龚永生
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 组织型纤溶酶原激活剂基因逆转录病毒载体体内靶向溶栓被引量：1
- 2008年
- 目的观察组织型纤溶酶原激活剂（tPA）基因局部转导对特氟隆（Dacron）片（与机械瓣瓣环同质）的溶血栓作用。方法70只兔建立下腔静脉内Dacron片植入血栓模型，随机分为pLEGFP-N1-tPA治疗组（n=30）、pLEGFP-N1空载体对照组（n=20）、空白对照组（n=20），局部基因转导，于术后2、75d各组一半动物取材（6个亚组A1、B1、C1、A2、B2、C2），聚光共聚焦（confocal）观察所取静脉增强型绿色荧光蛋白（EGFP）表达，体视镜和电镜观察Dacron片表面血栓情况，免疫印迹（Western blot）、血浆平板和酶联免疫吸附实验（ELISA）分别检测所取静脉tPA表达、溶栓、活性及含量变化。结果术后2d和75d取材，治疗组所取静脉，confocal均观察到多而强的EGFP表达，pLEGFP-N1对照组也有EGFP表达，但空白对照组无EGFP表达。70个Dacron片加未植入组10个Dacron片共80个，在体视镜（×160倍）和电镜（×500倍）下观察，未植入组和治疗组Dacron片表面均无血栓，对照组表面均有血栓。治疗组所取静脉Western blot检测均有外源tPA表达，对照组未检测到。血浆平板显示：治疗组均有大的溶解圈，有明显溶栓作用，对照组没有；根据蚓激酶计算出的纤溶活性显示：治疗组术后2d和75d所取静脉tPA活性分别为（529．62±9．05）、（537．50±12．45）U／g，两时间点比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。术后2d和75d治疗组、两对照组中6个亚组所取静脉tPA含量分别为（A1 737．64±13．19）、（B1 29．88±5．61）、（C1 28．71±5．49）、（A2 742．87±10．56）、（B2 32．03±6．26）、（C2 31．34±5．63）ng／g，治疗组明显高于对照组（P〈0．01）；治疗组中两时间点比较，tPA含量差异无统计学意义（P〉0．05）。结论pLEGFP-N1-tPA局部基因转导能有效阻止外源移植物表面血栓形成。
- 张凯伦龚永生蒋雄刚刘小斌厉泉徐磊张晓明
- 关键词：逆转录病毒科纤溶酶原基因治疗血栓
- tPA基因逆转录病毒载体构建及纯包装细胞系培育被引量：1
- 2007年
- 目的构建含人组织型纤溶酶原激活剂（tPA）基因增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因逆转录病毒载体及产高滴度病毒的纯包装细胞系。方法PCR技术扩增目的基因tPA,定向克隆人逆转录病毒载体pLEGFP- N1中,测序鉴定重组逆转录病毒载体pLEGFP-N1-tPA,将其转入包装细胞PT67,培育全EGFP纯包装细胞系;测定病毒滴度。结果证实pLEGFP-N1-tPA中含有tPA基因。转染有pLEGFP-N1-tPA的纯PT67细胞产病毒滴度为1×10^7 CFU/ml。结论成功构建了pLEGFP-N1-tPA载体,并培育了产高滴度病毒纯包装细胞系。
- 龚永生张凯伦蒋雄刚孙图成刘金平陈澍郭超
- 关键词：逆转录病毒纤溶酶原激活剂包装细胞
- 真核表达载体pCMV-(Kozak)TFPI在搭桥模型移植静脉中的表达被引量：2
- 2008年
- 目的构建真核表达载体pCMV-(Kozak)TFPI并检测其在移植静脉中的表达,为冠状动脉旁路移植术中转染大隐静脉内皮细胞抗凝治疗的临床试验奠定理论应用基础。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法提取人组织因子途径抑制因子(TFPI)基因,并引入Kozak序列,将(Kozak)TFPI亚克隆入pCMV质粒中。在阳离子脂质体介导下,转染颈总动脉搭桥模型移植静脉内皮细胞。RT-PCR、蛋白印迹法(Western印迹)和免疫组化法检测移植静脉中外源TFPI基因mRNA和蛋白的表达。结果(Kozak)TFPI成功克隆入pCMV中。RT-PCR、Western印迹和免疫组化检测到移植静脉中外源TFPI基因mRNA和蛋白的表达。结论pCMV-(Kozak)TFPI真核表达载体构建成功,移植静脉中检测到其蛋白的表达。
- 厉泉张凯伦蒋雄刚孙图成龚永生祖育昆郭超徐鹏
- 关键词：冠状动脉旁路移植术组织因子途径抑制因子移植静脉转染
- 真核表达载体pCMV-(Kozak) TFPI的构建及其在内皮细胞中的表达
- 2007年
- 目的构建真核表达载体pCMV-(Kozak)TFPI并检测其在内皮细胞中的表达,为冠状动脉旁路移植和经皮冠状动脉内成形术中转染血管内皮细胞抗凝治疗作了实验和理论的探索。方法用RT-PCR的方法提取人组织因子途径抑制因子(TFPI)基因,并引入Kozak序列,将(Kozak)TFPI亚克隆入pCMV质粒中。在阳离子脂质体介导下,转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)。RT-PCR、免疫荧光和Western blot检测HUVEC中外源TFPI基因mRNA和蛋白的表达。结果(Kozak)TFPI成功克隆入pC-MV中。RT-PCR、免疫荧光和Western blot检测到外源TFPI基因mRNA和蛋白的表达。结论成功构建了pCMV-(Kozak)TFPI真核表达载体,并表达出相应的蛋白。
- 厉泉张凯伦龚永生徐鹏郭超祖育昆
- 关键词：冠状动脉旁路移植术经皮冠状动脉内成形术组织因子途径抑制因子转染
