陈渝
- 作品数：49 被引量：108H指数：6
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家重点实验室开放基金更多>>
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- 人血管内皮细胞缺氧早期基因系列表达分析文库的建立及分析
- 2009年
- 目的:建立常氧及缺氧早期人血管内皮细胞基因系列表达分析文库,对表达谱数据进行初步分析,为创伤后多器官功能障碍的防治奠定基础。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞株(EA.hy926),分为正常对照组和缺氧3h处理组。采用长标签基因系列表达分析方法(LongSAGE)建立常氧及缺氧3h组人血管内皮细胞基因表达文库,通过与Genebank数据库比对确认基因,对所得标签进行初步分析。结果:通过LongSAGE技术构建了常氧和缺氧脐静脉内皮细胞LongSAGE文库。缺氧SAGE文库测得30756个标签,其中识别出的基因总数为13879,比例为45.13%;重复的双标签体总数为762。常氧SAGE文库测得标签数为31213,其中识别出的基因总数为13665,比例为43.78%;重复的双标签体总数为758。结论:成功建立了人脐静脉内皮细胞常氧和缺氧早期LongSAGE文库,获得涵盖上万个转录本信息的表达谱数据,为创伤后多器官功能障碍的防治奠定基础.
- 梁光萍苏踊跃陈建罗向东陈渝
- 关键词：血管内皮细胞缺氧基因表达谱
- 腺病毒介导gax基因转染在培养的血管平滑肌细胞中的表达被引量：10
- 2003年
- 目的 以腺病毒介导gax基因转染血管平滑肌细胞 (VSMC) ,增强VSMC中 gax基因的表达。方法 采用位置特异性重组方法构建携带大鼠 gax基因表达序列的复制缺陷型 5型腺病毒载体 (Ad CMV gax) ,经 2 93细胞扩增 ,纯化制备高滴度病毒转染液 ;以病毒转染液常规转染VSMC后 ,应用RT PCR、流式细胞仪和免疫细胞化学等方法分别检测VSMC中 gaxmRNA和蛋白质的表达。 结果 流式细胞仪检测和免疫细胞化学染色均显示AdCMV gax转染VSMC后 ,VSMC的Gax蛋白表达率明显增高 ,转染后 2 4小时即可达 80 %左右 ,高水平的表达可维持 5天以上 ;AdCMV gax转染前 ,PDGF BB对 gax基因转录和翻译水平的表达均有下调作用 ,AdCMV gax转染后 ,无论有无PDGF BB刺激 ,VSMC中 gax基因的表达均比转染前显著增高。 结论 腺病毒载体可有效地介导 gax基因转染VSMC ,并且表达为蛋白质。这有利于进一步研究
- 王耿何国祥张萍冉擘力刘建平陈渝
- 关键词：GAX基因血管平滑肌细胞腺病毒
- 雌激素在小鼠表皮发育与人表皮细胞株HaCaT增殖中的作用与机制
- 2016年
- 目的观察雌激素在小鼠表皮发育和Kc（人表皮细胞株HaCaT）增殖中的作用并探讨其机制。方法（1）通过阴道脱落细胞检查法选取5只处于动情期成年C57BL／6小鼠设为动情期组，另将性发育前行卵巢切除的5只成年C57BL／6小鼠设为卵巢切除组。取2组小鼠尾根部全层皮肤，HE染色观测表皮厚度，免疫组织化学染色观察表皮中增殖细胞核抗原（PCNA）阳性细胞分布并计数。（2）取对数生长期HaCaT细胞，用含体积分数10％FBS的RPMI1640培养液培养，按随机数字表法分为阴性对照组、单纯雌二醇组、蛋白激酶B（Akt）抑制剂组、细胞外信号调节激酶（ERK）抑制剂组，每组20孔。各组培养液中，阴性对照组加入1nL二甲基亚砜；单纯雌二醇组加入100nmol／L17 β-雌二醇1 μL；Akt抑制剂组和ERK抑制剂组均加入同前剂量与体积17 β-雌二醇，另分别加入10 μmol／L LY294002和30 μmol／LPD98059各1 μL。分别于培养0（即刻）、24、48、72h，每组取5孔细胞，用细胞计数试制盒8与酶标仪检测细胞增殖活性。（3）取对数生长期HaCaT细胞，同前分组处理，每组3孔。