王宝菊
- 作品数：80 被引量：195H指数：7
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 中国旱獭（M.himalayana）GAPDH分子的部分cDNA克隆及序列分析被引量：1
- 2014年
- 目的对新近建立的乙肝研究动物模型喜马拉雅旱獭3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）的部分cDNA序列进行了克隆和序列分析．为该模型在HBV感染研究中的应用奠定基础。方法根据Genbank的人GAPDHeDNA的序列设计特异性引物．以提取的旱獭脾组织总RNA为模板,RT-PCR扩增旱獭GAPDH cDNA序列。纯化的PCR产物连接至T载体（pMD18-T），然后构建重组质粒pMD18-T-mhGAPDH。对重组质粒进行PCR初筛、酶切鉴定，将阳性克隆测序。对序列进行同源性以及种系进化分析。结果扩增的旱獭GAPDH序列为535bp，编码序列为533bp（nt3-335），编码177个氨基酸。获得的序列和其它类哺乳动物GAPDH的同源性均在88％以上，其中与土拨鼠GAPDH的同源性最高（99．62％），氨基酸序列同源性高达100％。构建种系进化树，分析结果提示喜马拉雅旱獭GAPDH与土拨鼠GAPDH的亲缘关系最接近。结论成功的克隆了喜马拉雅旱獭GAPDH的部分序列。序列分析结果提示喜马拉雅旱獭GAPDH与土拨鼠GAPDH的亲缘关系最近，同源性最高。
- 朱彬王宝菊朱珍妮黄顺梅宋志韬李安意陶元清王忠东陆蒙吉杨东亮
- 关键词：喜马拉雅旱獭甘油醛-3-磷酸脱氢酶
- 门静脉高压大鼠血红素氧化酶-1mRNA的表达被引量：1
- 2002年
- 目的 研究门静脉高压与血红素氧化酶 (HO) 1mRNA表达的关系。方法 建立大鼠门静脉部分缩窄模型 ,应用原位杂交方法检测大鼠肝、脾及脾静脉HO 1mRNA的表达。结果 对照组 12只大鼠所检组织均未见HO 1mRNA表达。门静脉高压组有 15只大鼠脾脏HO 1mRNA呈阳性表达 (83 .3 % ) ,10只大鼠脾静脉呈阳性表达 (5 5 .6% ) ;肝组织未见HO 1mRNA表达。结论 门静脉高压大鼠处于应激状态 ,其脾脏及脾静脉HO 1mRNA表达增强 ,其代谢产物可能加剧门静脉高压。
- 张黎黄加栋杨镇王剑王宝菊房崇芸
- 关键词：门静脉高压血红素氧化酶动物模型原位杂交
- APOBEC3F的克隆、真核表达及其抗HBV效应的初步研究
- 2007年
- 目的克隆、体外真核表达载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3F(APOBEC3F)基因并研究其抗病毒效应。方法应用RT-PCR的方法从人PBMC细胞中扩增APOBEC3F基因,构建HA-APOBEC3F融合蛋白真核表达载体pXFA3F,pXFA3F和具有复制能力的1.3倍HBV载体pHBV1.3共转染HepG2细胞,Western印迹检测APOBEC3F融合蛋白在HepG2细胞中的表达,ELISA方法检测细胞培养上清液中的HBsAg和HBeAg水平,实时定量PCR检测HBV相关mRNA水平变化。结果克隆了APOBEC3F基因,其经测序与GeneBank公布序列一致;构建的APOBEC3F真核表达载体pXFA3F经转染可在HepG2细胞中瞬时表达;APOBEC3F可抑制乙型肝炎表面抗原和e抗原的分泌,可使转染细胞内HBV相关mRNA水平下降。结论成功克隆并真核表达了APOBEC3F基因,其在体外具有抗HBV生物学效应。
- 马涛雷延昌郝友华王宝菊杨东亮
- 关键词：克隆真核表达
- 旱獭肝组织中嗜肝病毒表面抗原表达的免疫组化研究被引量：7
- 2003年
