顾正
- 作品数：28 被引量：52H指数：5
- 供职机构：上海市计划生育科学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 中华大蟾蜍“高温卵”cDNA文库的构建
- 2001年
- 以长足但不具成熟潜能的中华大蟾蜍“高温卵”为材料 ,提取总RNA和mRNA ,以NotI/OligodT18为引物 ,经反转录合成第 1链cDNA ;再以DNAPolymeraseI合成第 2链 .所得到的cDNA加装衔接头后定向克隆到λ ExCell载体上 ,构建cDNA文库 .结果显示 ,平均每个“高温卵”中总RNA的含量为 5.66μg ,polyA+RNA含量约为 63 .96ng ,构建的cDNA文库的丰度为 8.93×1 0 - 5 pfu/ μgcDNA .随机挑选的 2个重组噬菌体经NotI、EcoRI双酶切后 ,均能酶切出外源片段 ,说明我们已成功地构建了中华大蟾蜍“高温卵”
- 孔维华顾正潘勇左嘉客
- 关键词：中华大蟾蜍CDNA文库
- 胚胎发育由母型调控向合子型调控过渡的机制被引量：2
- 1998年
- 对有性繁殖的生物而言,合子的产生意味着胚胎发育的开始。随后的发育均具备如下通性:第一阶段为细胞分裂,由单个受精卵逐步分裂成为多细胞;第二阶段为细胞运动、分配、三胚层(外胚层,中胚层和内胚层)形成;最终为组织与器官的形成。第一阶段的细胞分裂基本上属母型调控,即由源自卵母细胞发生期间合成的大量蛋白质和mRNAs调控。
- 沈虹顾正左嘉客
- 关键词：胚胎发育
- 大鼠早期三级卵泡中的卵母细胞能在联合培养系统中成批适当成熟(英文)被引量：3
- 2005年
- 我们建立了由离体同步未分化颗粒细胞、动情前期垂体前叶和Δ-4雄烯二酮组成的“联合培养系统”。该联合培养系统可模拟正常生理状态下各相关细胞间的协同作用,更有效地诱发经DES 刺激后所获得的大量大鼠早期三级卵泡中的卵母细胞同步达到适当成熟,从而获得符合正常生理标准的成熟卵球,使卵巢内大量卵母细胞得到充分利用。我们的实验表明,经DES刺激,每侧幼龄大鼠卵巢中平均可取得处在早期三级卵泡中的189枚卵母细胞。在联合培养系统中培养,78%的卵母细胞排出第一极体达到成熟。这些成熟的卵母细胞中88%可正常受精,93%卵裂,经体外培养96h, 有59%的受精卵可发育到桑椹或囊胚。2-细胞期胚胎移植后可发育为健康个体。因此,该联合培养系统为研究大鼠卵母细胞成熟、受精和早胚发育的分子机制提供了非常有效的实验模型。
- 颜桂军顾正孙兆贵左嘉客
- 关键词：卵母细胞卵母细胞成熟卵泡
- Uchl1及其关联蛋白参与小鼠实验性隐睾中精母细胞凋亡(英文)被引量：4
- 2014年
- 以往研究显示Uchl1参与调节生理状况下小鼠精母细胞的凋亡。本文以小鼠实验性单侧隐睾为研究模型,以切除单侧睾丸和假手术作为对照,用苏木精-伊红(HE)染色和DNA末端标记(TUNEL)观察生精细胞的形态和凋亡情况;用免疫组化分析Uchl1及其相关蛋白Jab1和p27kip1在隐睾症的热应激反应导致精母细胞损失过程中的变化情况,并用亲和分析(pull-down)和免疫荧光共定位检测三种蛋白在精母细胞的关联性。结果显示,Jab1和p27kip1,与Uch1平行,在具凋亡形态的精母细胞中响应热应激而含量增加,而在多核巨细胞中无类似变化。Jab1可以与睾丸蛋白提取物中Uchl1结合,并与Uchl1和p27kip1特异性地在具凋亡形态的精母细胞中共定位。以上结果提示,Uchl1蛋白的积累参与隐睾中热应激诱导的生精细胞凋亡过程,但不影响接下来的多核巨细胞的形成,且Uchl1蛋白的作用机制涉及Jab1和p27kip1参与的一种新途径。
- 杜平姚余卫石燕顾正王健孙兆贵左嘉客
- 关键词：隐睾热应激反应精母细胞
- 爱普列特对前列腺癌细胞的体外抑制作用及其机理研究
- 目的:为研究新型的5-α还原酶抑制剂爱普列特治疗前列腺癌的可能性及其可能机理,方法:用5,15和45umol·L的爱普列特分别作用于激素依赖与不依赖性前列腺癌细胞LNCaP及PC3,3d或7d后,相差显微镜进行细胞形态学...
