张敏丽
- 作品数：81 被引量：450H指数：12
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学农业科学更多>>
- 消毒剂中和试验中若干问题的研究被引量：17
- 1993年
- 以洗必泰与金黄色葡萄球菌为例,对中和试验中经常遇到的几个问题进行了试验观察。结果表明,不同中和剂对洗必泰的中和作用不一致,消毒剂加中和剂再加菌液与消毒剂加菌后再加中和剂,所获结果可能不同。检验中和完全程度,可用不同中和剂作比较,并辅以接种不同稀释度样液的方法鉴别。有的复方中和剂在压力蒸汽灭菌后性能可发生变化。中和剂用量与中和消毒剂量间有较密切的关系。
- 袁朝森梁道保张敏丽
- 关键词：消毒剂
- 金标记银增强方法检测HIV抗体的蛋白质微阵列被引量：9
- 2005年
- 目的:采用金标记银增强技术制备检测抗HIV病毒P24、gp41、gp36、gp120蛋白抗体的蛋白质微阵列。方法:将上述抗原片段固定在醛基化玻片上,制成了能够检测多种抗体的蛋白质微阵列,同时研究了金标记银增强技术用于蛋白质微阵列检测的方法学基础。结果:采用金银染色方法的蛋白质微阵列能够准确而灵敏地检测抗HIV不同抗原的抗体。该方法被引入应用到蛋白质微阵列检测中,可以通过光学显微镜或凭肉眼观察定性结果,仅使用普通的CCD数字照像机或CCD扫描仪就可以对信号进行采集。结论:与传统的荧光标记方法相比,金标记银增强方法的灵敏度相当,而且成本低、信号稳定、操作简便,将是前者的一种通用替代方法。
- 逄键涛张敏丽文思远王升启
- 关键词：蛋白质微阵列HIV抗体
- 用基因芯片检测DPYD等位基因在受试人群中的发生频率被引量：11
- 2004年
- 二氢嘧啶脱氢酶基因 (DPYD基因 )所编码的二氢嘧啶脱氢酶 (DPD酶 )是氟化嘧啶类抗肿瘤药物代谢的主要限速酶 ,其活性存在显著的个体差异 ,并因此影响药物的疗效和毒副作用 .大部分编码低 /无活性酶的突变型等位基因是由于基因中的单核苷酸多态性 (singlenucleotidepolymorphism ,SNP)造成的 ,检测这些SNPs是预测患者对药物的反应和实现个体化给药方案的基础 .制备并优化了用于检测DPYD基因中 6个已知SNPs所编码的等位基因 (DPYD 2 , 3, 4 , 5 , 9, 12 )的基因芯片 ,建立了该芯片的基因分型标准 .并利用该芯片检测了肿瘤患者 (112例 )、肾病患者 (83例 )和健康者 (4 5例 )中DPYD突变型等位基因的发生频率 .在受试人群中 ,突变型等位基因DPYD 5和DPYD 9平均发生率分别为 32 0 8%和 11 2 5 % ,未发现DPYD 2 , 3, 4 , 12突变型等位基因 .而且以上单碱基突变的发生率在肿瘤患者、肾病患者和健康者间以及男性、女性肿瘤患者间无显著性差异 ,表明其与疾病的发生或性别无显著性关联 .对 2 0例标本的基因分型结果采用直接测序法进行验证 ,19例基因芯片分型结果与直接测序法结果相一致 .DPYD 5、DPYD 9突变型等位基因在受试人群中具有较高的发生率 .利用基因芯片能够对其实现快速准确的检测 .
- 文思远王晓云张敏丽王升启
- 关键词：突变型等位基因基因芯片肾病直接测序法
- 靶向端粒酶逆转录酶(hTERT)RNAi载体的构建及活性评价被引量：10
- 2004年
- RNA干涉是由与特定基因同源互补的双链RNA ,在体内以序列特异的方式引发靶基因的mRNA降解 ,从而导致转录后基因沉默的过程 .为研究内源性的siRNA对靶基因的抑制效果 ,用pPUR/U6载体构建用于细胞内转录靶向hTERT基因的短发夹状siRNA表达质粒 ,并评价其对hTERT基因的抑制效果 .将hTERTcDNA 35 6 5～ 35 83一段 19bp的DNA序列及其反向重复序列 ,用 9bp的连接序列连接后再接上 5个T碱基 ,将此段DNA序列克隆至pPUR/U6载体U6启动子的下游 ,形成能在体内合成hTERT特异性短发夹状RNA的重组质粒载体pPUR/U6 /hTERT .将pPUR/U6 /hTERT与对照质粒pPUR/U6分别转染HepG2细胞 .采用嘌呤霉素筛选和富集转染具有抗性的细胞 .收集存活的细胞接种 12孔板、提取RNA和蛋白质 .以细胞计数法测定细胞的生长速度 ,RT PCR和蛋白质印迹分析hTERT基因的表达 ,端粒重复放大测定法检测端粒酶活性 ,蛋白质印迹检测p5 3蛋白水平 .与转染对照质粒pPUR/U6的细胞相比 ,转染pPUR/U6 /hTERT的细胞其hTERT基因表达水平显著下降 ,端粒酶活性降低 ,细胞生长速度变慢 ,p5 3蛋白表达明显升高 .以上结果表明 ,以DNA质粒为载体产生的内源性短发夹状siRNA能高效抑制hTERT基因的表达 。
- 夏云林汝仙郑素军张敏丽王升启
- 反义寡核苷酸关键技术及其应用研究
- 王升启林汝仙伯晓晨王小红杨静文思远梁乾德张敏丽
- 1998年5月1日-2003年12月31日，由国家“863”高技术研究发展计划基金和北京市科委重大项目基金等资助，进行了研究。反义核酸技术为新药的研究和开发开辟了一个新的领域。但要高效快速地开发出有效的反义寡核苷酸(AS...
