陈德坤
- 作品数：186 被引量：638H指数：13
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项甘肃省科学事业费研究项目陕西省科技统筹创新工程计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 小熊猫IL-17的克隆及原核表达被引量：1
- 2014年
- 为制备小熊猫白介素17(IL-17)表达产物,提取活化的小熊猫外周血单个核细胞总RNA,合成cDNA,以此为模板克隆IL-17的成熟肽编码序列,将其重组到原核表达载体pET-32a,并将其转入到BL-21(DE3)中,进行序列分析。重组载体经IPTG诱导表达,表达产物经镍柱纯化。结果显示,小熊猫IL-17的CDS区由462bp组成,含23个氨基酸组成的信号肽,重组IL-17由130个氨基酸组成。SDS-PAGE显示,原核表达产物在诱导温度25℃,IPTG浓度0.5mmol/L,诱导时间20h的条件下,能够获得最佳表达。
- 赵玄多徐素慧杨雯昱高洋修云芳陈玉村陈德坤
- 关键词：小熊猫白介素基因克隆原核表达IL-17
- 增强DNA疫苗的免疫
- 2002年
- 丛日华穆杨陈德坤
- 关键词：核酸免疫抗原递呈
- 原核表达小熊猫IFN-γ的免疫活性研究被引量：1
- 2014年
- 为鉴定小熊猫IFN-γ原核表达产物的免疫活性,以纯化的小熊猫IFN-γ原核表达产物为材料,采用淋巴细胞增殖试验和ELISA,分别测定了IFN-γ对小熊猫淋巴细胞增殖及其分泌IFN-γ的影响。结果显示,与对照组相比,100μL浓度分别为10-1×1.56mg/mL、10-2×1.56mg/mL的纯化IFN-γ能够显著刺激淋巴细胞增殖(P<0.05);经热变性处理(煮沸10min)、浓度为10-1×1.56mg/mL的IFN-γ刺激淋巴细胞增殖的效果与空白对照无显著差异(P>0.05),但明显低于未处理组(P<0.05);淋巴细胞培养系统中加入浓度为10-1×1.56mg/mL的等体积IFN-γ,60h之内培养上清中的IFN-γ含量均显著高于对照组(P<0.01或P<0.05)。结果表明,原核表达的小熊猫IFN-γ产物具有刺激同种淋巴细胞增殖及分泌IFN-γ的活性。
- 徐素慧高洋赵玄多邵良平陈玉村陈德坤
- 关键词：小熊猫Γ干扰素原核表达免疫活性
- 间接ELISA检测犬细小病毒病血清抗体方法的建立被引量：25
- 2006年
- 用犬肾细胞增殖犬细小病毒,经纯化﹑标化作为包被抗原,建立检测犬细小病毒抗体的间接ELISA方法。结果表明:抗原最佳包被浓度5μg/mL;血清最佳稀释度1:40,反应时间45min;酶标抗体最佳稀释度1:2000,反应时间45min;S/P≥0.240判为阳性,≤0.190判为阴性,介于二者之间为可疑。该抗原不与犬瘟热﹑犬传染性肝炎﹑犬冠状病毒病﹑猫泛白细胞减少症病原阳性血清反应;批内重复试验变异系数小于10%,批间重复试验变异系数小于15%;对20份免疫犬血清进行检测,阳性检出率为85%,明显高于血凝抑制试验(65%),符合率为80%。试验结果表明建立的间接ELISA检测犬细小病毒抗体方法特异、灵敏、可重复性好。
- 刘剑郁李晓成陈德坤张燕霞陈杰吴发兴
- 关键词：间接ELISA犬细小病毒抗体检测
- 美国动物疫病区域化评估认可的研究被引量：2
- 2007年
- 随着动物及动物产品国际贸易化的不断深入和发展．动物疫病传播的风险也日益加剧。从欧洲的疯牛病到亚洲的禽流感．重大动物疫病疫情频繁出现．但是如果一发生疫情就全面封关．在贸易全球化的今天．这种“零风险”的做法必然引起有关贸易伙伴的不满．所以实现贸易过程中动物疫病的风险最小化是目前亟待解决的问题．对动物疫病进行区域化防控及评估认可是国际公认的、解决这个问题的通行做法。美国自实施动物疫病的区域化防控和评估认可以来．在动物疫病防控和国际贸易方面成效显著．它的经验对于其他在动物疫病区域化防控和评估认可上还处于摸索和实践中的国家而言．具有一定的指导意义。
- 范钦磊陈德坤孙淑芳刘俊辉郑增忍
- 关键词：重大动物疫病国际贸易疫病传播动物产品
- 羊伪结核抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：7
- 2016年
