谭理
- 作品数：15 被引量：21H指数：3
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- 胚胎干细胞来源的内皮细胞构建内皮化血管支架被引量：2
- 2007年
- 目的探索胚胎干细胞定向分化为血管内皮细胞,并用于构建内皮化血管支架,为临床心血管疾病治疗提供实验基础。方法采用改良后单层分化体系,血管内皮生长因子(VEGF)作为独立诱导因子定向诱导胚胎干细胞分化为血管内皮细胞,用RT-PCR法检测分化时程各时间点内皮特异性标志的表达,用免疫荧光法检测分化体系中的内皮细胞蛋白标志。将分化成熟的内皮细胞种植于支架表面,构建内皮化血管支架。结果胚胎干细胞全能性分子标志Oct3／4,早期内皮标志Flk-1,Tie-2,PECAM-1,以及成熟内皮标志VE-cadherin在胚胎干细胞分化体系中呈现一定的转录时序性;免疫荧光结果显示分化细胞Flk-1,VE-cadheiin阳性,血管支架被表达VE-cadherin的内皮细胞覆盖。结论我们改良了胚胎干细胞分化为血管内皮细胞的方法,并用于探索内皮化血管支架的构建。
- 钟贞杨健李平谭理应其龙宋后燕
- 关键词：胚胎干细胞分化
- ATF-PAI2CD融合蛋白基因在毕赤酵母中克隆、表达和鉴定被引量：4
- 2004年
- 为了克隆尿激酶型纤溶酶原激活物 (uPA)的氨基末端片段与纤溶酶原激活剂抑制物 2型(PAI 2 )突变体所构成的融合蛋白基因 ,并在Pichiapastoris中表达 ,应用PCR获得了人ATF PAI2CD融合蛋白基因cDNA(简称ATF PAI2CD) ,将其克隆到酵母表达载体pPIC9K ,获得融合基因表达质粒pZWY ATF PAI2CD .该质粒转化毕赤酵母菌GS115 ,用G4 18 YPD平板筛选高拷贝转化子 ,然后用甲醇诱导表达 .工程菌用摇瓶发酵 ,表达产物ATF PAI2CD占培养液中总蛋白 5 0 %以上 .经硫酸铵沉淀、分子筛和离子交换层析纯化得到的目标表达产物纯度达 95 % .Western印迹检测具有PAI 2与uPA的免疫原性 ,经牛奶板法检测具有纤溶抑制活性 .经流式细胞仪 (FCM )检测 ,能与肿瘤细胞特异性结合 .结果表明 ,ATF PAI2CD融合蛋白成功地在毕赤酵母中表达 ,且具有抑制uPA及与肿瘤细胞表面uPAR特异性结合的双重功能 .提示该融合蛋白可能具有良好的应用前景 .
- 王霞侯敏孙兴会张宇清李平谭理朱运松
- 关键词：融合蛋白基因毕赤酵母克隆尿激酶型纤溶酶原激活物
- T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1的结构与功能
- 2003年
- T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(T-lymphoma invasion and metastasis inducing factor 1,Tiaml)是Ras相关的C3肉毒素底物1(Ras-Related C3 botulinum toxin substrate 1,Racl)的特异性鸟苷酸交换因子(guanine nucleotide ex-change factor,GEF)。在细胞外信号刺激下Tiaml可以促进Racl从无活性的GDP结合状态向有活性的GTP结合状态转换,有活性的Racl-GTP与不同的下游效应分子相互作用,从而影响多种细胞事件。
- 谭理朱运松
- 关键词：TIAM1RAC1
- 肺癌细胞高、低转移株中uPA基因启动子的序列和活性被引量：1
- 2004年
- 目的 分析人肺巨细胞癌高、低转移株中uPA基因启动子序列差异和这种差异对启动子活性的影响。方法 用PCR分段扩增人肺巨细胞癌高 (95D)和低 (95C)转移细胞株中uPA基因启动子序列 ,将uPA启动子亚克隆到荧光素酶为报告基因的 pGL3 Basic载体上 ,转染 95D或 95C细胞 ,分析启动子活性。 结果 95D与 95C细胞uPA基因启动子序列中有 3个位点碱基的差别 ,95D分别是 - 1933bp为“T” ,- 4 2 4bp为“C” ,- 96bp为“G” ,而 95C分别为“C”、“T”、“T”。这些不同对启动子活性的影响未见差别。在 - 2 14 3/ - 182 4之间存在uPA基因启动子的增强子序列 ,在 - 182 4 / - 4 0 8之间存在uPA启动子的负性调控序列。结论 uPA在 95D与 95C细胞中表达的差别不是直接由于启动子序列差别引起的 。
