陈德喜
- 作品数：11 被引量：43H指数：4
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- BCL—2蛋白不能抑制VP16诱导的乳腺癌细胞(Bcap37)凋亡被引量：4
- 1999年
- 目的 为了解BCL—2在Bcap37细胞表达增高能否抑制足叶乙甙诱导的细胞凋亡,把重组的逆转录表达载体pLXSN—bcl—2和pLXSN—neo转染Bcap37细胞,经G418筛选获得表达细胞(Bcap37—bcl—2,Bcap37—neo)。方法 经RT—PCR和Western blotting检测bcl—2基因的表达,并用不同浓度的VP16处理两种细胞16小时,经细胞形态观察、细胞凋亡原位显示、MTT实验检测细胞的凋亡变化。结果 两种细胞的凋亡变化没有显著差异。结论 BCL—2高表达不能阻滞VP16诱导的Bcap37细胞凋亡,这与我们以前所做的关于BCL—2能阻滞VP16诱导的K562细胞凋亡作用相反,推测BCL—2的抗凋亡作用可能和细胞类型有关,可能还有其它因素参与BCL—2对细胞凋亡的调节。
- 陈德喜马丽萍曹国栋王申五
- 关键词：VP16乳腺癌
- p53基因转导诱发慢性髓性白血病患者骨髓细胞凋亡被引量：1
- 1999年
- 研究及应用细胞凋亡相关基因参与肿瘤治疗是基因治疗的一个重要领域。细胞凋亡相关基因中研究得最深入的是p53基因。已经有报道转移野生型p53基因抑制肿瘤细胞的体外实验,或转p53基因抑制动物体内成瘤性的实验。为进一步接近人体内基因治疗,我们采用逆转录病毒载体将p53基因转导至CML细胞,初步的实验结果提示,转导的p53基因能引起白血病细胞生长抑制和凋亡。
- 马丽萍童春荣王申五陈德喜
- 关键词：P53基因逆转录病毒载体基因转导细胞凋亡慢性髓性白血病
- 反义bcl-2-正义bcl-Xs逆转录病毒重组体的构建
- 1998年
- 构建一种反义抗细胞凋亡基因-正义促细胞凋亡基因相连结的新型表达质粒,以探讨其对细胞凋亡的影响。用分子克隆方法,成功地构建了反义bcl-2-正义bcl-Xs逆转录病毒重组体,初步结果显示此重组体比反义bcl-2或正义bcl-Xs逆转录病毒重组体具有更强的促细胞凋亡作用。该新型表达质粒的构建为探讨细胞凋亡提供了新工具,新思路。
- 曹国栋王申五陈德喜
- 关键词：逆转录病毒载体
- 转导野生型p53基因提高K562细胞对紫外线诱导的细胞凋亡的敏感性被引量：4
- 1998年
- 目的：观察野生型ｐ５３基因转染的Ｋ５６２细胞对紫外线诱导其细胞凋亡的影响。方法：应用基因转染技术将重组野生型ｐ５３的逆转录病毒载体转导ｐ５３蛋白缺失的Ｋ５６２细胞，用紫外线照射Ｋ５６２ｐ５３细胞不同时间后再培养不同时间，用ＤＮＡ片段化和细胞ＤＮＡ原位末端标记技术检测细胞凋亡情况。结果：紫外线照射Ｋ５６２ｎｅｏ和Ｋ５６２ｐ５３细胞８分钟后再培养７～１２小时，Ｋ５６２ｎｅｏ和Ｋ５６２ｐ５３两组细胞的凋亡差异显著。结论：野生型Ｐ５３蛋白在Ｋ５６２细胞表达后，能加速紫外线诱导的Ｋ５６２细胞凋亡。
- 陈德喜王申五曹国栋马丽萍潘秀英
- 关键词：细胞凋亡P53基因紫外线K562细胞
- 转导野生型p53的K562细胞出现生长抑制和凋亡被引量：6
- 1998年
- 把重组有编码野生型p53的逆转录病毒载体转导到p53蛋白缺失的K562细胞,以观察野生型p53蛋白在K562细胞表达后对K562细胞增殖和凋亡的影响。应用RT-PCR和Western印迹杂交方法检测K562细胞p53表达,应用流式细胞仪计数检测细胞的增殖,采用梯形DNA和细胞形态学方法检测细胞凋亡变化。研究结果表明:感染pLXSN-p53病毒24小时后,K562细胞p53表达阳性,K562-p53细胞的生长受到抑制,少数细胞进入凋亡状态。结论提示,野生型p53可促进p53表达阴性的K562细胞生长抑制与凋亡。
