季圆
- 作品数：12 被引量：22H指数：4
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- 二十二碳六烯酸对糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道开放概率的影响被引量：2
- 2015年
- 目的：探讨二十二碳六烯酸（DHA）对糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道（BK通道）开放概率（NP0）的影响。方法选取体重（200±20）g，年龄6-8周的雄性SD大鼠20只为研究对象，采用随机数字表法分为糖尿病组（10只）和正常对照组（10只）。糖尿病组采用链脲霉素腹腔内注射，2周后测定大鼠血糖浓度，如血糖浓度低于300 mg/dl，则用等剂量链脲霉素再次腹腔内注射，当血糖浓度持续8周高于300 mg/dl视为造模成功。正常对照组大鼠腹腔内注射生理盐水。酶消化法急性分离正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞，单通道膜片钳实验技术记录正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流并比较不同浓度DHA作用下正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道NP0。两两比较采用t检验，组间比较采用单因素方差分析。结果当刺激电压为0、20、40、60、80、100、120 mV时，随着刺激电压增加，正常对照组和糖尿病组BK通道NP0均增加（F=15.28、9.72，均P〈0.05）。与正常对照组相比，当刺激电压〉60 mV后，糖尿病组BK通道NP0明显降低（分别为0.56±0.05比0.22±0.02，1.11±0.09比0.33±0.09，2.85±0.10比0.86±0.12，3.05±0.15比1.01±0.13， t=3.62、4.27、6.32、8.14，均P〈0.05）。在刺激电压60 mV和钙离子浓度1mmol/L条件下，当电极外液DHA浓度为0、0.01、0.10、0.30、1.00mmol/L时，正常对照组和糖尿病组BK通道NP0均无明显增加（F=3.01、2.61，均P〉0.05）；继续增加DHA的浓度，当DHA浓度为3、5、10mmol/L时，对照组BK通道NP0呈浓度依赖性增加，糖尿病组NP0呈浓度依赖性增加（F=10.21、7.32，均P〈0.05）。在DHA浓度相同情况下，糖尿病组BK通道NP0均低于对照组（t=2.71-8.54，均P〈0.05）。结论糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道功能受损，但DHA仍可激活BK通道，增加NP0，从而扩张冠状动脉而�
- 季圆王如兴钱玲玲党时鹏吴莹王萌徐凤王湘芸汤徐孙曼青李肖蓉
- 关键词：二十二碳六烯酸糖尿病冠状动脉膜片钳
- 二十二碳六烯酸及其代谢产物对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的激活作用被引量：5
- 2014年
- 目的研究二十二碳六烯酸(DHA)及其代谢产物16,17-环氧二十二碳五烯酸(16,17-Ep DPE)对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK)单通道的激活作用,探讨DHA扩张冠状动脉、保护心血管的机制。方法酶消化法分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞,采用膜内向外型单通道膜片钳实验技术记录0,0.01,0.1,0.3,1,3,5,7.5和10 mmol/L浓度下DHA及其代谢产物16,17-Ep DPE灌流后BK单通道开放概率。结果在电极外液钙离子浓度为1 mmol/L和刺激电位60 m V条件下,DHA浓度为0,0.01,0.1,0.3和1 mmol/L时,BK通道开放概率分别为0.091 4±0.009 8,0.090 7±0.010 2,0.094 5±0.009 1,0.098 6±0.011 2和0.110 4±0.014 5(P>0.05,n=5);DHA浓度为3,5,7.5和10 mmol/L时,BK单通道开放概率分别为0.671 2±0.045 6,0.751 1±0.079 8,0.842 4±0.137 3和0.866 9±0.096 7(P<0.05,n=5),呈浓度依赖性增高。16,17-Ep DPE浓度为0,10,50和100 nmol/L时,BK单通道开放概率分别为0.102 5±0.011 4,0.100 6±0.009 1,0.112 8±0.013 2和0.108 1±0.014 3(P>0.05,n=5)。结论低浓度DHA不能激活BK单通道,高浓度DHA可能通过与BK通道结合并直接激活BK单通道,这可能是DHA扩张冠状动脉的机制之一。
- 王萌钱玲玲王如兴季圆吴莹王湘芸汤徐徐凤刘晓宇李肖蓉
- 关键词：二十二碳六烯酸冠状动脉平滑肌细胞钾通道膜片钳
- 二十二碳六烯酸通过磷脂酶C-三磷酸肌醇-钙离子途径激活正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道被引量：2