- 目的 从组织学和免疫学角度寻找旱獭嗜肝病毒感染的证据。方法 应用免疫组织化学技术以土拨鼠肝炎病毒表面抗原抗体检测101份旱獭肝组织中嗜肝病毒表面抗原的表达,同时观察旱獭肝组织常规病理改变,并对抗原检出与病理组织改变的关系进行相关分析。结果 旱獭肝组织中嗜肝病毒表面抗原检出率为82.2％(83/101)。阳性抗原颗粒定位于肝细胞胞浆和/或胞膜,阳性细胞呈散在、簇状和片状分布。101份肝组织标本中14份出现肝炎的病理改变,且与抗原检出之间存在明显的相关性(r=0.92)。结论 首次应用免疫组织化学技术证实早獭存在类似土拨鼠肝炎病毒的嗜肝病毒感染,此种动物有可能用于建立嗜肝病毒感染动物模型。
- 张珺王宝菊孟忠吉汪由坤杨东亮
- 关键词：嗜肝病毒免疫组化抗原表达病理组织学
- 地塞米松、环磷酰胺和他克莫司三种免疫抑制剂影响HBV复制的体外研究被引量：1
- 2018年
- 目的探讨地塞米松(DEX)、环磷酰胺(CYP)和他克莫司(FK506)在体外对HBV蛋白合成、DNA复制的影响。方法将不同浓度的DEX、CYP和FK506作用于HepG2.2.15细胞系,通过MTT实验确定药物安全浓度范围,通过检测细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg水平,以及细胞内HBV DNA水平来评价HBV的表达和复制情况。结果DEX、CYP和FK506的药物安全浓度范围分别为0~500、0~1000和0~10μg/mL。与培养基对照处理相比,FK506处理后HBsAg、HBeAg分泌及HBV DNA复制变化差异无统计学意义;CYP处理增加HBsAg分泌,与对照相比差异有统计学意义(P<0.05);但HBeAg分泌及HBV DNA复制变化差异无统计学意义;DEX作用减少HBsAg和HBeAg的分泌,与对照相比差异有统计学意义(P<0.05);但是细胞内HBV DNA复制水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论在药物安全浓度范围内,FK506对HepG2.2.15细胞HBV DNA复制无直接抑制或促进作用。CYP处理后增加HepG2.2.15细胞HBsAg表达,但HBeAg表达及HBV DNA复制变化差异无促进作用;DEX处理抑制HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg表达,但对HBV DNA复制无抑制作用。
- 黄顺梅王俊忠张小勇李宝林宋志韬朱珍妮朱彬王宝菊陆蒙吉杨东亮
- 关键词：免疫抑制剂HEPG2.2.15细胞
- 一种HBV研究的新动物模型-喜马拉雅旱獭β-actin基因的克隆及序列分析被引量：5
- 2011年
- 目的 喜马拉雅旱獭对土拨鼠肝炎病毒（woodchuck hepatitis virus,WHV）高度易感,可作为HBV感染的新动物模型.本研究对喜马拉雅旱獭β肌动蛋白（β-actin）的部分cDNA序列进行了克隆和序列分析,为喜马拉雅旱獭在HBV感染研究中的应用奠定基础.方法 根据Genbank的土拨鼠β-actin cDNA的序列设计特异性引物,提取旱獭脾组织总RNA作为模板,RT-PCR扩增旱獭β-actin cDNA序列;PCR产物纯化后连接至T载体（pMD18-T）,构建重组质粒pMD18-T-mhActin.对重组质粒进行PCR初筛及酶切鉴定,选择阳性克隆测序;对所获得的序列进行同源性和种系进化分析.结果 获得的旱獭β-actin序列为349 bp（nt887～1 235）,其中编码序列为323 bp（nt-887～1209）,编码106个氨基酸,包含形成二硫键的2个丝氨酸位点（氨基酸16和氨基酸105）及与β-actin功能相关的2个ATP结合位点、6个凝溶胶蛋白结合位点和6个profilin结合位点.同源性分析发现上述序列与其它哺乳动物β-actin的同源性均高达88 %以上,与土拨鼠β-actin的同源性最高（99.69 %）,其氨基酸序列的同源性为100 %.种系进化树分析提示喜马拉雅旱獭β-actin与土拨鼠β-actin的亲缘关系最近,其次为其它啮齿类动物.结论 成功克隆了喜马拉雅旱獭β-actin的部分序列.序列分析发现喜马拉雅旱獭β-actin与土拨鼠β-actin的同源性最高.
