陆蒙吉
- 作品数：50 被引量：144H指数：7
- 供职机构：杜伊斯堡-埃森大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 14株抗乙型肝炎表面抗原单克隆抗体与变异表面抗原的反应模式及应用
- 2007年
- 目的 制备抗乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）的单克隆抗体，检测单克隆抗体与15种变异HBsAg的反应模式。用筛选出的单抗建立快速检测变异HBsAg的ELISA实验方法，并做初步评价。方法 用中国乙型肝炎病毒感染者血清中分离的HBsAg免疫BALB／c小鼠，通过杂交瘤细胞融合技术制备抗．HBs单克隆抗体。检测不同单克隆抗体与野生及变异HBsAg的反应性。筛选出两种可以较好识别变异HBsAg的单克隆抗体McAb2和McAb3，建立两种抗体ELISA检测HBsAg的方法。结果 制备了14株抗-HBs单抗。经过初筛，有4种可以较好识别包括G145R在内的大多数变异HBsAg。优化了McAb2和McAb3检测HBsAg的条件，检测HBsAg的灵敏度较好，检测变异HBs舷的能力优于2种现行国产HBsAg检测试剂盒。结论 用本实验制备的单抗可以很好地识别包括G145R在内的大多数变异HBsAg。
- 田拥军张振华张正茂李磊覃莉龚劲松杨东亮陆蒙吉
- 关键词：乙型肝炎病毒乙型肝炎表面抗原单克隆抗体
- 土拨鼠白细胞介素15的克隆、表达和活性分析
- 2006年
- 目的对土拨鼠白细胞介素15(woodchuck interleukin 15,wIL-15)分子进行克隆、表达并鉴定其活性,为进一步研究IL-15在嗜肝病毒感染中的作用以及评价IL-15用于治疗慢性HBV感染奠定基础。方法用IL-15的保守引物将wIL-15基因克隆、测序并进行分析,构建wIL-15的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达,分离纯化后用淋巴细胞增殖试验检测其生物学活性。结果wIL-15的完整编码序列为489 nt(与其他哺乳动物IL-15编码序列的同源性高达78％-87％),编码162 AA长度的前体蛋白(与其他哺乳动物IL-15蛋白的同源性高达70％-80％),其信号肽为N端的48 AA,成熟蛋白由114 AA组成。土拨鼠IL-15与灵长动物IL-15的同源性高于啮齿动物。带有His-tag的成熟蛋白,可以在大肠杆菌中表达,分离纯化后,可以刺激Con A活化的小鼠脾细胞和土拨鼠PBMC增殖(其SI值可高达10以上),并存在明显的剂量依赖性。结论(1)wIL-15与其他哺乳动物IL-15高度同源,并且与灵长类动物的IL-15更接近。(2)wIL-15可以在大肠杆菌中表达,并在纯化后能刺激小鼠和土拨鼠淋巴细胞增殖,表现出较好的生物学活性。
- 王宝菊Beate Lohrengel卢银平Micheal Roggendorf陆蒙吉杨东亮
- 关键词：土拨鼠白细胞介素15
- 中国旱獭IL-10分子的克隆和序列分析被引量：3
- 2006年
- 目的克隆旱獭白细胞介素-10(IL-10)全长cDNA序列进行序列分析,为IL-10分子的表达和在土拨鼠肝炎病毒(woodchuckhepatitisvirus,WHV)感染中的应用奠定基础。方法根据Genbank的土拨鼠IL-10cDNA序列,在5′非编码区和3′非编码区设计特异性引物,提取旱獭脾组织总RNA作为模板,RT-PCR扩增旱獭IL-10cDNA。PCR产物纯化后连接至T载体(pMD18-T),构建重组质粒pMD18-T-cmIL-10。对重组质粒进行酶切鉴定,选择阳性克隆测序。对所获得的序列应用分析软件进行分析。结果RT-PCR扩增产物为685bp。重组质粒pMD18-T-cmIL-10经EcoRⅠ与PstⅠ双酶切提示含目的基因片段。序列分析提示旱獭IL-10的编码序列为537bp,与土拨鼠IL-10的同源性为100%。结论成功克隆旱獭IL-10分子,并构建重组质粒pMD18-T-cmIL-10。