- 陈德喜王申五曹国栋马丽萍潘秀英
- 关键词：K562细胞P53基因PLXSN
- 介绍一种PCR鉴定重组体DNA插入方向及转染的方法被引量：3
- 1998年
- 介绍一种用ＰＣＲ方法鉴定重组体中插入片段的正、反连接方向及其是否导入细胞的方法．其原理是选择紧靠载体克隆位点上游的一段序列为上游引物，以扩增插入序列的上、下游引物分别作为下游引物进行ＰＣＲ．载体上游引物加插入序列的上游引物可扩出产物者为反向连接；加插入序列的下游引物可扩出产物者为正向连接．该法简单、快速，可广泛用于鉴定重组体中插入片段的正、反连接方向及基因转染时外源基因是否导入细胞内．
- 曹国栋王申五陈德喜
- 关键词：转染PCR
- 化学发光杂交进行菌落克隆的原位筛选被引量：4
- 1997年
- 用化学发光杂交试剂代替３２Ｐ进行菌落原位筛选重组Ｐ５３阳性克隆，可减少同位素的放射性损害和污染及半衰期短等缺点．本方法实验周期短、特异性可和同位素相当，可用于重组目的基因的原位杂交筛选．
- 陈德喜王申五张宝春
- 关键词：菌落克隆原位杂交化学发光
- 转染野生型p53对乳腺癌细胞所致细胞凋亡的研究被引量：4
- 2000年
- 目的 为研究 p5 3对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响 ,用重组人野生型 p5 3全长 c DNA的逆转录病毒载体转染Bcap37细胞 ,观察其增殖的凋亡变化。方法 应用 Northernblotting和 Western blotting检测 Bcap37细胞 p5 3表达变化 ,流式细胞仪计数检测细胞增殖及周期变化 ,MTT及苔盼兰计数观察紫外线刺激后细胞存活率差异 ,DNA末端原位标记技术检测细胞凋亡变化。结果 外源野生型 p5 3在Bcap37细胞表达后 ,使细胞生长速度变慢 ,克隆形成所需时间增加 ,并使细胞周期发生变化 ,主要表现在 G1 期生长抑制 ,即细胞停滞于 G1 期 ,紫外线刺激后 ,细胞存活率比对照细胞下降 2 0 %～ 40 % ;细胞凋亡明显增加 (所有数据均 P<0 .0 1)。结论 转染野生型 p5 3的 Bcap37细胞出现生长抑制 ,并加速 U
- 马丽萍陈德喜王申五
- 关键词：乳腺癌细胞凋亡转染野生型P53基因
- 用一种快速RT-PCR法分析培养细胞的基因表达水平被引量：4
- 1997年
- 陈德喜魏妤王申五
- 关键词：细胞培养基因表达PCR
- 逆转录病毒介导的反义bcl-2序列促进足叶乙甙诱导的白血病细胞凋亡被引量：15
- 1998年
- 目的：探讨逆转录病毒介导的反义ｂｃｌ２序列对细胞凋亡的诱导作用。方法：ＰＡ３１７细胞包装逆转录病毒，病毒转导Ｊｕｒｋａｔ细胞后用ＲＴＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测ｂｃｌ２ｍＲＮＡ及蛋白表达水平；用流式细胞仪计数及ＤＮＡ电泳检测细胞凋亡。结果：转染反义ｂｃｌ２序列可使内源性ＢＣＬ２蛋白表达下降，提高白血病细胞株对足叶乙甙（Ｖｐ１６）的敏感性，促进细胞凋亡。结论：反义ｂｃｌ２序列能促进Ｖｐ１６诱导的白血病细胞凋亡，为ｂｃｌ２反义技术治疗白血病的临床应用提供了实验依据。
- 曹国栋王申五陈德喜马丽萍潘秀英林文玉
- 关键词：逆转录病毒细胞凋亡反义DNA白血病
