齐洁
- 作品数：11 被引量：19H指数：3
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金广东省博士启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人CASK/LIN-2下游信号分子的初步研究被引量：8
- 2000年
- 目的 揭示人类新基因 CASK/ L IN- 2的生物学功能 ,运用酵母双杂交 L ex A系统寻找与h CASK的鸟苷酸激酶结构域 (guanylate kinase domain- like,GK)相互作用的蛋白信号分子。方法 将h CASK的 GK DNA片段亚克隆进 p L ex A融合表达质粒 ,得到的重组质粒 p L ex A- GK转化酵母 EGY48。经证实该重组质粒无转录活性并能进入胞核 ,结合 L ex A操纵基因。将人胎脑文库质粒转化 EGY48(p L ex A-GK,p8op- lac Z) ,在 Gal/ Raf his- trp- ura- leu-和 Gal/ Rafhis- trp- ura- X- gal条件下筛选 leu+和 lac Z+酵母克隆 ,提取上述阳性酵母质粒转化大肠杆菌 KC8,分离出文库质粒 ;再将这些文库质粒转化 EGY48(p L ex A-GK,p8op- lac Z) ,再次筛选和确证阳性文库质粒。经 PCR和酶切电泳分析 ,最后得到两个靶 DNA片段。结果 特异性实验证实这两个 DNA片段编码蛋白均能与 h CASK的 GK特异性结合。 DNA序列测定和BL ASTn 分析结果显示两个 DNA片段长度分别为 732和 6 83bp,与人分化抑制因子 (inhibitor ofdifferentiation1,Id1) m RNA的同源性分别为 97% (6 30 / 6 45 )和 98% (6 5 6 / 6 6 6 ) ,表明两个靶 DNA片段均属 Id1基因。结论 酵母中 h CASK的 GK能与 Id1特异地相互作用 ,Id1可能为 h
- 齐洁罗向东罗勤
- 关键词：CASK分化抑制因子酵母双杂交
- EOLA1基因突变体的克隆和鉴定
- 2003年
- 目的 对ECV3 0 4细胞株EOLA1基因进行克隆测序以及mRNA水平检测。方法 采用RT PCR扩增EOLA1基因片断 ,连接到T载体进行测序。结果 测序发现一种目的基因mRNA剪接突变体 ,其第 3外显子起始部分比Genebank数据库相应序列多出 19个碱基。RT PCR显示剪接突变体与野生型EOLA1基因具有不同的表达水平和LPS反应性。结论 发现一个EOLA1基因剪接突变体 。
- 苏踊跃齐洁罗向东贾思远梁光萍陈渝刘月明
- 关键词：EOLA1基因克隆
- 酵母双杂交筛选与分化抑制因子Id1′相互作用的蛋白
- 2003年
- 目的 筛选成人肺组织文库中与分化抑制因子Id1′相互作用的蛋白。方法 构建重组诱饵质粒pHybLex Zeo Id1′ ,转化入酵母细胞EGY48 pSH18 3 4,检测重组质粒有无非特异激活报告基因 ;通过筛选成人肺组织文库 ,获取真阳性文库质粒 ,进行测序和同源性比较 ,获得真阳性克隆。结果 经测序证实 ,重组诱饵质粒pHybLex Zeo Id1′构建成功 ;将重组质粒转化入酵母细胞EGY48 pSH18 3 4,经检测无非特异激活功能。进一步通过对文库进行筛选 ,获得一个真阳性克隆 ,通过测序和同源性比较证实该阳性克隆是酪氨酸蛋白激酶Fyn。结论 分化抑制因子Id1′与Fyn在酵母细胞中存在相互作用。
- 贾思远罗向东齐洁苏踊跃陈渝
- 关键词：分化抑制因子1酵母双杂交FRN
- 分化抑制因子ID1’基因酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活作用的检测被引量：2
- 2003年
- 目的 :构建酵母双杂交用分化抑制因子ID1’基因的诱饵载体 ,并检测其自激活作用。方法 :PCR扩增ID1’基因全长 ,酶切后与诱饵载体pHybLex/Zeo连接形成重组诱饵载体 ,电穿孔方法转化到酵母细胞EGY48中 ,β -半乳糖苷酶滤膜分析检测重组诱饵载体对报告基因LacZ的自激活情况。结果 :扩增出ID1’基因全长 ,成功构建了重组诱饵载体pHybLex/Zeo -ID1’ ,经酶切和测序鉴定正确 ;重组诱饵载体无自发激活报告基因功能。结论 :重组诱饵载体构建成功 ,对报告基因无自激活作用 。
- 贾思远齐洁罗向东
- 关键词：分子生物学分化抑制因子酵母双杂交诱饵载体
- 热应激对血管内皮细胞增殖的影响及其机制初探被引量：4
- 2003年
