丁雨
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HLA-DRB1-12寡核苷酸芯片的制备及优化(英文)被引量：1
- 2003年
- 生物芯片技术是基于杂交原理发展而来的 ,是将固相反应的原理和形式应用于大分子识别反应 (核酸杂交、抗原抗体结合或酶促的模板依赖性的连接、延伸等反应 )中 ,以达到对大量的目标分子进行快速、平行的特异识别。寡核苷酸芯片的制备过程中关键部分是基片的表面化学处理和探针末端的不同修饰。为了比较不同末端修饰探针在不同化学处理的载玻片上的杂交信号的强弱 ,本研究根据HLA DRB1 12的序列设计 8种不同类型的探针 ,即 4种 5′末端修饰探针 ,包括末端氨基修饰探针 (N) ,氨基加四聚乙二醇间隔臂探针 (NL) ,硫代探针 (S) ,硫代加四聚乙二醇间隔臂探针 (SL)和 4种 3′末端修饰探针 ,同样包括末端氨基修饰探针 ,氨基加四聚乙二醇间隔臂探针 ,硫代探针 ,硫代加四聚乙二醇间隔臂探针。将这 8种探针分别固定在溴化芯片和醛基芯片上 ,与末端标记荧光的不对称的PCR产物进行杂交 ,通过比较杂交结果荧光信号的强弱 ,筛选出探针同活化基片的最佳组合 ,从而达到优化寡核苷酸芯片制备的目的。另外 ,为了进一步比较四聚乙二醇间隔臂对杂交信号的影响 ,设计末端连接不同数目四聚乙二醇的 3′氨基探针。结果显示 ,3′末端修饰探针杂交信号强于 5′末端修饰探针 。
- 李双顶佟丽陈苏红丁雨李生斌王升启
- 关键词：寡核苷酸芯片
- SARS冠状病毒实时荧光RT-PCR定量检测被引量：8
- 2004年
- 为建立一种快速、准确、特异的SARS病毒RNA定量检测方法 ,根据复合探针荧光定量分析原理 ,对SARS病毒核酸进行实时荧光定量RT PCR检测 .借助计算机辅助 ,对SARS病毒基因靶序列以及检测引物和探针进行了优化筛选 ;利用体外转录SARS病毒RNA靶序列 ,对RT PCR反应的镁离子浓度参数进行了优化 ;比较Trizol法、磁珠法、Qiagen法、煮沸法等 4种方法提取RNA的检测效果 ,建立了样本处理方法 ;通过对构建的体外转录靶序列模型的检测 ,对本方法的灵敏度、特异性、定量线性关系、精确度等进行了评价 ,并通过对4 2例临床标本的检测对本方法的检测效果进行了评估 .通过克隆SARS病毒核酸靶序列并进行体外转录 ,获得了长度约 1 2kb的体外转录RNA靶序列 ;经优化 ,荧光RT PCR反应液中的Mg2 + 浓度以 4 0mmol/L为最好 ;RNA提取方法采用磁珠法效果较好 ;本方法的检测灵敏度最低可达 5个拷贝的体外转录RNA分子 ,特异性10 0 % ,Ct 值的CV值小于 5 % .对临床确诊的 4 2份SARS病人血清和漱口水标本的检测结果表明 ,该方法的检出率为 79% ,与荧光抗体检测法的符合率为 70 % .上述结果表明 ,该方法建立的荧光定量RT PCR技术能够快速准确、特异、敏感地对SARS病毒核酸进行定量分析 ,为临床SARS冠状病毒RNA的检测提供了新的 。
- 陈苏红张敏丽黄坚丁雨伯晓晨王升启
- 关键词：SARS冠状病毒荧光RT-PCR非典型性肺炎
- 反义寡核苷酸联用对肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用被引量：1
- 2004年
- 目的 研究多基因靶向的反义寡核苷酸联用对肺腺癌细胞A5 4 9增殖的抑制作用 ,建立初步筛选、分析组合靶点的实验方法及统计学方法。方法 选择以端粒酶、PKC α、Bcl 2和IGF 1R为靶点的 4种反义寡核苷酸 ,进行两药组合。以脂质体介导进行反义寡核苷酸转染 ,用MTT法染色并计算细胞生长抑制率 ,用SAS统计软件及金正均Q值法进行数据分析。结果 联合用药对A5 4 9细胞增殖的抑制作用显著高于单药 (P <0 0 5 ) ,并筛选出有协同作用的药物组合 (Q≥ 1 15 )。结论 反义寡核苷酸联合用药可以靶向多个与肿瘤发生发展密切相关的基因 ,提高对肿瘤细胞增殖的抑制效果。
- 杨英李伍举丁雨王升启
- 关键词：反义寡核苷酸端粒酶IGF-1RA549
- 含水溶性基团的葛根素化合物及其制法和用途
- 本发明涉及通式I所示含水溶性基团的葛根素化合物、可作为药用的盐，式中R<Sub>1</Sub>、R<Sub>2</Sub>、和R<Sub>3</Sub>如正文所述，其制备方法，以及含有效剂量的通式I化合物的药物组合物。该...
- 王林王升启李鲁彭涛丁雨汪海朱晓伟金义光徐娟张首国
- 文献传递
- 霍乱弧菌O139实时荧光PCR检测方法的建立及应用被引量：2
- 2005年
- 目的:建立检测霍乱弧菌O139的实时荧光PCR检测方法,为霍乱弧菌O139的检测提供快速、敏感、特异的检测手段。方法:用复合探针法荧光PCR检测技术,检测O139特异基因———编码糖基转移酶的基因。结果:本方法特异性好,检测非O139肠道菌均无响应;灵敏度高,可检测低至10 CFU的细菌;重复性较好,批间批内变异系数均小于3%。对采自浙江省O139霍乱弧菌感染患者的335份标本进行检测,共有133份为阳性,而采用常规细菌培养法,仅检测出90份阳性。结论:本方法的建立为霍乱的诊断提供了又一有效手段。
- 陈苏红张政张敏丽杨宁敏姚军朱水荣程苏云丁雨王升启
- 关键词：实时荧光PCR霍乱弧菌O139
- 硫代反义寡核苷酸药物癌泰得纯化工艺的建立
- 2005年
- 目的建立硫代反义寡核苷酸药物癌泰得的大规模纯化方法。方法利用DMT的疏水性,在SOURCE15Q为填料的离子柱上预先用高盐缓冲液洗脱不带DMT基团的合成失败序列,然后直接在柱上用0.4%TFA切割,脱DMT保护后,使用盐浓度梯度分离硫代不完全片断和少量的(n-x)片断,从而获得纯品。结果以290nm为检测波长,流速为382cm·h-1,载量为12mg·g-1填料的条件下,平均产品收率为83.40%,质量平衡回收率为98.20%,产品终纯度可达98.23%。结论建立的方法能够有效纯化硫代反义寡核苷酸药物癌泰得,并可进行大规模纯化。
- 张嵬梁乾德王晓博丁雨林汝仙王升启
- 关键词：硫代反义寡核苷酸癌泰得高效液相色谱法