培养72h，用流式细胞仪检测细胞周期分布，计算细胞增殖指数（PI）。（4）取对数生长期HaCaT细胞，同前分组处理，每组3皿。培养72h，蛋白质印迹法检测细胞中磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化ERK（p-ERK）和PCNA蛋白水平。细胞实验均重复3次。对数据行t检验、单因素方差分析、析因设计方差分析、LSD检验。结果（1）卵巢切除组小鼠表皮厚度为（33．5±3．0） μm，明显薄于动情期组的（51．4±3．1） μm（t=20．7，P〈0．01）。2组小鼠PCNA阳性细胞主要集中于表皮基底层；卵巢切除组小鼠表皮中PCNA阳性细胞数为每200倍视野下（37±12）个，明显少于动情期组的每200倍视野下（96±15）个（t：15．3，P〈0．01）。（2）培养0～48h，单纯雌二醇组�
- 周涛陈婧黄宗伟方利陈渝陈雅洁彭毅志
- 关键词：雌激素类表皮细胞外信号调节MAP激酶类蛋白激酶类HACAT细胞
- EOLA1基因小干扰RNA载体构建及其干扰效应检测被引量：1
- 2004年
- 目的 构建人类新基因内皮高表达脂多糖相关因子 1(EOLA1)特异性的小干扰RNA表达载体 ,并初步验证其对靶基因的抑制作用。方法 构建绿色荧光蛋白 (GFP) EOLA1融合蛋白表达载体pEGFP N2 /EOLA1,并转染人ECV30 4细胞株 ,G4 18压力筛选获得稳定表达株 ;针对靶基因EOLA1,设计靶点特异性的寡核苷酸 ,插入pSlincer3.1/H1质粒。转染重组质粒到稳定表达GFP EOLA1融合蛋白的ECV30 4细胞 ,通过观察转染细胞绿色荧光的强弱和Westernblot实验检测靶基因的抑制情况。结果 获得了稳定表达GFP EO LA1融合蛋白的细胞株 ,构建的小RNA干扰质粒siEOLA1能够抑制靶基因EOLA1的表达。结论 成功构建了针对EOLA1基因的siR NA质粒 ,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。
- 刘月明杨宗城梁自文苏踊跃罗向东陈渝
- 关键词：靶基因ECV304细胞转染小干扰RNA
- CASK下调表达对人血管内皮细胞ECV-304增殖能力的影响
- 2009年
- 目的建立CASK下调表达细胞株,研究钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(calcium,calmodulin-associated serine/threonine kinase,CASK)下调表达对ECV-304细胞增殖能力的影响。方法将包含针对CASK基因干扰siRNA片段的pGenesil-1-hCASK重组质粒转染人ECV-304细胞株,经G418加压筛选,成功筛选出CASK下调表达的细胞株。用蛋白免疫印迹法鉴定转染细胞中CASK基因的表达水平。采用流式细胞技术、MTT法观察CASK下调表达对ECV-304细胞增殖能力的变化。结果成功筛选出CASK下调表达ECV-304细胞株(siCASK细胞株),这些细胞在传代过程中绿色荧光蛋白能维持表达,细胞株中转染阳性率在90%以上;经蛋白免疫印迹法检测CASK表达明显降低;siCASK细胞株中G0/G1细胞比率下降,G2M期细胞比率明显上升,增殖指数明显提高,生长曲线左移。结论成功建立了CASK下调表达的ECV-304细胞株,CASK下调表达可导致细胞增殖能力增强。
- 陈建苏踊跃梁光萍陈渝罗向东杨宗城
- 关键词：RNA干扰细胞增殖
- 白细胞介素-10基因转染对活化巨噬细胞炎症介质产生的抑制作用被引量：6
- 2000年
