党时鹏
- 作品数：19 被引量：23H指数：3
- 供职机构：南京医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 二十二碳六烯酸通过磷脂酶C-三磷酸肌醇-钙离子途径激活正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道被引量：2
- 2016年
- 目的探讨二十二碳六烯酸（DHA）激活正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道（BK通道）的机制。方法采用酶消化法急性分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞；全细胞膜片钳实验技术记录正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流；膜内向外型单通道膜片钳实验技术记录不同钙离子浓度条件下BK通道电流，并计算开放概率（NP1）；钙离子成像技术测定不同浓度DHA作用后及分别采用磷脂酶（CPLC）受体抑制剂和三磷酸肌醇（IR）受体抑制剂预孵育冠状动脉平滑肌细胞后细胞内钙离子浓度变化。结果1μmol／LDHA可激活BK通道；在刺激电位60mV，电极外液钙离子浓度为0、0．01、0．1、1、3、10、50和100μmol／L条件下，BK通道NP。分别为0．0027±0．0004、0．0060±0．0014、0．0972±0．0106、0．1379±0．0329、0．4687±0．1637、2．0971±0．3104和3．1204±0．2427（P〈0．05，n=4）。未加DHA时，细胞内钙离子浓度荧光信号比值（R值）为0．51±0．01；加入0．001和0．01μmol／LDHA后，R值分别为0．53±0．02和0．55±0．01，与未加DHA相比差异无统计学意义（P〉0．05，n／〉5）；当加入的DHA浓度为0．1、0．3、1、3、5和10μmol／L时，其R值分别为0．64±0．01、0．65±0．01、0．70±0．01、0．69±0．01、0．68±0．01和0．67±0．02，ECEn为（0．04±0．02）μmol／L，与未加DHA比较，差异有统计学意义（P〈0．05，nI〉4）。分别采用PLC受体抑制剂U73122和IR受体抑制剂2-APB预孵育冠状动脉平滑肌细胞，测定加入0．1μmol／LDHA后R值分别为0．52±0．01和0．49±0．02，低于未加抑制剂的R值（0．64±0．01，P〈0．05，n≥4）。结论DHA可通过PLC—IP，Ca^2＋途径增加正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞内钙离子浓度激活BK通道，从而扩张血管，对心血管系统有一定的保护作用。
- 孙曼青钱玲玲党时鹏吴莹汤徐季圆王湘芸夏大云王文柴强陆彤王如兴
- 关键词：冠状血管大电导钙激活钾通道
- 腺苷三磷酸对冠状动脉平滑肌细胞BK通道的激活作用及其机制被引量：2
- 2015年
- 目的探讨腺苷三磷酸（ATP）对冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道（BK通道）的激活作用及其机制。方法采用酶消化法急性分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞；膜片钳实验技术记录全细胞状态下BK通道电流；钙离子成像技术记录ATP对细胞内钙离子浓度影响。结果膜片钳实验结果显示，加入1mmol／LATP前后，BK通道电流密度分别为（137±13）pA／pF和（179±15）pA／pF（P〈0．05）；钙离子成像结果显示，加入0．5mmol／LATP前后，细胞内钙离子浓度荧光信号强度比值分别为2．46±0．08和4．04±0．21（P〈0．05）。分别采用嘌呤（P2Y1）受体阻滞剂MRS2179、磷脂酶C（PLC）受体阻滞剂1373122和三磷酸肌醇（IP3）受体阻滞剂2-APB孵育冠状动脉平滑肌细胞，再测定加入0．5mmol／LATP后3组细胞内钙离子浓度荧光信号强度比值，分别是2．70±0．06、2．65±0．12和2．69±0．13，与未加入3种阻滞剂相比，钙离子浓度荧光信号强度比值均明显降低（P〈0．05）。结论ATP可以通过P2Y1．PLC—IP3通路升高细胞内钙离子浓度，从而激活BK通道。
- 王湘芸吴莹钱玲玲党时鹏季圆徐凤王萌汤徐姚勇王如兴
- 关键词：腺苷三磷酸大电导钙激活钾通道钙离子冠状动脉平滑肌细胞
- 聚乙烯亚胺修饰白蛋白微泡转染真核细胞的实验研究
- 目的：探讨聚乙烯亚胺修饰白蛋白微泡转染真核细胞的方法，从而提高白蛋白微泡转基因效率。
方法：(1)分别将25％人体白蛋白、葡萄糖和甘露醇等按一定的质量比置于10ml瓶中，混合后用超声振动仪声振20S(电压100V、...