- 李安意王宝菊田拥军江敏鲍俊杰郝友华喻植群陆蒙吉杨东亮
- 关键词：白细胞介素-10
- 替诺福韦体外抑制乙型肝炎病毒复制的研究被引量：2
- 2009年
- 目的观察抗乙型肝炎病毒(HBV)核苷类似物替诺福韦体外对HBV复制的抑制作用。方法噻唑蓝(MTT)比色法检测药物对细胞的毒性作用。将乙型肝炎病毒复制子pHBV1.3质粒转染HepG2细胞,在转染细胞培养液中加入不同浓度的替诺福韦,然后在不同时间段观察替诺福韦的抗病毒作用。ELISA检测培养上清中HbsAg,HBeAg的表达,荧光定量PCR(FQ-PCR)定量检测培养上清中HBV DNA拷贝数,Southern blot分析转染细胞中HBV复制中间体。结果替诺福韦降低了培养上清中HbsAg,HBeAg水平及HBV DNA拷贝数,抑制了转染细胞中HBV复制中间体的形成。替诺福韦对HBV复制子体外复制的抑制作用依赖于药物浓度及作用时间。结论替诺福韦在体外对HBV复制有较强的抑制作用,有望用于临床治疗慢性乙型肝炎。
- 卢银平郭涛董继华刘朝陆蒙吉杨东亮
- 关键词：替诺福韦乙型肝炎病毒抗病毒
- 三种免疫抑制剂对HBV质粒感染小鼠HBV复制的影响
- 2015年
- 目的应用小鼠模型评价3种临床常用的免疫抑制剂对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法利用高压水注射法将HBV质粒p AAV/HBV1.2导入Balb/C小鼠肝内,建立小鼠HBV复制模型;将Balb/C小鼠随机分成4组,每组10只,分别给予生理盐水(Saline)、FK506、DEX和CYP处理。1w后,将供体C57BL/6小鼠皮瓣移植至上述经免疫抑制剂或生理盐水处理的Balb/C小鼠,皮肤移植后继续使用上述免疫抑制剂或生理盐水至观察期结束。采用电化学免疫发光法检测血清HBs Ag、HBs Ab和HBc Ab水平,采用Real-time PCR法检测血清病毒载量。结果FK506、地塞米松和环磷酰胺处理小鼠移植皮瓣的存活时间分别为(21.50±3.09)d、(21.50±3.09)d和(21.40±1.52)d,分别较生理盐水处理组(8.67±1.86)d明显延长[P=0.037、P=0.000和P=0.000];FK506处理组小鼠HBV复制及其抗体产生与对照组无显著性差异,地塞米松处理组在药物处理期间能维持病毒复制,但停药后病毒DNA和HBs Ag迅速下降至检测水平以下,至观察终点仍未检出HBs Ab和HBc Ab阳性,环磷酰胺能明显延长小鼠HBV复制的持续时间,即使在停药后16 w血清HBV DNA和HBs Ag均维持在较高水平,HBc Ab和HBs Ab持续阴性。结论环磷酰胺而非FK506处理可在Balb/C小鼠模型中建立HBV持续复制模型。
- 黄顺梅王俊忠宋志韬王宝菊朱珍妮朱彬陆蒙吉杨东亮
- 关键词：乙型肝炎病毒免疫抑制剂小鼠
- 乙型肝炎病毒表达载体pHY106在筛选抗病毒药物中的意义被引量：1
- 2007年
- 目的应用新的HBV表达载体，建立体外筛选临床抗HBV药物的方法。方法克隆对拉米夫定耐药的CHB患者体内HBV全基因组，然后将其亚克隆到HBV真核表达载体pHY106，体外转染Huh7细胞，检测转染后不同时间HBsAg、HBeAg、HBVDNA及HBV复制中间体水平。分析拉米夫定和阿德福韦对HBV基因表达和复制的抑制作用，指导临床用药。结果成功构建全部8个HBV临床分离株全基因组真核表达质粒，HBV聚合酶基因YMDD有5个产生YVDD突变，3个产生YIDD突变。该质粒上HBV基因能在Huh7细胞中进行复制和表达，拉米夫定不能体外抑制HBV复制，阿德福韦抑制了HBV在Huh7细胞中的复制，抑制程度与药物浓度相关。阿德福韦在患者体内也抑制了HBV的复制。结论新建立的体外筛选抗HBV药物的方法能用于临床快速筛选抗HBV药物，对CHB的治疗用药具有指导意义。
