.以提取的总RNA为模板,采用逆转录法获得cDNA第一条链,采用94℃变性、72℃退火及延伸的特殊条件,经PCR扩增出抑癌基因LKB1/STK11cDNA片段,克隆到T载体,在国内首次报道了LKB1/STK11基因的克隆.序列分析表明,该cDNA全长1299bp,与GenBank中人野生型LKB1cDNA编码序列完全相同,证实获得了人野生型抑癌基因LKB1/STK11的cDNA克隆.LKB1/STK11cDNA的成功克隆为其原核表达载体的构建和LKB1/STK11蛋白在细胞内的作用及其抑癌效果、抑癌机理的研究打下了基础.; 侯鑫刘俊娥扈廷茂; 关键词：逆转录PCR CDNA克隆抑癌基因逆转录

西尼罗病毒膜蛋白第三结构域的单抗的制备和鉴定: 西尼罗病毒(West Nile Virus,WNV)于1999年在美国纽约首先爆发,其后快速传播到全球很多国家和地区。由于 WNV 可以感染人和多种动物,包括迁徙鸟类和蚊虫,因此,其感染和快速传播已经引起全球关注,成为新...; 刘俊娥袁放高峰高福; 文献传递

具有磷酸酶活性的重组PTEN蛋白可抑制癌细胞的迁移: 2009年; PTEN是迄今为止发现的第一个具有双特异性磷酸酶活性的抑癌因子,可通过对粘着斑激酶的去磷酸化抑制细胞迁移.在前期研究工作中证实了在大肠杆菌中表达的重组PTEN蛋白具有抑癌活性后,本研究进一步检测重组PTEN蛋白的磷酸酶活性及其对粘着斑激酶FAK磷酸化程度和细胞迁移的影响.对[D 33-2P]P IP 3体外去磷酸化的实验表明重组PTEN蛋白具有明显的脂质磷酸酶活性;将重组PTEN蛋白转染DU-145细胞后,细胞中FAK的磷酸化水平明显下降,表明重组PTEN蛋白具有蛋白磷酸酶活性.细胞迁移实验结果表明转染的重组PTEN蛋白可以抑制DU-145细胞的迁移作用,从而起到抑制肿瘤转移或浸润的作用.; 侯鑫刘俊娥杜玉梅扈廷茂; 关键词：磷酸酶活性肿瘤细胞迁移 FAK

HeLa细胞中激酶NUAK1调控Tuberiun的磷酸化: 2012年; NUAK1是LKB1的下游激酶之一,可被LKB1磷酸化而激活,但对其在LKB1相关信号通路中的功能仍缺乏了解.本研究发现在HeLa细胞中重建LKB1表达后NUAK1与tu-berin蛋白免疫共沉淀,提示在野生型LKB1存在时NUAK1与tuberin可能存在直接相互作用.进一步的激酶活性测定和in vivo蛋白磷酸化实验表明:在HeLa细胞中葡萄糖匮乏条件下,野生型LKB1可显著激活NUAK1的激酶活性;而被激活的NUAK1可明显提高tuberin的磷酸化水平,使用NUAK1siRNA pool干扰NUAK1的表达则几乎将tuberin的磷酸化水平降低为零.上述结果表明NUAK1可能介导了LKB1对tuberin磷酸化的调节,进而下调mTOR通路,抑制蛋白质合成与细胞生长增殖.; 侯鑫丁文玉安俊峰刘俊娥; 关键词：LKB1 激酶 TUBERIN 磷酸化

内蒙古白绒山羊VEGF164基因cDNA克隆及组织表达特异性分析被引量：4: 2011年; 旨在克隆内蒙古白绒山羊血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF164)基因并分析其基本表达模式。采用RT-PCR技术克隆基因,将得到的基因cDNA序列及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。利用半定量RT-PCR方法进行组织表达检测。获得了内蒙古白绒山羊VEGF164基因编码区cDNA全长序列,扩增片段全长573 bp,包含了完整的ORF,编码190个氨基酸残基。核苷酸序列与绵羊的VEGF164(EU857623.1)基因同源性为99%,相应的氨基酸序列同源性为99%。SMART程序分析表明,ORF编码的蛋白质具有信号肽序列及血小板衍生和血管内皮生长因子家族(PDGF,VEGF)结构域。Psite程序分析表明,有1个蛋白激酶C磷酸化位点,4个酪蛋白激酶磷酸化位点。ProtComp Version 9.0程序分析将其定位于细胞外。RT-PCR检测表明,VEGF164基因在绒山羊脑、心脏、睾丸、胰腺、脾、肾和肺组织中均有表达。; 鲍文蕾杨娇馥李彬刘俊娥王潇郭旭东王志钢侯鑫刘东军; 关键词：血管内皮生长因子基因克隆

内蒙古白绒山羊VEGF164基因毛囊特异性表达载体的构建及胎儿成纤维细胞的稳定转染被引量：4: 2011年; 【目的】构建绒山羊血管内皮生长因子164(vascular endothelial growth factor 164,VEGF164)基因的毛囊特异表达载体并稳定转染胎儿成纤维细胞,筛选获得稳定表达红色荧光蛋白和毛囊特异表达VEGF164并可用于核移植的转基因细胞克隆。【方法】以pCDsRed2载体为基本骨架将VEGF164基因亚克隆到KAP6-1启动子下游,接续连接红色荧光蛋白表达元件,构建VEGF164基因毛囊特异表达载体pCDsRed2-KV(6.3 kb)。外源表达载体以lipofectamineTM2000介导转染胎儿成纤维细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合。【结果】在构建的表达载体pCDsRed2-KV中,VEGF164基因被正确连接在毛囊特异性启动子KAP6-1下游,基因下游按顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因;外源KAP6-1启动子和VEGF164基因整合到细胞基因组中。【结论】成功构建稳定表达红色荧光蛋白和毛囊特异表达VEGF164的真核表达载体,稳定转染绒山羊胎儿成纤维细胞,为下一步通过克隆技术获得转VEGF164基因绒山羊提供了条件。; 鲍文蕾李彬侯鑫刘俊娥郭旭东王志钢刘东军; 关键词：VEGF 稳定转染

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