- 党时鹏
- 关键词：聚乙烯亚胺聚乙二醇全氟丙烷基因转染
- 文献传递
- 四维超声定量技术评价不同分级肝硬化患者左房容积和功能的特征被引量：3
- 2021年
- 目的探讨四维超声定量技术评价不同程度肝硬化患者左房容积和应变功能变化的价值。方法纳入肝硬化患者60例,按照Child-Pugh分级分为Child-Pugh A组26例、Child-Pugh B组19例和Child-Pugh C组15例,对照组为60例同期健康体检者。应用四维超声左房定量技术(4D LAQ)检测,获得左房最大容积(LAV_(max))、左房最小容积(LAV_(min))及左房收缩前容积(LAV_(preA)),计算出左房每搏量(LAEV)和左房整体射血分数(LAEF);获取左室收缩期、舒张早期和舒张晚期的左房心肌纵向应变(LASr、LAScd和LASct)和圆周峰值应变参数(LASr_c、LAScd_c和LASct_c);同时测量常规超声参数:左房内径(LAD)、左室舒张末期内径(LVEDD)和左室射血分数(LVEF)等。结果与对照组相比,肝硬化各组的左房四维容积参数LAV_(max)、LAV_(min)、LAV_(preA)及LAEV均显著升高(P<0.01)。肝硬化Child-Pugh A组患者的LASr、LASct、LASr_c和LASct_c的绝对值较对照组增大(P<0.01),LAScd和LAScd_c的绝对值与对照组差异无统计学意义。Child-Pugh B和Child-Pugh C组患者LASr、LASct、LASr_c和LASct_c的绝对值均较Child-Pugh A组下降,LAScd和LAScd_c的绝对值较对照组降低(P<0.05)。相关分析显示LAV_(max)、LAV_(min)和LAV_(preA)与肝硬化分级均呈正相关(rs分别为0.383、0.325、0.302,P<0.05),LASr、LAScd、LASct、LASr_c、LAScd_c和LASct_c的绝对值与肝硬化的分级均呈负相关(rs分别为-0.387、-0.463、-0.623、-0.365、-0.456、-0.467,P<0.01)。结论四维超声左心房定量技术可敏感评价左房的结构和功能变化,为肝硬化心肌病患者早期诊断、治疗干预和疗效评价提供可靠的证据。
- 戴敏汪芸玏彭丽娟党时鹏钱大钧马芳山
- 关键词：心肌疾病心肌应变
- 血红素加氧酶1分子克隆及表达载体的构建
- 2009年
- 背景:近年来许多研究发现血红素加氧酶1具有抗炎、抗氧化及抗凋亡等作用,并且在心肌缺血-再灌注损伤等应激反应中有重要的保护作用,从而成为研究热点。目的:克隆大鼠血红素加氧酶1全长基因,并将其于真核表达载体PIRES2-EGFP相连接,构建血红素加氧酶1的真核表达载体。设计、时间及地点:实验于2008-03/06在苏州大学生物技术研究所完成。材料:成年雄性SD大鼠,由苏州大学动物实验中心提供,用于脾脏细胞总RNA的提取;克隆载体PMD18-T购自Takara公司;表达载体PIRES2-EGFP由苏州大学生物技术研究所保存。方法:分离大鼠脾脏获取脾脏细胞,Trizol法提取脾脏细胞的总RNA,经反转录-聚合酶链反应扩增获得血红素加氧酶1基因,将扩增出来的产物与克隆载体PMD18-T连接,转化TOP10感受态细菌,挑取阳性克隆经PCR及酶切鉴定后测序确证。测序正确后抽提质粒作为模板进行PCR,Sal-Ⅰ和BamH-Ⅰ同时双酶切PCR产物和载体PIRES2-EGFP,再在T4DNA连接酶的作用下进行连接,构建其真核表达载体。主要观察指标:血红素加氧酶1基因的克隆和DNA测序结果证实序列是否正确;PIRES2-EGFP/血红素加氧酶1真核表达载体的构建以及测序证实目的基因成功插入载体。结果:①实验完成了大鼠血红素加氧酶1基因的克隆,所获得的序列与GeneBank中收录的大鼠血红素加氧酶1序列完全一致。②构建真核表达载体PIRES2-EGFP/血红素加氧酶1,测序正确说明血红素加氧酶1基因成功插入表达载体PIRES2-EGFP中。结论:实验成功克隆了大鼠血红素加氧酶1基因全长,并构建了其真核表达载体。