- 卢银平董继华刘朝管世鹤陆蒙吉杨东亮
- 关键词：肝炎病毒乙型肝炎乙型抗病毒药
- 四种肝细胞系天然免疫相关分子的表达及HBV对其表达的影响
- 2011年
- 目的探讨四种肝细胞系Huh7、HepG2、HepG2.2.15和L02天然免疫相关分子的表达情况及HBV对其表达的影响。方法提取Huh7、HepG2、HepG2.2.15和L02四种肝细胞及转染后Huh7、HepG2和HepG2.2.15细胞mRNA,逆转录合成cDNA,采用PCR法检测天然免疫相关分子的表达情况。结果四种细胞均能表达TLRs家族的TLR1、TLR3、TLR4、TLR9,NLRs家族的NOD1和RLRs家族的RIG1等天然免疫相关分子;HepG2和Huh7转染HBV可复制性克隆后出现MDA5和A20的表达下调。结论四种肝细胞系均能表达一系列天然免疫相关分子,不同肝细胞系间表达存在一定的差异。HBV瞬时转染和稳定表达能不同程度地影响这些天然免疫相关分子的表达水平。
- 刘敏郝友华丁红晖喻涛吴珺徐春利陆蒙吉杨东亮
- 关键词：肝细胞系乙型肝炎病毒
- 土拨鼠肝炎病毒核心蛋白的高效表达和B细胞表位鉴定
- 2007年
- 目的建立高效表达土拨鼠肝炎病毒核心蛋白(WHcAg)的方法并对其B细胞表位进行鉴定。方法分别构建不同截短型WHcAg的质粒以了解能大量表达并形成WHV核心颗粒的区段,利用变性WHcAg制备单克隆抗体以寻找能与WHcAg线性B细胞表位结合的单克隆抗体。结果WHcAg前144或149氨基酸残基能够大量表达并能形成颗粒样结构。这2种截短型WHcAg能够在大肠杆菌中表达并组装成直径为34 nm的核心颗粒,最终纯化获得毫克级的核心蛋白。截短型WHcAg保留了全长WHcAg的抗原性,而且变性WHcAg存在另外的B细胞线性表位,利用变性WHcAg进行免疫制备单克隆抗体获得的5株抗体均针对WHcAg的N末端表位,该表位在WHcAg和HBcAg高度保守。结论建立了高效表达WHcAg的方法,制备了针对WHcAg单克隆抗体。并对WHcAg的线性B细胞表位进行了鉴定,发现WHcAg和HBcAg的N末端存在共同的线性B细胞表位。
- 张振华田拥军李磊Melanie FiedleErnst SchmidMichael Roggendorf陆蒙吉徐飏杨东亮
- 关键词：土拨鼠肝炎病毒核心蛋白单克隆抗体
- HCV核心蛋白对IFN-α诱导的抗病毒分子表达的影响及其机制
- 目的:慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染是造成肝硬化和肝癌的重要原因之一。目前,针对HCV感染尚缺乏有效的疫苗,干扰素α和病毒唑联合应用的治疗效果仍不理想。因此,深入了解HCV抵抗IFN-α应答的机制将为探索抗HCV策略提供...
- 常燕子陆蒙吉杨东亮
- 文献传递
- 中国青海地区喜马拉雅旱獭嗜肝病毒自然感染的组织学研究被引量：14
- 2005年
- 应用原位杂交技术、免疫组化技术以土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck hepatitis virus,WHV)的检测系统检测50份 喜马拉雅旱獭肝组织可能存在的嗜肝病毒c基因、s抗原及c抗原的表达,同时检测肝脏组织病理学改变。结果显示 旱獭肝组织中嗜肝病毒s抗原、c抗原的阳性率分别为26％(13／50)、36％(18／50);在抗原双阳性的10份肝组织标本 中有c基因的阳性表达,阳性率为50％。c抗原定位于肝细胞胞浆和／或胞核,呈散在、片簇状分布,c基因定位于肝细 胞的细胞核,阳性细胞散在分布。50份标本中5份出现肝炎的病理改变,与抗原检出间无明显相关性。使用WHV 的病毒检测系统证实青海地区喜马拉雅旱獭可能存在类似WHV的嗜肝病毒感染,从组织学的角度为中国青海地区 喜马拉雅旱獭嗜肝病毒自然感染提供证据,此种动物有可能用于建立嗜肝病毒感染的动物模型。
- 李新宇王宝菊孟忠吉汪由坤赵西平陆蒙吉杨东亮
- 关键词：原位杂交免疫组化