- 钟恩宏孙祖越顾正吴建辉朱焰何桂林刘桂明
- 文献传递
- 丝氨酸蛋白酶抑制剂在抗胚胎着床和抗肿瘤方面的应用
- 本发明提供了丝氨酸蛋白酶抑制剂在抗胚胎着床和抗肿瘤方面的应用。具体地，本发明公开了4-(2-氨乙基)苯磺酰氟和加贝酯等丝氨酸蛋白酶抑制剂(或其活性衍生物或其药学上可接受的盐)在抗胚胎着床和抗肿瘤方面的应用。本发明还提供了...
- 王健李卫华孙兆贵顾正蒋雅红丁训诚
- HeLa细胞表达分泌重组eGFP-DPF-1在卵母细胞上的定位被引量：1
- 2003年
- 将兔输卵管蛋白(DPF-1)基因连结于增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因5′端,构建了真核表达重组质粒(pEGFP-N1/DPF-1),转染HeLa细胞,获得稳定表达分泌融合蛋白eGFP-DPF-1的HeLa细胞株。该融合蛋白呈现的分子量达120 KD,提示经翻译后修饰。取兔卵母细胞-卵丘细胞复合物(COC)、去除卵丘细胞后的卵母细胞或输卵管内的卵母细胞,与该株细胞共培养或培养于该株细胞条件培液中,观察兔输卵管蛋白在兔卵母细胞上的分布。结果显示DPF-1大量结合于卵母细胞透明带,先结合于透明带内层,然后维持在内层多外层少的分布状态上;在卵母细胞质膜表面则呈点状均匀分布。DPF-1在卵母细胞上的分布不受其周围颗粒细胞的阻碍,且颗粒细胞上未见有DPF-1结合的痕迹。本实验首次证实体外真核细胞表达分泌的输卵管蛋白能与卵母细胞结合,并借助绿色荧光蛋白作为示踪信号体外直接观察到该表达产物在卵母细胞上的动态分布,为进一步深入分析输卵管蛋白的功能提供了线索,也为研究输卵管内其他蛋白在配子/早胚上定位提供了可行的办法。
- 罗金平颜桂军顾正左嘉客
- 关键词：卵母细胞绿色荧光蛋白HELA细胞分泌
- 用己烯雌酚产生超数同步成熟卵的方法
- 本发明提供了用己烯雌酚产生超数同步成熟卵的方法和用于产生超数同步成熟卵的组合物。本发明方法可简便有效地获得超数同步成熟卵。
- 左嘉客顾正颜桂军
- 文献传递
- 发育促进因子、其制法及用途
- 本发明提供了一种新的发育促进因子-DPF蛋白，编码DPF蛋白的多核苷酸和经重组技术产生这种DPF蛋白的方法。DPF蛋白是一种源自输卵管分泌物的、具有克服早期胚胎发育阻断的唯一因子。本发明还公开了DPF蛋白及其编码序列的用...
- 左嘉客顾正王健
- 文献传递
- KiSS-1/GPR54系统的生殖内分泌功能研究进展被引量：12
- 2009年
- 亲吻素(kisspeptins)是由KiSS-1基因编码的一组多肽激素,与其受体GPR54一起组成KiSS-1/GPR54系统,参与下丘脑-垂体-性腺轴功能的调节,并在青春期启动和促性腺素释放过程中发挥非常重要的作用。在人和许多动物中研究显示:KiSS-1基因在下丘脑的特定部位表达,并受到性激素的调节。由此人们推测,性激素,特别是雌激素,可能是通过KiSS-1/GPR54系统将其反馈信号传递到GnRH神经元,导致排卵前GnRH/LH峰的形成。本文主要对KiSS-1基因及其编码蛋白的分子结构,KiSS-1/GPR54系统的信号转导途径及其对性腺轴功能的调节机制进行介绍,以期为从事生殖基础医学研究的科研人员提供有益的参考。
- 孙兆贵顾正王健
- 关键词：KISS-1基因GPR54生殖内分泌性腺轴
