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内蒙古白绒山羊IGF-IR基因cDNA克隆及组织表达特异性分析: 2012年; 旨在克隆内蒙古白绒山羊IGF-IR基因并分析其基本表达模式。采用RT-PCR克隆基因,将得到的IGF-IR基因cDNA片段的核苷酸序列及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。半定量RT-PCR进行组织特异性表达检测。获得了内蒙古白绒山羊IGF-IR基因3'端编码区2 118 bp的cDNA序列(JN200823),编码705个氨基酸残基。核苷酸序列与牛的IGF-IR(XM606794.3)基因同源性为98%,相应的氨基酸序列同源性为99%。SMART分析表明,推导出的编码蛋白具有跨膜域,酪氨酸激酶催化域。半定量RT-PCR检测表明,IGF-IR基因在绒山羊脑、胰腺、肝、肾组织中均有表达。; 宝梅英赵荷雅杨娇馥鲍文蕾李彬杨军侯鑫王志钢; 关键词：IGF-IR 组织特异性表达

内蒙古白绒山羊VEGF164基因cDNA克隆及组织表达特异性分析被引量：4: 2011年; 旨在克隆内蒙古白绒山羊血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF164)基因并分析其基本表达模式。采用RT-PCR技术克隆基因,将得到的基因cDNA序列及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。利用半定量RT-PCR方法进行组织表达检测。获得了内蒙古白绒山羊VEGF164基因编码区cDNA全长序列,扩增片段全长573 bp,包含了完整的ORF,编码190个氨基酸残基。核苷酸序列与绵羊的VEGF164(EU857623.1)基因同源性为99%,相应的氨基酸序列同源性为99%。SMART程序分析表明,ORF编码的蛋白质具有信号肽序列及血小板衍生和血管内皮生长因子家族(PDGF,VEGF)结构域。Psite程序分析表明,有1个蛋白激酶C磷酸化位点,4个酪蛋白激酶磷酸化位点。ProtComp Version 9.0程序分析将其定位于细胞外。RT-PCR检测表明,VEGF164基因在绒山羊脑、心脏、睾丸、胰腺、脾、肾和肺组织中均有表达。; 鲍文蕾杨娇馥李彬刘俊娥王潇郭旭东王志钢侯鑫刘东军; 关键词：血管内皮生长因子基因克隆

构建LEF1基因毛囊特异表达载体并稳定转染胎儿成纤维细胞: 2011年; 旨在构建内蒙古白绒山羊(Capra hircus)淋巴样增强因子-1(Lymphoid enhancer factor,LEF1)基因真核表达载体并转染胎儿成纤维细胞,获得稳定表达红色荧光蛋白及毛囊特异性表达LEF1的转基因细胞克隆。以pCDsRed2载体为基本骨架将LEF1基因亚克隆到KAP6-1启动子下游,连接红色荧光蛋白表达元件,构建LEF1基因毛囊特异表达载体pCDsRed-KL。外源表达载体以lipofectamineTM2000介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合。测序显示构建的表达载体pCDsRed-KL序列中,LEF1基因正确连接在KAP6-1启动子下游,顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因,载体构建正确。脂质体介导的稳定转染效率约为14.0%,经G418筛选得到高效表达红色荧光蛋白转基因细胞克隆。PCR检测显示外源KAP6-1启动子和LEF1基因整合到胎儿成纤维细胞基因组中。; 李彬鲍文蕾张涛侯鑫郭旭东王潇王志钢刘东军; 关键词：稳定转染

内蒙古白绒山羊LEF1基因皮肤特异性表达载体的构建及转基因细胞系的筛选: 本研究以皮肤特异性小鼠超高硫启动子(UHS启动子)为前导区,构建了LEFI的皮肤特异性表达载体pCDsRed-UL,筛选稳定转染的细胞系作为核供体,为即将通过核移植和克隆技术获得高产绒量的转基因绒山羊打下基础.; 李彬鲍文蕾张涛郭旭东王潇侯鑫王志钢刘东军

内蒙古白绒山羊VEGF164基因毛囊特异性表达载体的构建及胎儿成纤维细胞的稳定转染被引量：4: 2011年; 【目的】构建绒山羊血管内皮生长因子164(vascular endothelial growth factor 164,VEGF164)基因的毛囊特异表达载体并稳定转染胎儿成纤维细胞,筛选获得稳定表达红色荧光蛋白和毛囊特异表达VEGF164并可用于核移植的转基因细胞克隆。【方法】以pCDsRed2载体为基本骨架将VEGF164基因亚克隆到KAP6-1启动子下游,接续连接红色荧光蛋白表达元件,构建VEGF164基因毛囊特异表达载体pCDsRed2-KV(6.3 kb)。外源表达载体以lipofectamineTM2000介导转染胎儿成纤维细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合。【结果】在构建的表达载体pCDsRed2-KV中,VEGF164基因被正确连接在毛囊特异性启动子KAP6-1下游,基因下游按顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因;外源KAP6-1启动子和VEGF164基因整合到细胞基因组中。【结论】成功构建稳定表达红色荧光蛋白和毛囊特异表达VEGF164的真核表达载体,稳定转染绒山羊胎儿成纤维细胞,为下一步通过克隆技术获得转VEGF164基因绒山羊提供了条件。; 鲍文蕾李彬侯鑫刘俊娥郭旭东王志钢刘东军; 关键词：VEGF 稳定转染

内蒙古白绒山羊VEGF164基因克隆及毛囊特异性表达载体构建并稳定转染胎儿成纤维细胞: 血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial cell growth factor, VEGF)也称为血管渗透因子(vascularpermeabilityfactor, VPF)，对血管的发生和生长具...; 鲍文蕾李彬刘俊娥王潇郭旭东侯鑫王志钢刘东军; 关键词：白绒山羊血管内皮生长因子稳定转染胎儿成纤维细胞; 文献传递

绒山羊VEGF164基因cDNA核苷酸序列及其毛囊特异性表达载体: 本发明涉及从体外培养的绒山羊胎儿成纤维细胞分离的编码VEGF164蛋白的cDNA的核苷酸序列和与它对应的氨基酸序列及毛囊特异性表达VEGF164蛋白和稳定表达红色荧光蛋白的真核表达载体pCDsRed-KV。其特征在于：绒...; 王志钢侯鑫刘俊娥郭旭东鲍文蕾李彬刘东军; 文献传递

内蒙古白绒山羊LEF1基因皮肤特异性表达载体及其稳定转染细胞系的构建: 淋巴增强因子-1(Lymphoid enhancer factor1,LEF1)是淋巴增强因子／T-细胞因子(LEF／TCF)家族的成员之一,也是Wnt经典通路中的一个核心成分。LEF1通过与β-连环蛋白结合形成β-连环...; 李彬; 关键词：白绒山羊良种繁育转染细胞基因表达; 文献传递

知识库问答方法、电子设备及可读存储介质: 本发明公开了一种知识库问答方法、电子设备及可读存储介质，包括以下步骤：步骤1，面向特定领域构建语料库；步骤2，训练MA‑B模型对待回答问题进行分类；步骤3，抽取领域标识与待回答问题相同的用户问题，计算待回答问题与各用户问...; 王炜华飞龙王广义李彬高光来; 文献传递

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李彬