- 王丽石李平谭理朱运松
- 关键词：肺癌转移株UPA基因启动子活性癌细胞
- HA20-lys10在大肠埃希菌中的融合表达纯化和凝胶阻滞试验
- 2004年
- 目的 表达和纯化流感病毒血凝素HA2氨基末端20个氨基酸与10个赖氨酸的融合蛋白HA20-lys10,并观察其与质粒结合的能力。方法 用PCR方法构建流感病毒血凝素HA2氨基末端20个氨基酸与10个赖氨酸的融合基因HA20—lys10,并克隆于pET32a(+)原核表达载体。将重组表达质粒pET-HA-K转化大肠埃希菌BL21(DE3),当A(Abs)_(600nm)达到0.6时,加入终浓度为1mmol/L IPTG诱导目的蛋白的表达。表达产物用亲和层析一步法进行纯化,然后用凝胶阻滞试验观察重组蛋白结合质粒的能力。结果 IPTG诱导后可获得相对分子质量约为27 000的目的蛋白,表达蛋白以可溶形式存在,占菌体蛋白20％以上。表达菌超声后,表达产物经亲和层析一步纯化后可获得纯度达85％以上目的蛋白。凝胶阻滞试验发现,纯化的重组蛋白在一定条件下可以与质粒结合,使质粒的迁移率明显改变。结论 融合蛋白HA20—lys10有望用于受体介导基因转移,以提高基因转移的效率。
- 孙兴会张宇清王霞侯敏谭理李平朱运松
- 关键词：大肠埃希菌融合基因基因表达
- 血清诱导95D细胞中Nm23H1从细胞质转位至细胞膜板状伪足
- 2005年
- 目的 探索Nm2 3H1(肿瘤转移抑制因子之一)在细胞内的定位与其功能关系。方法 以人肺巨细胞癌95D细胞为模型,在血清饥饿2 4h后加入血清,观察细胞形态变化及Nm2 3H1在细胞内的分布变化。结果 血清刺激可以诱导95D细胞形成板状伪足,细胞免疫荧光实验发现Nm2 3H1主要分布于细胞质,但在血清诱导形成的细胞板状伪足部位出现显著的Nm2 3H1分布。亚细胞组分分离及免疫印迹的实验结果也证实Nm2 3H1在血清刺激下可以转位到细胞膜,并且这种诱导作用是迅速的,在30min左右达到高峰,8h后降至仍然略高于血清诱导前的水平。结论 Nm2 3H1这种特殊的定位可能涉及细胞的运动,为进一步研究Nm2 3H1的功能与作用机制提供了基础。
- 谭理李平孙兴会李春阳童畅樊静朱运松
- 关键词：NM23H1血清诱导细胞膜细胞质转位人肺巨细胞癌
- Lys_(10)-PAI-1融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化和凝胶阻滞实验被引量：5
- 2003年
- 用PCR方法构建 10个赖氨酸与纤溶酶原激活剂抑制物 1的融合基因Lys10 PAI 1,并克隆于pET2 8a(+ )和pET32a(+ )原核表达载体 .将重组表达质粒pET32 PAI和pET2 8 PAI转化大肠杆菌BL2 1(DE3) .IPTG诱导后可获得分子量分别为 6 3kD和 4 3kD的目的蛋白 ,表达蛋白占菌体蛋白2 0 %以上 ,大多数重组蛋白以不溶形式存在 .表达产物经变性、复性、超滤、透析和亲和层析等步骤 ,可以得到纯化的Trx·PAI 1和rPAI 1重组蛋白 .Western印迹结果表明 ,目的蛋白具有人PAI 1的抗原性 .凝胶阻滞实验发现 ,纯化的重组蛋白在一定条件下 ,可以与质粒结合 ,使质粒的迁移率明显改变 .研究结果表明 ,Trx·PAI 1和rPAI
- 孙兴会李平张宇清谭理王霞侯敏陈怡韵朱运松
- 关键词：纤溶酶原激活剂抑制物-1融合基因纯化
- 血小板活化因子受体在不同病理类型卵巢上皮性癌中的表达及意义被引量：2
- 2010年
- 卵巢上皮性癌（卵巢癌）是妇科常见的恶性肿瘤之一,病理类型复杂,包括卵巢浆液性腺癌、黏液性腺癌、子宫内膜样癌及透明细胞癌等.目前的治疗方式仍然是手术及术后辅以铂类和紫杉醇等药物为主的化疗,但效果不满意,5年生存率仍徘徊在40%左右[1].