- 2016年
- 目的探讨二十二碳六烯酸（DHA）激活正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道（BK通道）的机制。方法采用酶消化法急性分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞；全细胞膜片钳实验技术记录正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流；膜内向外型单通道膜片钳实验技术记录不同钙离子浓度条件下BK通道电流，并计算开放概率（NP1）；钙离子成像技术测定不同浓度DHA作用后及分别采用磷脂酶（CPLC）受体抑制剂和三磷酸肌醇（IR）受体抑制剂预孵育冠状动脉平滑肌细胞后细胞内钙离子浓度变化。结果1μmol／LDHA可激活BK通道；在刺激电位60mV，电极外液钙离子浓度为0、0．01、0．1、1、3、10、50和100μmol／L条件下，BK通道NP。分别为0．0027±0．0004、0．0060±0．0014、0．0972±0．0106、0．1379±0．0329、0．4687±0．1637、2．0971±0．3104和3．1204±0．2427（P〈0．05，n=4）。未加DHA时，细胞内钙离子浓度荧光信号比值（R值）为0．51±0．01；加入0．001和0．01μmol／LDHA后，R值分别为0．53±0．02和0．55±0．01，与未加DHA相比差异无统计学意义（P〉0．05，n／〉5）；当加入的DHA浓度为0．1、0．3、1、3、5和10μmol／L时，其R值分别为0．64±0．01、0．65±0．01、0．70±0．01、0．69±0．01、0．68±0．01和0．67±0．02，ECEn为（0．04±0．02）μmol／L，与未加DHA比较，差异有统计学意义（P〈0．05，nI〉4）。分别采用PLC受体抑制剂U73122和IR受体抑制剂2-APB预孵育冠状动脉平滑肌细胞，测定加入0．1μmol／LDHA后R值分别为0．52±0．01和0．49±0．02，低于未加抑制剂的R值（0．64±0．01，P〈0．05，n≥4）。结论DHA可通过PLC—IP，Ca^2＋途径增加正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞内钙离子浓度激活BK通道，从而扩张血管，对心血管系统有一定的保护作用。
- 孙曼青钱玲玲党时鹏吴莹汤徐季圆王湘芸夏大云王文柴强陆彤王如兴
- 关键词：冠状血管大电导钙激活钾通道
- 腺苷三磷酸对冠状动脉平滑肌细胞BK通道的激活作用及其机制被引量：2
- 2015年
- 目的探讨腺苷三磷酸（ATP）对冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道（BK通道）的激活作用及其机制。方法采用酶消化法急性分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞；膜片钳实验技术记录全细胞状态下BK通道电流；钙离子成像技术记录ATP对细胞内钙离子浓度影响。结果膜片钳实验结果显示，加入1mmol／LATP前后，BK通道电流密度分别为（137±13）pA／pF和（179±15）pA／pF（P〈0．05）；钙离子成像结果显示，加入0．5mmol／LATP前后，细胞内钙离子浓度荧光信号强度比值分别为2．46±0．08和4．04±0．21（P〈0．05）。分别采用嘌呤（P2Y1）受体阻滞剂MRS2179、磷脂酶C（PLC）受体阻滞剂1373122和三磷酸肌醇（IP3）受体阻滞剂2-APB孵育冠状动脉平滑肌细胞，再测定加入0．5mmol／LATP后3组细胞内钙离子浓度荧光信号强度比值，分别是2．70±0．06、2．65±0．12和2．69±0．13，与未加入3种阻滞剂相比，钙离子浓度荧光信号强度比值均明显降低（P〈0．05）。结论ATP可以通过P2Y1．PLC—IP3通路升高细胞内钙离子浓度，从而激活BK通道。
- 王湘芸吴莹钱玲玲党时鹏季圆徐凤王萌汤徐姚勇王如兴
- 关键词：腺苷三磷酸大电导钙激活钾通道钙离子冠状动脉平滑肌细胞
- ω-3多不饱和脂肪酸对大电导钙离子激活钾通道的影响被引量：4
- 2012年
- ω-3多不饱和脂肪酸主要包括二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸,二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸经细胞色素P450环氧化酶代谢可分别生成环氧二十碳四烯酸和环氧二十二碳五烯酸。环氧二十二碳五烯酸和环氧二十碳四烯酸可激活大电导钙离子激活钾通道,这可能是ω-3多不饱和脂肪酸扩张血管和降低血压的机制。
- 季圆吴莹王如兴
- 关键词：心血管病学Ω-3多不饱和脂肪酸膜片钳细胞色素P450
- 不同浓度二十二碳六烯酸对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道的激活作用及其机制
- 2017年