- 目的 探讨炎症诱导启动子指导人白细胞介素 10 (hIL 10 )基因的表达及其对炎症介质产生的效应。方法 诱导性真核表达载体pSAA3hIL 10脂质体转染体外培养巨噬细胞 ,LPS(10mg/L)活化后观察巨噬细胞hIL 10的表达 (RT PCR ,ELISA法 ) ,测定肿瘤坏死因子 α(TNF α)、IL 6的产生(ELISA法 )。结果 RT PCR证明hIL 10可在巨噬细胞表达 ;巨噬细胞LPS(10mg/L)活化 12h有hIL 10的表达(2 .67μg/L) ,活化 2 4h及 4 8h的巨噬细胞上清hIL 10显著增加(1.87～5 .71倍 ) ;转基因预处理显著下调活化细胞TNF α(2 5 .0 %～ 61.4 % ,P <0 .0 5 )的产生 ,显著减少IL 6产生 (5 4 .8%～63 .9% ,P <0 .0 5 )。结论 LPS可活化 pSAA3hIL 10表达体系在巨噬细胞诱导表达 ,白细胞介素 10基因转染显著下调活化MΦ炎症介质的产生。
- 太光平汪仕良王斐陈渝
- 关键词：IL-10基因治疗基因转染巨噬细胞
- 小干扰RNA表达载体介导的EOLA1基因表达抑制研究被引量：1
- 2005年
- 目的 设计和构建EOLA1基因特异性的小干扰RNA质粒 ,并初步验证其对靶基因的抑制作用。方法 将靶点特异性的寡核苷酸连接到经ApaⅠ EcoRⅠ酶切线性化的pBS/U6质粒 ,测序验证 ,阳性重组质粒转染ECV3 0 4细胞 ,半定量RT PCR方法检测靶基因的表达 ,阳性重组质粒与pEGFP EOLA1共转染 ,观察外源报告基因绿色荧光蛋白的表达。结果 构建的阳性重组质粒转染能够抑制靶基因EOLA1mRNA的表达 ,并能够显著抑制EOLA1 EGFP融合蛋白的表达。结论 成功构建了针对EOLA1基因的siRNA质粒 ,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。
- 苏踊跃梁光萍罗向东刘月明陈渝陈建杨宗城
- 关键词：RNA干扰ECV304EOLA1
- 含人HSP72重组腺病毒制备及其在肠上皮细胞中的表达被引量：2
- 2002年
- 目的:构建并鉴定含人全长热休克蛋白72(HSP72)基因的重组腺病毒,为严重创伤后缺血缺氧损伤的防治提供基因治疗措施.方法:用同源重组方法构建含人全长HSP72目的基因的复制缺陷型腺病毒载体(AdCMV-HSP72),并加以鉴定、扩增,以制取高滴度AdCMV-HSP72转染液,体外转染肠上皮细胞株IEC-6,检测目的基因表达.结果:将构建的重组腺病毒载体AdCMV-HSP72转染肠上皮细胞并表达48h后,RT-PCR检测转染组显示特异性扩增的532bpHSP72目的基因片段.对照组(转染空腺病毒载体组)扩增结果为阴性.蛋白印迹结果显示AdCMV-HSP72转染组HSP72蛋白的表达明显增高.结论:腺病毒载体可较高效率介导HSP72在肠上皮细胞的表达.所获AdCMV-HSP72重组腺病毒可进一步用于基因治疗研究.
- 李晓鲁彭毅志袁志强太光平陈渝
- 关键词：肠上皮细胞
- 烧伤患者中心静脉导管相关性感染的危险因素分析
- 方利王凡孙柯岱陈雅洁陈渝陈婧彭毅志
- 穿膜肽TAT-p38αG融合基因的构建、表达及穿膜特性的鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的构建穿膜肽TAT-p38αG融合基因,进行原核表达及穿膜特性鉴定。方法提取人EVC304细胞总RNA,巢式PCR扩增p38αG基因片段,T-A克隆,测序证实片段无误后,将p38αG基因片段亚克隆入原核表达载体pTAT-HA,获得pTAT-p38αG融合基因表达载体。将表达载体转化大肠杆菌,IPTG诱导表达获得TAT-p38αG融合蛋白,并行Ni-NTA柱过柱和超滤纯化,抗His抗体免疫印迹法鉴定。采用荧光素FITC体外标记TAT-p38αG融合蛋白,与EVC304细胞共培养,荧光显微镜下观察其穿膜特性。结果成功构建了融合基因原核表达载体pTAT-p38αG,并表达出大小约30×103的蛋白产物,与融合蛋白TAT-p38αG理论计算值相符。细胞实验结果显示,TAT-p38αG能呈浓度依赖性方式转导进入EVC304细胞。结论TAT-p38αG融合蛋白具有良好的穿膜特性,研究为下一步鉴定TAT-p38αG融合蛋白对p38α激酶的抑制作用奠定了良好的实验基础。
- 张家平应希陈渝张琼黄跃生
- 关键词：穿膜肽融合基因