- 冯雪梅尹莹李安意朱珍妮陶元清王忠东陆蒙吉杨东亮王宝菊
- 关键词：乙型肝炎病毒喜马拉雅旱獭肌动蛋白
- 中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体糖基结合域的原核表达与多克隆抗体的制备被引量：1
- 2007年
- 目的:构建中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H1和H2亚基糖基识别域(CRD)的原核表达质粒,体外表达纯化后制备多克隆抗体。方法:RT-PCR扩增出中国旱獭肝组织中ASGPR CRDH1和CRDH2 cDNA,将其克隆至原核表达载体pRSET-B中,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS内诱导表达。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并采用酶联免疫吸附试验、Western blot及免疫组织化学检测抗体的灵敏度和特异性。结果:成功构建了中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体H1和H2亚基糖基识别域原核表达质粒pRSET-B.CRDH1和pRSET-B.CRDH2,目的蛋白可以高效表达,用其免疫BALB/c小鼠获得了高效价的特异性多克隆抗体。结论:首次成功表达了中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体H1和H2亚基糖基识别域多肽,且纯度高,免疫原性强,用其免疫小鼠获得的多克隆抗体特异性好、效价高,为在HBV感染模型-中国旱獭体内进行肝脏疾病的靶向治疗奠定了实验基础。
- 杨燕黄凰刘慎沛张振华王宝菊田拥军杨东亮
- 关键词：去唾液酸糖蛋白受体多克隆抗体靶向治疗
- 肠道菌群影响HBV感染结局的机制研究
- 王俊忠朱庆峰夏盼盼郭伟娜艾灵王宝菊杨东亮
- TTV/HCV重叠感染者肝损伤及对干扰素治疗的应答状况
- 2004年
- 孙长华陈步凤李洪波王宝菊
- 关键词：TTVHCV肝损伤干扰素
- pRNA介导的RNA干扰抑制HBV表达和复制的研究被引量：4
- 2006年
- 为了研究由pRNA携带的siRNA(HBVsi18-42)所介导的RNAi过程能有效地抑制HBV的基因表达和病毒复制,我们利用细胞模型和高压注射小鼠模型评价HBVsi18-42对HBV复制和基因表达的抑制作用。通过Western印迹检测细胞内的HBsAg含量,用ELISA检测细胞培养上清和小鼠血清中的HBsAg水平,采用Southern印迹检测HBV的复制中间体,通过免疫组织化学检测肝组织切片中HBcAg的表达情况。试验结果显示,HBVsi18-42能以剂量依赖的方式在293T细胞中抑制HBsAg的表达以及在HepG2细胞中下调病毒HBsAg和HBeAg的表达和病毒复制中间体的水平。在小鼠模型中,注射后的3d内HBVsi18-42使小鼠血清中HBsAg的水平分别下降了98.98%、77.07%和60.73%,免疫组织化学检测显示,在注射后的第3天小鼠肝组织内HBcAg阳性细胞数减少了79.1%。初步结果显示HBVsi18-42无论是在细胞或是在小鼠模型中都能下调HBV的复制和基因的表达。本研究为我们下一步实现由pRNA介导的靶向RNAi及基因治疗提供了理论和技术支持。
- 张正茂田拥军杨燕王宝菊郭培宣杨东亮
- 关键词：RNA干扰PRNA乙型肝炎病毒