- 目的:探讨不同浓度二十二碳六烯酸(DHA)对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾离子通道(BK通道)的激活作用及其机制。方法:酶消化法分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞。采用全细胞膜片钳实验技术记录在未孵育与孵育细胞色素P450环氧化酶抑制剂SKF525A并灌流不同浓度DHA条件下BK通道电流密度变化;采用单通道膜片钳实验技术记录灌流不同浓度DHA时BK单通道开放概率的变化。结果:0.01~1.00μmol/L(定义为低浓度)DHA激活BK通道的半效浓度(EC50)为(0.24±0.05)μmol/L,但经SKF525A孵育后激活作用消失;3.00~10.00μmol/L(定义为高浓度)DHA激活BK通道的EC50为(2.38±0.22)μmol/L,经SKF525A孵育后,激活作用仍存在,且EC50无明显变化。在电极外液钙离子浓度为1μmol/L和刺激电位60 m V条件下,DHA浓度为0、0.01、0.03、0.10、0.30、1.00μmol/L时,BK通道开放概率分别为(0.095 2±0.009 5)、(0.093 9±0.012 6)、(0.098 6±0.016 9)、(0.099 5±0.014 7)、(0.097 5±0.010 4)和(0.102 3±0.020 6)(P>0.05,n=5),提示低浓度DHA不能激活BK单通道;继续增加DHA浓度,当浓度为3、10μmol/L时,BK单通道开放概率分别为(0.700 3±0.013 2)和(0.892 7±0.052 3)(P<0.05,n=5),提示高浓度DHA呈浓度依赖性激活BK单通道,EC50为(3.37±0.10)μmol/L。结论:不同浓度DHA激活BK通道的机制不同,低浓度DHA通过细胞色素P450环氧化酶途径激活BK通道,高浓度DHA可能通过与BK通道结合后直接激活。
- 夏大云钱玲玲郁志明孙曼青汤徐吴莹党时鹏季圆王湘芸柴强陆彤王如兴
- 关键词：二十二碳六烯酸冠状动脉平滑肌细胞膜片钳
- n-3多不饱和脂肪酸对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的激活作用及其机制
- 2016年
- 目的探讨n-3多不饱和脂肪酸（n-3PUFA）对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道（BK通道）激活作用及其机制。方法酶消化法分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞，采用膜内向外型单通道膜片钳实验技术分别记录不同浓度二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）灌流后BK通道开放概率（NP0）。采用Western Blot和qRT-PCR分别测定未灌胃组和低、高剂量n-3 PUFA灌胃组大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道α亚单位和β1亚单位基因及蛋白表达。结果在电极外液钙离子浓度为1μmoVL和刺激电压60mV条件下，EPA浓度为0、10、30、100、300和1000pmo/L时，BK通道NP0分别为0．0616±0．0938、0．1090±0．0957．0．1303±0．0964、0．2250±0．1804、0．3803±0．2472和0．4080±0．2705，呈浓度依赖性增加（P〈0．05，n=4）；而DHA浓度为0、0．01、0．1和1μmol/L时，BK通道NP0分别为0．1200±0．0086、0．1190±0．0734、0．1250±0．0921和0．2890±0．0616，NP。无明显增加（P〉0．05）；继续增加DHA的浓度，当DHA浓度为3、5、7．5和10μmol／L时，BK通道NP。分别为0．6326±0．0478、1．0980±0．0643、1．1587±0．0676和1．1640±0．0926呈浓度依赖性增加（P〈0．05，n=4）。BK通道仪亚单位蛋白表达分别为0．7929±0．1794、0．7760±0．0599和0．7905±0．0596（P〉0．05，n=24），β1亚单位蛋白表达分别为0．8971±0．2976、1．1407±0．1516和1．2392±0．2337（P〉0．05，n=24）。未灌胃组和低、高剂量n-3PUFA灌胃组大鼠冠状动脉平滑肌细胞上BK通道α亚单位基因表达分别为0．6403±0．2470、0．6301±0．2290和0．9217±0．0907（P〉0．05，n=24），B1亚单位基因表达分别为0．8531±0．3687、0．9919±0．2250和1．0865±0．3632（P〉0．05，n=24）。结论n-3PUFA并非通过影响BK通道亚单位表达增加BK通道激活，而是通过与BK通道作用后直接激活，从而扩张冠状动脉。
- 汤徐季圆钱玲玲党时鹏孙曼青王湘芸吴莹夏大云王文柴强王如兴
- 关键词：N-3多不饱和脂肪酸冠状动脉大电导钙激活钾通道单通道膜片钳
- 正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞钾离子通道的组成及二十二碳六烯酸的激活作用被引量：5
- 2016年
