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蜜蜂主要变应原酸性磷酸酯酶基因的克隆及原核表达载体的构建: 2010年; 目的克隆蜜蜂Apis cerana cerana主要变应原酸性磷酸酯酶(Api m3)基因,构建其原核表达载体。方法根据已知序列设计带有酶切位点的特异性引物,以提取的蜜蜂总RNA为模板RT-PCR扩增目的基因,并进行序列分析。将基因片段亚克隆到PET-28a表达载体上。结果获得蜜蜂Api m3基因,构建了其原核表达载体。基因分析显示该基因全长1 167 bp,编码388个氨基酸,推测分子质量单位为45.279 9 ku,等电点为5.53。序列分析显示与Gen-Bank中已知基因的同源性为97%。结论成功克隆蜜蜂Api m3基因并构建原核表达载体,对进一步进行变应原表达和免疫学活性鉴定有积极意义。; 张强叶卫翔刘志刚陈思罗新萍黄钟; 关键词：蜜蜂基因克隆原核表达载体

平榛主要过敏原Corh1单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1: 2011年; 目的制备和鉴定鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb)。方法用重组Cor h 1蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选分泌特异性McAb的杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞株诱导小鼠产生腹水,再用蛋白A亲和层析法纯化抗体。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该McAbs的特性和交叉性。结果获得4株可稳定分泌鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的McAbs,其Ig亚型均为IgG1,均具有良好的效价;ELISA和Western Blotting分析表明该4株单抗均能识别重组Cor h 1蛋白,其中3株单抗能够识别天然平榛提取物。结论成功制备了4株鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的单克隆抗体,为建立平榛主要变应原Cor h 1检测及纯化方法奠定了基础。; 赵郭存张强邹菊黄钟刘志刚; 关键词：主要变应原单克隆抗体杂交瘤细胞交叉性

口虾蛄主要过敏原TM的单抗制备和免疫学特性鉴定被引量：6: 2010年; 目的制备和鉴定鼠抗虾主要变应原TM的单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb)。方法用重组TM蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。间接ELISA法筛选特异性分泌的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞株诱导小鼠产生腹水,再用蛋白A亲和层析法纯化抗体。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该单克隆抗体的特性和交叉性,对常见食物的检测。结果获得4株可稳定分泌鼠抗虾主要变应原TM的单克隆抗体,其Ig亚型均为IgG1。且4株单抗均具有良好的效价。ELISA和Western Blotting分析表明该4株单抗均能识别重组TM蛋白和天然的虾提取物。结论成功制备了4株鼠抗虾主要变应原TM的单克隆抗体,为建立TM检测及纯化方法奠定了基础。; 陈贺匡渤海刘志刚黄钟吴序栎胡川邹菊; 关键词：口虾蛄单克隆抗体

金属硫蛋白‑1在制备抑制类风湿性关节炎药物中的应用: 本发明公开一种金属硫蛋白‑1在制备抑制或治疗类风湿性关节炎药物中的应用；其中：所述的金属硫蛋白‑1通过抑制Th17细胞的分化，并促进调节性T细胞的分化，调节在CIA状态下Th17/Treg的平衡，参与抑制类风湿性关节炎的...; 黄钟孙锦霞; 文献传递

MMP-9纳米抗体及其制备方法与应用: 本申请涉及生物医药技术领域，提供了一种MMP‑9纳米抗体，所述MMP‑9纳米抗体为单域抗体，且所述单域抗体包括互补决定区CDR，所述互补决定区包括CDR1、CDR2、CDR3，并提供了CDR1、CDR2、CDR3可选的具...; 叶亮叶其状黄钟吴丹丹郑厚胜

巨噬细胞中FBW7沉默对其杀菌能力的抑制: 2017年; 采用小干扰核糖核酸(siRNA)介导Hela细胞、原代巨噬细胞和RAW264.7细胞中FBW7基因沉默,研究其对NF-κB信号通路、细胞因子表达、巨噬细胞吞噬和杀伤细菌能力的影响.通过流式细胞术、抗生素保护试验、实时荧光定量聚合酶链式反应和报告基因的研究方法,发现FBW7沉默不具有调控RAW264.7细胞吞噬细菌的能力,但能显著抑制原代巨噬细胞和RAW264.7细胞的杀菌能力及一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase,iNOS)表达,抑制Hela中NF-κB报告基因活性,降低Hela细胞中TNFα、IL-1β和IL-6,以及原代巨噬细胞、RAW264.7细胞中MCP-1和IL-1β表达.结果表明,FBW7沉默可通过影响NF-κB活性抑制巨噬细胞对细菌的杀伤能力.; 孙锦霞黄钟王瑞翁林军李亚旭; 关键词：小干扰核糖核酸 RAW264.7细胞巨噬细胞杀菌活性一氧化氮合成酶 NF-ΚB信号通路