- 关键词：
- 关键词：反义寡核苷酸药代动力学药物
- 基因芯片分型中荧光标记引物的多重扩增及试验优化被引量：2
- 2007年
- 基因芯片技术以其平行高效多位点多态性分型的优势，在基础和临床研究中被广泛应用。然而，随着位点增多，扩增目的片段更繁琐，为了提高效率和降低成本，就需要在同一反应体系内进行多重扩增。而多重扩增的关键问题是，同一体系内引物对的最大化，并有效减少非特异扩增。目前，此环节可通过计算机辅助设计和尝试不同引物对组合解决。由于芯片分型以杂交信号强弱为检测指标，扩增片段要载有荧光剂，因此多重扩增必须考虑到荧光标记物——青色素（Cy3）的大分子位阻效应。但是，Cy3的存在不可避免地降低了PCR的效率，为此本研究对相关试验条件进行优化。
- 李健丁志平曾婷文思远乔平张敏丽王升启
- 关键词：基因芯片技术扩增片段试验条计算机辅助设计
- SARS冠状病毒实时荧光RT-PCR定量检测被引量：9
- 2004年
- 为建立一种快速、准确、特异的SARS病毒RNA定量检测方法 ,根据复合探针荧光定量分析原理 ,对SARS病毒核酸进行实时荧光定量RT PCR检测 .借助计算机辅助 ,对SARS病毒基因靶序列以及检测引物和探针进行了优化筛选 ;利用体外转录SARS病毒RNA靶序列 ,对RT PCR反应的镁离子浓度参数进行了优化 ;比较Trizol法、磁珠法、Qiagen法、煮沸法等 4种方法提取RNA的检测效果 ,建立了样本处理方法 ;通过对构建的体外转录靶序列模型的检测 ,对本方法的灵敏度、特异性、定量线性关系、精确度等进行了评价 ,并通过对4 2例临床标本的检测对本方法的检测效果进行了评估 .通过克隆SARS病毒核酸靶序列并进行体外转录 ,获得了长度约 1 2kb的体外转录RNA靶序列 ;经优化 ,荧光RT PCR反应液中的Mg2 + 浓度以 4 0mmol/L为最好 ;RNA提取方法采用磁珠法效果较好 ;本方法的检测灵敏度最低可达 5个拷贝的体外转录RNA分子 ,特异性10 0 % ,Ct 值的CV值小于 5 % .对临床确诊的 4 2份SARS病人血清和漱口水标本的检测结果表明 ,该方法的检出率为 79% ,与荧光抗体检测法的符合率为 70 % .上述结果表明 ,该方法建立的荧光定量RT PCR技术能够快速准确、特异、敏感地对SARS病毒核酸进行定量分析 ,为临床SARS冠状病毒RNA的检测提供了新的 。
- 陈苏红张敏丽黄坚丁雨伯晓晨王升启
- 关键词：SARS冠状病毒荧光RT-PCR非典型性肺炎
- 同步检测两种输血传播病原体的蛋白微阵列的研究被引量：3
- 2007年
- 目的建立一种基于多元蛋白微阵列的免疫检测方法,用于筛查人血清中艾滋病毒、丙型肝炎病毒。方法将HIV/HCV抗原喷印到活化的玻片表面,抗原与活化基团共价结合后与血清中的特异性抗体反应,用激光芯片扫描系统对蛋白微阵列进行扫描成像。所获得的图像用软件进行分析,并自动判定并生成待测样本的定性结果。结果蛋白微阵列法检测HIV、HCV两种定值血清检测限分别为:12ng/ml、5ng/ml。运用该系统检测HIV、HCV两种抗体参比品,各检测项目的符合率分别为87.5%、93.75%。结论多元蛋白微阵列法特异性强,灵敏度、准确度、精密度较高,具有应用和推广价值。
- 黄敏张敏丽蒲晓允
- 关键词：同步检测艾滋病毒丙型肝炎病毒
- CYP450热点突变基因芯片分型方法的建立被引量：1
- 2007年
- 目的：探索适合多位点同步检测的SNP扩增方案和杂交检测条件，建立芯片杂交信号判读的标准。方法：设计多重扩增的引物和探针；优化荧光标记引物的多重PCR条件。自行制备氨基化片基并点样制片，激光共聚焦扫描后判读检测结果。结果：野生与突变探针杂交信号比值大于4或小于2．5对分型结果的判断有意义，而当信号值在2．5～4范围内应重新检测分析。结论：通过多片段同步扩增和不同位点平衡杂交的实现，本方法适于流行病学调查，体现了寡核苷酸芯片对药物代谢酶多态性基因分型的优势。
- 李健丛玉隆文思远陈苏红乔平张敏丽王升启
- 关键词：细胞色素P450酶系统SNPS寡核苷酸序列分析
- 甲型肝炎病毒感染性灭活与抗原性破坏的比较被引量：2
- 1997年
- 经比较，在３００μＷ／ｃｍ２紫外线照射下，ＨＡＶ颗粒感染性灭活速度远快于抗原性的破坏。经１％过氧化氢作用的ＨＡＶ颗粒，其感染性灭活速度与抗原性破坏速度基本呈平行关系，作用６０分钟，感染性消失，抗原性亦被破坏。
- 韩友圻张敏丽陈添弥刘育京
- 关键词：病毒灭活甲型肝炎病毒感染性抗原性
