蔡芳
- 作品数：42 被引量：187H指数：7
- 供职机构：中南大学湘雅医学院医学遗传学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学自动化与计算机技术更多>>
- 利用核糖体基因区打靶载体靶向表达改造型人凝血因子Ⅷ被引量：4
- 2005年
- 构建了携带改造型hFⅧ(hFⅧ-BDDAK39)的核糖体基因区靶向表达载体pHrneo-BDDAK39,并将其转入人纤维肉瘤细胞(HT1080),检测其定点整合的能力及hFⅧ-BDDAK39的表达情况.结果显示,pHrneo-BDDAK39能够成功地将hFⅧ-BDDAK39靶入到HT1080细胞的核糖体基因区,定点整合效率达到2.0×10^(-5),并且靶入的hFⅧ-BDDAK39能有效表达,表达量为(32±5)ng·10~6细胞^-1·24h^(-1).这为利用此靶向表达载体进行血友病A的基因治疗提供了重要的实验依据.
- 刘雄昊刘慕君佘华文路薛志刚梁德生蔡芳潘乾龙志高邬玲阡戴和平夏昆夏家辉
- 关键词：靶向表达核糖体基因改造型打靶载体纤维肉瘤
- 电压门控快钾通道蛋白Kv4.3的抗体制备及检测
- 2005年
- Kv4(voltagegatedK+channel4)是在哺乳动物心脏和脑组织中广泛表达的一类钾离子通道蛋白.它主要介导心肌细胞和神经细胞中的A-型(快速失活型)K+电流,是构成中枢神经系统和心肌细胞中的快速失活外向型电流的基础.Kv4.3是电压门控钾离子通道3种α亚基之一.通道中含有许多具有调节作用的辅助亚基,它们通过与Kv4.3互作实现对通道的调节.本研究根据人类氨基酸序列以MAPs法制备抗Kv4.3抗体.MAP由4条相同的17肽段连接成锥形结构分子.以MAP或MAP与佐剂免疫新西兰白兔,抽提了免疫前血清和免疫后血清,并对抗体的滴度进行评价.MAPs在白兔体内诱导出了效价比为1:1000的抗Kv4.3特异性抗体.
- 邓小云刘宇蔡芳潘乾龙志高夏昆夏家辉张灼华
- 关键词：MAPSWESTERNBLOTTING免疫沉淀
- ATP13A2(PARK9)基因启动子区转录调控元件的鉴定与缺氧调控
- 徐倩张晓洁唐北沙蔡芳宋伟宏
- 小热休克蛋白22基因在腓骨肌萎缩症中的突变分析(英文)被引量：5
- 2005年
- 目的探讨小热休克蛋白22(smallheatshockprotein22,HSP22)基因在中国人腓骨肌萎缩症(CharcotMarieToothdisease,CMT)中的突变特点。方法应用聚合酶链反应和DNA直接测序方法,对1个发现HSP22基因423(G→T)突变的CMT2L家系外的114个CMT家系先证者进行了HSP22基因的突变分析。结果114个先证者中有2例患者在HSP22基因的第3外显子发生了582(C→T)碱基改变,由于编码的氨基酸未改变,均为色氨酸(Thr),为一种同义突变。结论HSP22基因突变在中国人的腓骨肌萎缩症患者中少见,突变率为0.87%(1/115)。
- 张付峰唐北沙赵国华陈彪张成罗巍刘小民夏昆蔡芳胡正茂严新翔张如旭郭鹏
- 关键词：腓骨肌萎缩症基因突变聚合酶链反应氨基酸
- 1例7p21.2→pter部分三体综合征患者及其表型定位研究被引量：3
- 2005年
- 采用人类染色体G显带技术、高分辨显带技术、荧光原位杂交技术 (FISH) ,对一例 7p2 1 .2→pter部分三体综合征患者的染色体进行研究 ,并综合文献报道的 1 4例 7p部分三体综合征的临床资料 ,就 7p部分三体综合征患者的核型与表型的相关关系、核型与疾病基因的相关关系等问题进行探讨。通过 1例染色体 7p2 1 .2→pter部分三体患者的染色体分析、表型定位研究和相关文献复习比较 ,探索染色体区带与表型的关系。结果表明 ,7p2 1 .2→p2 2是 7p部分三体综合征的关键片段 ,生殖器畸形、髋关节脱位与 7p1 5重复有关 ,心脏畸形与 7p多个基因作用有关 ,颅缝早闭基因可能位于 7p2 1 .2→p2 1 .3。
- 梁德生邬玲仟蔡芳夏昆龙志高潘乾戴和平夏家辉
- 实时荧光定量PCR在周围髓鞘蛋白22基因重复或缺失检测中的应用被引量：8
- 2005年
- 目的应用实时荧光定量PCR在腓骨肌萎缩症和遗传性压力易感性神经病患者中检测周围髓鞘蛋白22基因(peripheral myelin protein22,PMP22)重复或缺失。方法采用实时荧光定量PCR检测113个腓骨肌萎缩症家系先证者、4个遗传性压力易感性神经病家系先证者和50名正常人PMP22基因重复或缺失突变。结果113个腓骨肌萎缩症家系中发现有36个存在PMP22基因重复,4个遗传性压力易感性神经病先证者均存在PMP22基因缺失,50名正常人未发现异常。结论我国PMP22基因重复突变的致病频率为31.9%(36/113),PMP22基因缺失突变是遗传性压力易感性神经病常见的致病原因。
- 张付峰唐北沙沈岩赵国华夏昆赵一强陈彪张成潘乾蔡芳刘小民罗巍张如旭郭鹏
- 关键词：实时荧光定量PCR基因重复基因缺失
- 一个中国耳聋家系的SLC26A4基因分析(英文)被引量：5