牛奶主要过敏原αs1-酪蛋白全长与片段区基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定被引量：7: 2010年; 目的:克隆并表达牛奶中主要过敏原αs1-酪蛋白的全长及N端、C端两个片段区基因,用于筛选与制备牛奶主要过敏原的单克隆抗体。方法:利用RT-PCR技术克隆αs1-酪蛋白基因,测序后将目的片段克隆入原核表达质粒pET载体,转化至大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)。经IPTG诱导表达,获得重组αs1-酪蛋白。用Ni2+亲和层析柱纯化,用Western blot和ELISA检测重组蛋白与牛奶过敏患者血清IgE的结合活性。结果:克隆获得αs1-酪蛋白全长的开放阅读框基因为645bp(含终止密码子),编码214个氨基酸。N、C端片段区基因(含终止密码子)分别为285、294bp,编码94、97个氨基酸。三种重组蛋白均能以可溶性表达形式纯化,经Western blot和ELISA检测都具有较好的免疫原性,而αs1-酪蛋白全长的免疫原性更强。结论:成功地克隆和表达了αs1-酪蛋白全长及N、C端两个片段区基因,为研制牛奶主要过敏原的单克隆抗体,制备牛奶主要过敏原的检测试剂奠定了基础。; 曹燕娟胡东生刘志刚陈思罗新萍黄钟; 关键词：基因克隆

牛奶主要过敏原β-乳球蛋白的一基因片段的克隆、表达、纯化及抗原性鉴定被引量：8: 2011年; 目的克隆并表达牛奶中主要过敏原β-乳球蛋白(β-LG)的一基因片段,并检测其抗原性。方法利用RT-PCR技术克隆β-LG蛋白基因片段,测序后将目的片段克隆入原核表达质粒pET载体,转化至大肠杆菌origami,经IPTG诱导表达,获得重组β-LG片段蛋白。用Ni2+亲和层析柱纯化,用Western blot和ELISA检测重组蛋白与牛奶过敏患者血清IgE的结合活性。结果克隆获得β-LG片段蛋白,其开放阅读框基因为264 bp(含终止密码子),编码87个氨基酸。获得的重组β-LG片段蛋白既以包涵体形式存在又以可溶性形式存在,用可溶性的蛋白进行纯化,经Western blot和ELISA检测具有较好的抗原性。结论成功地克隆和表达了β-LG的一基因片段,为后续牛奶的免疫原性研究提供参考,也为研制牛奶主要过敏原的单克隆抗体和制备其主要过敏原的检测试剂奠定了基础。; 李建杰陈大玮闫浩杨成彬邓利刘杰刘志刚黄钟; 关键词：Β-乳球蛋白抗原性基因

家蚕蚕蛹过敏原几丁质酶基因的克隆和原核表达载体的构建被引量：5: 2010年; 目的克隆、表达家蚕蚕蛹过敏原几丁质酶基因,并构建其原核表达载体。方法提取家蚕的总RNA,RT-PCR克隆家蚕过敏原几丁质酶的全长基因,设计简并引物,扩增家蚕几丁质酶基因的完整开放阅读框,与pET-28a载体连接,构建原核表达载体。结果成功克隆家蚕主要变应原几丁质酶基因并构建其原核表达载体。该基因含有长度为1668bp的开放阅读框,编码555个氨基酸。该蛋白质的相对分子质量为61500,电点为5.78,编码序列与数据库中已知的家蚕几丁质酶基因的同源性为99%。结论成功克隆家蚕蚕蛹主要过敏原几丁质酶基因并构建了原核表达载体,为家蚕蚕蛹过敏原几丁质酶的重组表达和免疫活性鉴定等奠定了基础。; 刘硕黄钟罗新萍刘志刚陈思; 关键词：家蚕几丁质酶基因克隆原核表达载体

鸡蛋主要过敏原卵清蛋白的两个片段区基因的克隆、表达、纯化及免疫原性鉴定: 2010年; 食物过敏是指当人体摄入某种特定的食物后在体内发生的一种特异性的免疫反应。目前，食物过敏已成为一个新兴的公众性健康问题。近年来各国报道的食物过敏性疾病的发病率呈上升趋势。鸡蛋是FAO／WHO认定的导致人类食物过敏的八大类食品之一，鸡蛋中的过敏原主要存在于蛋清中，; 毋丹丹胡东生黄钟刘志刚闫浩; 关键词：卵清蛋白鸡蛋免疫原性食物过敏

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黄钟

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