- 姜伟张彭南谭理康玉程明军徐丛剑Bin Ye
- 关键词：卵巢上皮性癌血小板活化因子受体病理类型卵巢浆液性腺癌子宫内膜样癌透明细胞癌
- C端谷氨酰胺富含结构域调节TIAR的细胞内定位
- 2006年
- 目的阐明核糖核酸(RNA)结合蛋白T细胞内抗原相关蛋白(TIAR)的结构域与细胞内定位之间的关系。方法细胞免疫荧光检测SMCC-7721细胞内源性TIAR的细胞内分布,亚克隆构建TIAR全长及缺失体的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达质粒,脂质体法瞬时转染SMCC-7721细胞,在荧光显微镜下观察融合蛋白在细胞内的荧光分布情况,免疫印迹检测融合蛋白的表达情况。结果细胞免疫荧光结果显示在SMCC-7721细胞中TIAR主要浓集于细胞核,细胞浆也有少量弥散分布。酶切鉴定及测序结果显示TIAR全长及缺失体的pEGFP-C3重组表达质粒构建成功。EGFP-TIARFL(TIAR全长)主要分布于细胞核;而EGFP-TIARRRM123(TIAR的N端3个RNA结合结构域)弥散分布于整个细胞;EGFP-TIARQ-rich(TIAR的C端谷胺酰胺富含结构域)浓集于细胞核,但浓集程度要比TIARFL-EGFP弱。免疫印迹证实过表达的TIAR全长及缺失体的EGFP融合蛋白分子量大小符合预期。结论我们的结果提示C端谷氨酸富含结构域参与TIAR细胞内定位的调节。
- 谭理李平童畅朱运松
- 关键词：细胞内定位增强型绿色荧光蛋白
- 人肺巨细胞癌高和低转移株中相关转录因子分析被引量：5
- 2003年
- 目的 :为了阐明人肺巨细胞癌高转移株 (95D)细胞高表达uPA、低转移株 (95C)细胞低表达uPA的原因 ,分析两株细胞中有关的转录因子的差异。方法 :uPA基因启动子不同片段与Luciferase报告基因的融合基因真核表达质粒分别平行转染 95C、95D细胞 ,比较活性 ;用EMSA分析 95D、95C细胞中与寡核苷酸探针特异结合的转录因子差异 ;用RT PCR分析两株细胞中相应转录因子mRNA相对表达水平。结果 :三个不同长度的uPA基因启动子在 95D细胞中的活性均相应高于 95C细胞中的活性 ,分别是 95C细胞的 1 32、1 6 6和 1 6 1倍 ,EMSA表明95D细胞中与AP1、AP2、NFκB及SP1探针结合的转录因子量均高于 95C细胞中 ;RT PCR表明AP2、NKκB及SP1转录因子mRNA表达水平分别是 95C细胞的 1 5 7、1 77和 1 2 8倍。结论 :转录因子AP1、AP2、NKκB及SP1在95D细胞中含量高于 95C细胞可能是uPA在 95D与 95C细胞中表达差别的原因之一。
- 王丽石李平谭理朱运松
- 关键词：尿激酶型纤溶酶原激活剂人肺巨细胞癌转录因子