- 目的 探讨热应激条件下对血管内皮细胞增殖的影响 ,进一步从DNA损伤后P5 3mRNA、P2 1mRNA表达改变角度探讨增殖调控的机理。方法 以建立的血管内皮细胞热应激 (4 3℃ ,2小时 )为实验模型 ,应用流式细胞仪观察热应激后血管内皮细胞株ECV30 4的细胞周期变化 ,单细胞凝胶电泳方法观察热应激对血管内皮细胞DNA的损伤 ,RT PCR检测P5 3mRNA、P2 1mRNA表达改变情况。结果 热应激可使血管内皮细胞DNA产生显著损伤 (P <0 .0 5 ) ,继而P5 3mRNA表达增高 ,并促进P2 1mRNA的上调表达 ,最终使细胞产生G1期阻滞。结论 热应激可损伤血管内皮细胞DNA ,并通过P5 3、P2
- 贾思远罗向东齐洁
- 关键词：热应激血管内皮细胞MRNA
- 细胞骨架肌动蛋白表达质粒转染内皮细胞不同方法的比较被引量：1
- 2002年
- 目的 筛选适合于人脐静脉内皮细胞的转染方法 ,为进一步转染其他目的基因打下基础。 方法 以质粒pEGFP Actin为外源性基因 ,分别用脂质体介导的转染法、DEAE 葡聚糖转染法和电穿孔转染法转染人脐静脉血管内皮细胞 (ECV 30 4 )。比较转染后的细胞死亡率和细胞转染率。 结果 (1) 3种不同方法转染后 12h ,细胞死亡率均为 4 % ,至 6 0h时DEAE 葡聚糖转染的细胞死亡率上升至 5 0 %。 (2 ) 3种方法均能使ECV 30 4获得 95 %的转染率 ,脂质体介导的转染法荧光强度强于电穿孔转染法。 结论 脂质体转染法和电穿孔转染法用于ECV 30 4 ,有较好的稳定性和重复性 。
- 罗勤齐洁陈建罗向东杨宗城
- 关键词：内皮细胞转染肌动蛋白类脂质体介导
- 热应激对血管内皮细胞增殖的影响及其信号转导机制的研究
- 目的探讨热应激条件对血管内皮细胞增殖的影响,进一步从信号转导角度探讨增殖调控的机制。方法以建立的血管内皮细胞热应激(43℃,2h)为实验模型,应用流式细胞仪观察热应激后血管内皮细胞株 ECV304的细胞周期变化,采用单细...
- 罗向东齐洁
- 文献传递
- 酵母双杂交中Id1与Fyn的相互作用
- 2004年
- 目的 筛选成人肺组织文库中与分化抑制因子Id1相互作用的蛋白。方法 构建重组诱饵质粒pHybLex/Zeo -Id1,转化入酵母细胞EGY4 8/pSH18- 34,检测重组质粒有无非特异激活报告基因作用 ;通过筛选成人肺组织文库 ,获取真阳性文库质粒 ,进行测序和同源性比较 ,获得真阳性克隆。结果 经测序证实 ,重组诱饵质粒pHybLex/Zeo-Id1构建成功 ;将重组诱饵质粒转化入酵母细胞EGY4 8/pSH18- 34中 ,经检测无非特异激活报告基因功能。通过对文库进行筛选 ,获得一个真阳性克隆 ,通过测序和同源性比较证实该阳性克隆与酪氨酸蛋白激酶Fyn高度同源 (36 0 / 36 0 )。结论 作者首次发现Id1与Fyn在酵母细胞中存在相互作用。
- 贾思远罗向东齐洁苏踊跃陈渝
- 关键词：ID1酵母细胞阳性克隆酵母双杂交人肺组织
- 分化抑制因子1相互作用蛋白AGGF1的筛选
- 2007年
- 目的利用酵母双杂交方法,筛选成人肺组织文库中与分化抑制因子1(Id1)相互作用的蛋白。方法PCR方法扩增Id1的编码序列并定向克隆入诱饵质粒pHybLex/Zeo,构建重组诱饵质粒pHybLex/Zeo-Id1,酶切鉴定后转化入酵母株EGY48/pSH18-34,检测重组诱饵质粒有无非特异激活报告基因Leu2、LacZ作用;扩增并提取成人肺组织文库质粒,将文库质粒及重组诱饵质粒转化入酵母细胞,依次筛选Leu2+,Leu2+LacZ+克隆;设置阴性及阳性对照,重复筛选Leu2+LacZ+克隆并排除假阳性克隆,获取真阳性文库质粒,进行测序和同源性比对。结果酶切证实,重组诱饵质粒构建成功。重组诱饵质粒转化入酵母细胞后,经检测无非特异激活报告基因作用。扩增并筛选成人肺组织文库,获得198个Leu2+及19个Leu2+LacZ+克隆。经排除假阳性克隆,最终获得1个Leu2+LacZ+真阳性克隆,经测序和同源性比较证实该克隆与蛋白AGGF1高度同源(556/559,99.5%),Western blotting证实其在酵母细胞中有表达。结论利用酵母双杂交方法,通过筛选成人肺组织文库,发现Id1与AGGF1存在相互作用。
- 贾思远罗向东齐洁
- 关键词：酵母双杂交内皮细胞
- hTERT基因荧光真核表达载体的构建及在人成纤维细胞中的表达
- 目的:构建人端粒酶催化亚单位(hTERT)正、反义荧光真核表达载体,并检测其在人成纤维细胞中的表达。方法:采用基因重组技术,将 hTERT cDNA 正向克隆到荧光真核表达载体 pIRES2-EGFP中,NOTI 酶切鉴...
- 梁光萍罗向东陈渝齐洁杨宗城
- 文献传递