- 目的探讨正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞钾离子通道的组成及二十二碳六烯酸（DHA）的激活作用。方法采用酶消化法急性分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞，以全细胞膜片钳技术记录灌流不同钾离子通道阻滞剂后钾离子通道电流的变化，以及DHA灌流后钾离子通道电流变化。结果未加阻滞剂时，5μmol／LDHA灌流后钾离子通道电流明显增加，在刺激电压为100mV时，DHA灌流前后的电流密度分别为（52．80±6．68）和（110．09±13．39）pA／pF（P〈0．05）。在非特异性钾离子通道阻滞剂四乙胺10mmol／L作用下，DHA灌流不能激活钾离子通道。与未灌流时基础状态比较，在大电导钙激活钾离子通道特异性阻滞剂ibritoxin100nmol／L、中电导钙激活钾离子通道阻滞剂TRAM-34200nmol／L、小电导钙激活钾离子通道阻滞剂apamin1μmol／L、电压依赖性钾离子通道阻滞剂4-aminopyridine5mmol／L和ATP依赖性钾离子通道阻滞剂glyburide10μmlol／L作用下，钾离子通道电流密度分别减少47．6％、12．4％、13．6％、41．5％和0．1％，再同时灌流DHA后钾离子通道电流密度分别增加32．4％、124．2％、108．5％、149．5％和144．7％。结论大电导钙激活钾离子通道与电压依赖性钾离子通道为正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞上分布的主要的钾离子通道。DHA可激活冠状动脉平滑肌细胞钾离子通道，其中主要为大电导钙激活钾离子通道，这可能是DHA扩张冠状动脉、保护心血管系统的机制之一。
- 钱玲玲王如兴孙曼青夏大云汤徐季圆吴莹刘晓宇党时鹏柴强陆彤
- 关键词：冠状血管肌细胞平滑肌钾通道膜片钳术
- 糖尿病冠状动脉平滑肌细胞大电导钙离子激活钾通道开放概率及蛋白表达的变化被引量：6
- 2013年
- 目的研究糖尿病对冠状动脉平滑肌细胞大电导钙离子激活钾通道(BK通道)开放概率(NP0)及蛋白表达的影响,探讨糖尿病冠状动脉损伤的分子机制。方法采用链脲霉素腹腔内注射建立糖尿病大鼠动物模型,成功建立20只糖尿病大鼠动物模型作为糖尿病组;对照组(n=20)相应注射生理盐水。酶消化法分离冠状动脉平滑肌细胞,单通道膜片钳实验技术记录大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流;采用Western blot实验方法测定大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道亚基的蛋白表达。结果在电极外液钙离子浓度为1μmol/L,刺激电位为0,20,40,60,80,100和120 mV条件下,糖尿病组冠状动脉平滑肌细胞BK通道NP0明显低于对照组(P<0.05)。如刺激电位为120 mV时,对照组和糖尿病组大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道NP0分别为1.210 5±0.048 1(n=5)和0.5217±0.1346(n=5);与对照组比较,糖尿病组BK通道α亚基蛋白表达无差异(P>0.05),但β1亚基蛋白表达下降了63%(P<0.05)。结论糖尿病冠状动脉平滑肌细胞BK通道β1亚基表达下调、BK通道NP0降低可能是糖尿病冠状动脉功能损伤的重要原因。
- 吴莹王如兴李肖蓉季圆郁志明李库林郑杰张常莹刘晓宇
- 关键词：心血管病学Β1亚基冠状动脉糖尿病
- 二十碳五烯酸对糖尿病大鼠冠状动脉的舒张作用及其机制被引量：4
- 2017年
- 目的探讨不同浓度二十碳五烯酸(EPA)对糖尿病大鼠冠状动脉的舒张作用及其机制。方法 40只SD大鼠随机分为正常组和糖尿病组,分离冠状动脉。采用微血管张力测定技术评估不同浓度(0.1、1、3、10、30、100μmol/L)EPA对正常和糖尿病大鼠冠状动脉的舒张作用并观察孵育(100nmol/L)大电导钙激活钾通道(BK通道)特异性阻滞剂伊比蝎毒素(IBTX)后血管张力的变化;酶消化法分离正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞并采用单通道膜片钳技术记录灌流不同浓度(0、10、30、100、300、1 000pmol/L)EPA时BK通道开放概率的变化;采用蛋白印迹技术测定正常和糖尿病大鼠冠状动脉BK通道亚单位蛋白表达。结果 EPA对正常组和糖尿病组大鼠冠状动脉舒张的比例随浓度升高而增加,孵育IBTX后舒张作用明显减弱;EPA对正常组和糖尿病组大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道的激活随浓度升高而增强,且与正常组比较,EPA对糖尿病组大鼠冠状动脉的舒张作用及BK通道的激活作用较弱。两组大鼠冠状动脉BK通道蛋白α亚单位表达无差异,但糖尿病大鼠冠状动脉BK通道蛋白β1亚单位表达明显低于正常组(0.424 7±0.036 2vs 0.892 3±0.053 5,n=6,P<0.05)。结论 EPA对糖尿病冠状动脉具有舒张作用,其机制与激活BK通道有关,糖尿病时BK通道β1亚单位表达减少,EPA对BK通道的激活作用减弱。
- 陈恒建夏大云钱玲玲孙曼青汤徐吴莹党时鹏季圆王湘芸王如兴
- 关键词：二十碳五烯酸冠状动脉大电导钙激活钾通道血管张力蛋白印迹法