- 【目的】建立羊伪结核棒状杆菌抗体的间接ELISA检测方法。【方法】分别用不同浓度的伪结核棒状杆菌菌体抗原和培养上清可溶性抗原包被酶标板,用脱脂奶粉封闭酶标板,设置封闭时间分别为1.0,1.5和2h,再用不同稀释度的血清(1∶100,1∶200,1∶400和1∶800)与之反应,以此优化间接ELISA反应条件,确定阳性结果判定的临界值。对间接ELISA方法的特异性和重复性进行考察,并在此基础上对采集的临床样本进行检测。【结果】选用伪结核棒状杆菌菌体为包被抗原,最佳包被抗原菌体密度为OD600=0.08,血清的最佳稀释度为1∶400,封闭时间为2h,阳性血清的临界值为0.329。该抗体检测方法可特异性地检测出伪结核阳性血清,羊口疮阳性血清、羊痘阳性血清、乳房炎阳性血清均呈阴性反应;组内,组间变异系数<10%。该方法对临床样本的检测结果与实际患病状况一致。【结论】成功建立了伪结核抗体间接ELISA检测方法,该方法特异性强、重复性好,可用于临床诊断和批量血清学检测。
- 霍宁宁朱伟英高洋杨雯昱岳进华赵燕清陈德坤
- 关键词：伪结核棒状杆菌间接酶联免疫吸附试验
- 较高母源抗体对雏鸡NDⅣ系苗首次免疫效果的影响被引量：1
- 2003年
- 8日龄雏鸡 70只随机分为 A、B组 ,每组 35只。A组 ,转移因子稀释 ND 系苗。B组 ,生理盐水稀释 ND 系苗。免疫途径为点眼、滴鼻。分别在免疫前 (0 d)和免疫后 2 ,4 ,6 ,8,10 ,12 ,14 d和 16 d采用 β-微量法测各组鸡 ND抗体效价。免疫后 2 6 d用 F48E9毒株攻击各组鸡。试验结果表明 ,各组鸡免疫后的抗体水平均呈下降趋势 ,且 A组鸡与 B组鸡免疫后抗体效价在整个免疫期间差异不显著 (P >0 .0 5 )。攻毒试验结果显示 :A组的死亡率为 4 2 .3% ,B组的死亡率为 5 9.3%。 A组与 B组的保护率呈极显著差异 (P <0 .0 1)。
- 陈德坤雷莉辉郭战军王文秀
- 关键词：母源抗体雏鸡免疫效果影响因素
- 山羊IFN-γ基因的克隆表达与多克隆抗体制备被引量：1
- 2014年
- 为获得山羊IFN-γ重组蛋白,提取山羊外周血淋巴细胞总RNA,反转录得到cDNA,以此为模板经PCR扩增获得IFN-γ的ORF区,构建重组克隆载体。经PCR扩增得到编码山羊IFN-γ成熟肽的基因序列,连入重组表达载体pET-32a,转入BL21(Codon Plus)感受态细胞中,测序并分析。重组表达载体经IPTG诱导后,对产物进行SDS-PAGE分析,并过镍柱纯化。用获得的纯化蛋白免疫家兔制备抗体。结果显示,编码山羊IFN-γ成熟肽部分的片段长432bp;SDS-PAGE分析显示,融合蛋白大小约为34.9ku,在30℃条件下,以0.3mmol/L的IPTG诱导6h,可得到大量可溶性表达的目的蛋白;间接ELISA测定制得的多克隆抗体效价为1∶106。
- 安贝赵玄多杨雯昱侯伟杰高洋陈德坤
- 关键词：山羊IFN-Γ原核表达抗体制备
- IL-17单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2017年
- 为制备山羊IL-17单克隆抗体,诱导重组菌rIL-17-pET32a-TransB(DE3)表达山羊IL-17重组蛋白(rIL-17),纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫合格的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性克隆细胞株。对获得的杂交瘤细胞进行染色体组型分析,并对其分泌的IL-17单克隆抗体进行抗体特异性、抗体类别等分析。结果显示,成功获得了纯化的山羊IL-17原核表达产物;筛选到1株能特异性分泌山羊IL-17单克隆抗体的杂交瘤细胞株-B6,其分泌的单克隆抗体亚型为IgG1,抗体轻链为κ。
- 桑锋锋高洋张洪杰朱伟英王毅陈德坤
- 关键词：山羊杂交瘤细胞酶联免疫吸附试验
- 猪瘟诊断技术研究进展被引量：23
- 2007年
- 猪瘟（Classical Swine Fever．CSF）是严重危害养猪业的主要传染病之一．世界动物卫生组织（OIE）将其确定为A类传染病．也是我国农业部规定的一类传染病。猪瘟病毒（Classical swine fevervirus．CSrV）属黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属（Pestivirus）．
- 朱小甫李晓成陈德坤吴旭锦张志洪军张燕霞
- 关键词：猪瘟病毒黄病毒科血清学诊断方法间接血凝试验荧光抗体试验