- 张燕王如兴李肖蓉陈永井杨丽华党时鹏王明元张学光
- 关键词：血红素加氧酶1克隆
- 二十二碳六烯酸对糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道开放概率的影响被引量：2
- 2015年
- 目的：探讨二十二碳六烯酸（DHA）对糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道（BK通道）开放概率（NP0）的影响。方法选取体重（200±20）g，年龄6-8周的雄性SD大鼠20只为研究对象，采用随机数字表法分为糖尿病组（10只）和正常对照组（10只）。糖尿病组采用链脲霉素腹腔内注射，2周后测定大鼠血糖浓度，如血糖浓度低于300 mg/dl，则用等剂量链脲霉素再次腹腔内注射，当血糖浓度持续8周高于300 mg/dl视为造模成功。正常对照组大鼠腹腔内注射生理盐水。酶消化法急性分离正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞，单通道膜片钳实验技术记录正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流并比较不同浓度DHA作用下正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道NP0。两两比较采用t检验，组间比较采用单因素方差分析。结果当刺激电压为0、20、40、60、80、100、120 mV时，随着刺激电压增加，正常对照组和糖尿病组BK通道NP0均增加（F=15.28、9.72，均P〈0.05）。与正常对照组相比，当刺激电压〉60 mV后，糖尿病组BK通道NP0明显降低（分别为0.56±0.05比0.22±0.02，1.11±0.09比0.33±0.09，2.85±0.10比0.86±0.12，3.05±0.15比1.01±0.13， t=3.62、4.27、6.32、8.14，均P〈0.05）。在刺激电压60 mV和钙离子浓度1mmol/L条件下，当电极外液DHA浓度为0、0.01、0.10、0.30、1.00mmol/L时，正常对照组和糖尿病组BK通道NP0均无明显增加（F=3.01、2.61，均P〉0.05）；继续增加DHA的浓度，当DHA浓度为3、5、10mmol/L时，对照组BK通道NP0呈浓度依赖性增加，糖尿病组NP0呈浓度依赖性增加（F=10.21、7.32，均P〈0.05）。在DHA浓度相同情况下，糖尿病组BK通道NP0均低于对照组（t=2.71-8.54，均P〈0.05）。结论糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道功能受损，但DHA仍可激活BK通道，增加NP0，从而扩张冠状动脉而�
- 季圆王如兴钱玲玲党时鹏吴莹王萌徐凤王湘芸汤徐孙曼青李肖蓉
- 关键词：二十二碳六烯酸糖尿病冠状动脉膜片钳
- 不同浓度二十二碳六烯酸对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道的激活作用及其机制
- 2017年
- 目的:探讨不同浓度二十二碳六烯酸(DHA)对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾离子通道(BK通道)的激活作用及其机制。方法:酶消化法分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞。采用全细胞膜片钳实验技术记录在未孵育与孵育细胞色素P450环氧化酶抑制剂SKF525A并灌流不同浓度DHA条件下BK通道电流密度变化;采用单通道膜片钳实验技术记录灌流不同浓度DHA时BK单通道开放概率的变化。结果:0.01~1.00μmol/L(定义为低浓度)DHA激活BK通道的半效浓度(EC50)为(0.24±0.05)μmol/L,但经SKF525A孵育后激活作用消失;3.00~10.00μmol/L(定义为高浓度)DHA激活BK通道的EC50为(2.38±0.22)μmol/L,经SKF525A孵育后,激活作用仍存在,且EC50无明显变化。