- 2005年
- 目的确定一个非综合征型耳聋家系的致病基因。方法应用聚合酶链反应直接测序方法,对溶质转运蛋白家族26,成员4(solutecarrierfamily26,member4;SLC26A4)基因的所有外显子及其与内含子交界处进行测序寻找突变。结果在该家系先证者发现SLC26A4基因的N392Y、S448X复合杂合突变,其父亲为S448X的杂合突变,其母亲为N392Y的杂合突变。结论SLC26A4基因的N392Y、S448X复合杂合突变是导致该先证者耳聋发生的原因。
- 胡浩梁德生邬玲仟冯永蔡芳夏昆潘乾龙志高戴和平夏家辉
- 关键词：耳聋家系疾病SLC26A4基因
- Nogo蛋白的羧基端与连接蛋白26相互作用及在小鼠内耳中的表达被引量：4
- 2006年
- 目的筛选和鉴定连接蛋白26(connexin 26 ,CX26)的相互作用蛋白质,并分析其在小鼠耳蜗的表达,探讨CX26在胞内核糖体合成后的运输、装配和在胞膜形成间隙连接的生理过程中可能相关的蛋白质。方法应用酵母双杂交技术筛选CX26的相互作用蛋白质。聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)法扩增正常人GJB2 (CX26)全长编码区,基因重组的方法定向克隆于第3代酵母双杂交系统的诱饵质粒pGBKT7 ,用构建的诱饵pGBKT7/CX26筛选人胎脑cDNA文库,获得CX26的相互作用蛋白质的初步阳性克隆,再用这些克隆分别与CX26酵母双杂交去除假阳性。对阳性克隆的插入子DNA进行测序、生物信息学分析。用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)方法分析相互作用蛋白质编码基因的mRNA在小鼠内耳的表达。结果 1个阳性克隆的插入子DNA全长867 bp,前525 b为编码区。DNA序列及编码读框均与Nogo蛋白的编码基因RTN4的编码区终止密码子前525 bp(包括终止密码子)及终止密码子后非翻译区238 bp完全相同,编码Nogo蛋白的3个异构体Nogo-A、Nogo-B和Nogo-C的羧基端的174个氨基酸残基。RT-PCR分析示RTN4的mRNA在小鼠内耳表达。结论 Nogo蛋白的羧基端与CX26相互作用,Nogo蛋白在内耳表达。Nogo可能参与了CX26蛋白在内耳细胞的转运或间隙连接功能的生理过程。
- 肖自安谢鼎华胡鹏夏昆蔡芳潘乾
- 关键词：连接蛋白26酵母双杂交相互作用蛋白质NOGO蛋白内耳
- 常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征致病基因的突变分析被引量：8
- 2005年
- 目的研究常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征(autosomalrecessiveearly-onsetparkinsonism,AREP)parkin、PINK1及DJ-1基因的突变。方法应用聚合酶链反应、DNA直接测序和限制性核酸内切酶酶切等技术对15个AREP家系进行parkin、PINK1及DJ-1基因的突变分析。结果在3个家系中发现parkin基因3个杂合突变,分别为202-203delAG和新发现的1069-1074delGTGTCC与T1422C突变。在2个家系中发现2个新的PINK1基因突变,分别为C938T及C1474T。未见DJ-1基因突变。3个PARK2家系平均发病年龄(25·2±5·7)岁,临床上肌张力障碍、姿势不稳、腱反射活跃、症状晨轻暮重常见,对多巴制剂反应好,左旋多巴诱导的运动障碍常见;2个PARK6家系平均发病年龄(25·8±10·0)岁,临床特征与PARK2相似,但未见肌张力障碍、姿势不稳及左旋多巴诱导的运动障碍。结论parkin、PINK1基因突变是AREP的常见病因;DJ-1在我国AREP中可能罕见;PARK2和PARK6具有相似临床表现,但均具有临床异质性。
- 严新翔张玉虎郭纪锋李静夏昆蔡芳潘乾龙志高陈涛曹立沈璐江泓赵国华唐北沙
- 关键词：突变分析致病基因限制性核酸内切酶DNA直接测序腱反射活跃多巴制剂
- 中老年人骨髓间质干细胞的生物学特性研究被引量：9
- 2005年
- 目的:研究中老年人骨髓间质干细胞(MSCs)的生物学特性。方法:用Ficoll-Paque分离不 同年龄段供者MSCs体外培养,进行诱导分化,用流式细胞术检测表面标志,核型分析观察细胞染 色体的稳定性,裸鼠实验、软琼脂实验观察致瘤性。结果:中老年人每毫升骨髓分离的单个核细 胞量和MSCs增殖速度与青年人无显著差异;中老年人不同代次的MSCs诱导后具有向成骨细胞 和成脂细胞分化的能力;分离培养的MSCs表达CD44,不表达CD34;传至第10代核型未见异常, 未见致瘤性。结论:中老年人MSCs有较强的体外增殖能力和多向分化潜能,遗传背景稳定。
- 张延洁蔡芳杨一峰梁德生潘乾龙志高邬玲仟戴和平夏昆夏家辉
- 关键词：中老年人骨髓间质干细胞流式细胞术检测多向分化潜能细胞染色体致瘤性