在电极外液钙离子浓度为1μmol/L和刺激电位60 m V条件下,DHA浓度为0、0.01、0.03、0.10、0.30、1.00μmol/L时,BK通道开放概率分别为(0.095 2±0.009 5)、(0.093 9±0.012 6)、(0.098 6±0.016 9)、(0.099 5±0.014 7)、(0.097 5±0.010 4)和(0.102 3±0.020 6)(P>0.05,n=5),提示低浓度DHA不能激活BK单通道;继续增加DHA浓度,当浓度为3、10μmol/L时,BK单通道开放概率分别为(0.700 3±0.013 2)和(0.892 7±0.052 3)(P<0.05,n=5),提示高浓度DHA呈浓度依赖性激活BK单通道,EC50为(3.37±0.10)μmol/L。结论:不同浓度DHA激活BK通道的机制不同,低浓度DHA通过细胞色素P450环氧化酶途径激活BK通道,高浓度DHA可能通过与BK通道结合后直接激活。
- 夏大云钱玲玲郁志明孙曼青汤徐吴莹党时鹏季圆王湘芸柴强陆彤王如兴
- 关键词：二十二碳六烯酸冠状动脉平滑肌细胞膜片钳
- 聚乙烯亚胺修饰的白蛋白微泡转染CHO细胞实验研究被引量：1
- 2010年
- 目的:制作非病毒基因转移载体,提高白蛋白微泡转基因效率。方法:采用人体白蛋白、聚乙烯亚胺(PEI)和葡萄糖按一定的质量比混合后用超声振动仪声振20s制得PEI修饰的白蛋白微泡(PAMB),通过流式细胞仪检测绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞比率以比较PEI、PEI+白蛋白、PAMB和Lipofectamine2000的基因转移效率。结果:单纯PEI组、白蛋白+PEI组、PAMB组和Lipofectamine2000组的平均转基因效率分别为(13.75±4.88)%、(5.20±1.15)%、(49.17±6.75)%和(53.72±5.69)%。PAMB组明显高于单纯PEI组,而与商品化Lipofectamine2000组没有统计学差异。结论:经PEI修饰后的白蛋白微泡转基因效率明显提高,是一种有效的体外基因转移载体,本研究也可能为在体基因转移提供新的方法。
- 党时鹏王如兴张学光张燕王明元郭冬萍李肖蓉
- 关键词：PEI基因转移
- n-3多不饱和脂肪酸对糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞钙库操纵性钙通道的影响被引量：1
- 2019年
- 目的探讨n-3多不饱和脂肪酸(n-3 PUFA)对糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞(SMC)上钙库操纵性钙通道(SOCC)的功能和表达的影响。方法选用健康清洁级雄性SD大鼠共180只,按完全随机分组法分为正常组(N组)、未干预糖尿病组(D组)、低剂量n-3 PUFA干预糖尿病组(DL组)和高剂量n-3 PUFA干预糖尿病组(DH组),每组45只。采用链尿霉素连续2次腹腔注射建立1型糖尿病大鼠动物模型,成模后DL组和DH组大鼠分别按每日10 mg/kg和50 mg/kg n-3 PUFA灌胃,N组和D组每日相同剂量生理盐水灌胃,持续8周。采用三步酶消化法急性分离获取大鼠冠状动脉SMC;细胞内Ca2+荧光成像技术测定SOCC引起的冠状动脉SMC内Ca2+浓度变化(ΔF340/F380);血管张力测定技术测定SOCC引起的冠状动脉张力变化;Western blot测定冠状动脉SMC上基质交联分子1(STIM1)、钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)及瞬时受体电位C通道1(TRPC1)表达情况。结果N、D、DL和DH组冠状动脉SMC上SOCC引起的ΔF340/F380值分别为0.425±0.023、0.838±0.037、0.342±0.052和0.364±0.045,N、DL和DH组的ΔF340/F380明显低于D组(P<0.05),DL组和DH组间差异无统计学意义(P>0.05)。4组SOCC引起的冠状动脉张力变化分别为0.94±0.09、1.95±0.18、1.35±0.24和1.01±0.18,N组和DH组的冠状动脉张力低于D组(P<0.05),DL和D组间差异无统计学意义(P>0.05)。D组冠状动脉SMC上STIM1、Orai1和TRPC1蛋白表达高于N组(P均<0.05),DL组和DH组的STIM1蛋白表达低于D组(P<0.05),各组Orai1和TRPC1表达差异无明显意义(P>0.05)。结论糖尿病时大鼠冠状动脉SMC上SOCC表达增加,细胞内Ca2+浓度增加,冠状动脉张力增加,n-3 PUFA可以下调糖尿病大鼠冠状动脉SMC上SOCC的表达,降低细胞内Ca2+浓度和冠状动脉张力,对糖尿病冠状动脉起保护作用。
- 汤徐钱玲玲党时鹏吴莹刘晓宇张桢烨缪凌枫王如兴
- 关键词：糖尿病冠状血管钙通道
- n-3多不饱和脂肪酸对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的激活作用及其机制
- 2016年
- 目的探讨n-3多不饱和脂肪酸（n-3PUFA）对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道（BK通道）激活作用及其机制。方法酶消化法分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞，采用膜内向外型单通道膜片钳实验技术分别记录不同浓度二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）灌流后BK通道开放概率（NP0）。采用Western Blot和qRT-PCR分别测定未灌胃组和低、高剂量n-3 PUFA灌胃组大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道α亚单位和β1亚单位基因及蛋白表达。结果在电极外液钙离子浓度为1μmoVL和刺激电压60mV条件下，EPA浓度为0、10、30、100、300和1000pmo/L时，BK通道NP0分别为0．0616±0．0938、0．1090±0．0957．0．1303±0．0964、0．2250±0．1804、0．3803±0．2472和0．4080±0．2705，呈浓度依赖性增加（P〈0．05，n=4）；而DHA浓度为0、0．01、0．1和1μmol/L时，BK通道NP0分别为0．1200±0．0086、0．1190±0．0734、0．1250±0．0921和0．2890±0．0616，NP。无明显增加（P〉0．05）；继续增加DHA的浓度，当DHA浓度为3、5、7．5和10μmol／L时，BK通道NP。分别为0．6326±0．0478、1．0980±0．0643、1．1587±0．0676和1．1640±0．0926呈浓度依赖性增加（P〈0．05，n=4）。BK通道仪亚单位蛋白表达分别为0．7929±0．1794、0．7760±0．0599和0．7905±0．0596（P〉0．05，n=24），β1亚单位蛋白表达分别为0．8971±0．2976、1．1407±0．1516和1．2392±0．2337（P〉0．05，n=24）。未灌胃组和低、高剂量n-3PUFA灌胃组大鼠冠状动脉平滑肌细胞上BK通道α亚单位基因表达分别为0．6403±0．2470、0．6301±0．2290和0．9217±0．0907（P〉0．05，n=24），B1亚单位基因表达分别为0．8531±0．3687、0．9919±0．2250和1．0865±0．3632（P〉0．05，n=24）。结论n-3PUFA并非通过影响BK通道亚单位表达增加BK通道激活，而是通过与BK通道作用后直接激活，从而扩张冠状动脉。
- 汤徐季圆钱玲玲党时鹏孙曼青王湘芸吴莹夏大云王文柴强王如兴
- 关键词：N-3多不饱和脂肪酸冠状动脉大电导钙激活钾通道单通道膜片钳
