夏家辉
- 作品数：272 被引量：1,159H指数：16
- 供职机构：中南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学自动化与计算机技术更多>>
- 一种改进的原代神经元的制备方法被引量：5
- 2005年
- 神经元是神经组织的结构和功能单位。从胚胎中分离出神经元时,由于它们在原位组织中完成了分裂和分化,原代培养的神经元将不会分裂、增殖。18d孕龄的SD大鼠胎鼠脑组织中分离原代神经元的过程中,采用了改进的细胞分离方法。分离的原代细胞经免疫荧光实验证实含有大量的神经元。pEGFP质粒转染和细胞免疫荧光实验结果显示,转染的原代神经元中GFP报告基因有较高的表达,这表明,原代培养的神经元适宜于后续实验的进行。在对改进型方法和传统型方法的细胞分离效果比较时,发现改进型方法在消化过程中产生的gDNA絮状物较传统型的少,接种后发现细胞分散均匀,无杂物。所获得的原代细胞的总数比传统型方法多出大约23%。
- 邓小云杨眉蔡芳潘乾龙志高邬玲仟梁德生戴和平夏昆夏家辉张灼华
- 关键词：原代细胞培养神经元细胞
- 随机引物在分子生物学研究中的应用被引量：12
- 1996年
- 随机引物指非特异序列的寡聚核苷酸作为ＤＮＡ合成过程中的引物，是相对于特异引物的概念９０年代它与ＰＣＲ技术结合衍生了几项新技术：采用不同长度随机引物进行ＤＮＡ指纹分析而衍生出的ＲＡＰＤ、ＡＰ－ＰＣＲ及ＤＡＦ方法；进行ｍＲＮＡ多态分析的“差异显示”；以及ｒＰＣＲ，Ｔ－ＰＣＲ等技术．以ＲＡＰＤ为例介绍了随机引物ＰＣＲ的技术特点及其在分子生物学研究中的应用．
- 刘春宇张春玲夏家辉
- 关键词：分子生物学随机引物
- DNA的简单串联重复扩展与遗传病被引量：7
- 1998年
- 目前已知有１７种遗传病或染色体脆性位点是由简单串联重复ＤＮＡ拷贝数增加引起的．本文综述了这些重复扩展的特点。
- 郑多夏家辉
- 关键词：动态突变遗传病
- p11融合蛋白表达、纯化及抗血清的制备被引量：6
- 2002年
- 目的 :表达GST p11和 6xHis p11融合蛋白并制备GST p11特异性抗体。方法 :将人p11基因克隆入两种原核表达载体pGEX 4T 2和pQE30 ,分别在大肠杆菌BL2 1和M15中表达 ,用GlutathioneSepharose 4B和Ni NTAagar ose亲和柱分别纯化目的蛋白。利用纯化的GST p11蛋白制备多克隆抗体。结果 :得到高表达量的融合蛋白 ,经亲和层析柱纯化获得较高纯度的GST p11和 6xHis p11蛋白。以GST p11蛋白免疫新西兰兔得到p11多克隆抗体 ,Westernblotting证实该抗体能够识别 6xHis p11蛋白 ,具有较高特异性。结论 :利用原核表达人p11融合蛋白制备的p11多克隆抗体具有较好的特异性 。
- 谭志平黄亮群郑多房海燕夏昆夏家辉
- 关键词：纯化抗血清
- 一种基于寡核苷酸微阵列芯片的多重可扩增探针杂交技术被引量：4
- 2004年
- 多重可扩增探针杂交技术 (multiplexamplifiableprobehybridization ,MAPH)是近年来发展起来的一种用于基因组中DNA拷贝数检测的新技术。并发展了一种基于寡核苷酸微阵列芯片的MAPH技术。该方法根据所检测的DNA序列 ,制备若干具有通用引物的PCR产物作为可扩增探针组 ,与固定在尼龙膜上待测的基因组DNA杂交。用磁珠回收特异性杂交的探针 ,经生物素标记的通用引物扩增后 ,与相应的寡核苷酸微阵列芯片杂交。该特异性的寡核苷酸微阵列芯片包括 10个抗肌营养不良基因的外显子探针和阴性、阳性探针。杂交清冼后 ,链霉亲和素 Cy3染色用芯片扫描仪得到杂交的荧光图像。分析荧光信号的强度差异给出特定基因片段拷贝数的变化。该方法用微阵列技术代替MAPH中的电泳检测技术 ,可大幅度增加检测的通量。选择了一个正常男性、一个正常女性和一个肌营养不良症患者的基因组DNA来进行验证。结果表明 。
- 刘和平王宏陆祖宏刘小平夏昆夏家辉
- 关键词：DMD/BMD多重PCR
- 应用荧光标记基因分型对中国汉族人群进行遗传多态性研究
- 2002年
- 目的 :为了确定我国汉族人群遗传多态性片段大小范围与法国人群的差异 ,更好的进行基因组扫描和个体识别等方面研究。方法 :4 0 0个微卫星位点分别在 32个反应管中进行扩增。在 5 μl反应体系中加 6～ 17对PCR引物 ,多个微卫星位点同时扩增 ,产物在ABI377XLDNA测序仪上进行电泳。结果 :4 0 0个微卫星位点共有 30 6个有满意的结果 ,其中 12 4个微卫星位点与法国CEPH家系存在片段范围的差异。结论 :遗传多态性片段大小范围在种族间存在较大差异 ;在对中国汉族人群进行基因分型时 ,应在Genethon提供的范围基础上向两侧各扩大 10bp。
- 邓昊陆春叶张华莉何云贵戴和平潘乾邓汉湘夏家辉
- 关键词：多重PCR基因组扫描基因分型中国汉族人群遗传多态性
- 神经丝轻链基因在腓骨肌萎缩症中的突变分析被引量：4
- 2003年
- 目的 探讨神经丝轻链基因 (neurofilament lightgene ,NF L)在中国人腓骨肌萎缩症 (Charcot Marie Toothdisease ,CMT)中的突变特点。方法 应用聚合酶链反应 单链构象多态性技术结合DNA序列分析方法 ,对 3 2个来自全国 5省汉族的CMT家系先证者进行了NF L基因的突变分析。结果 3 2例先证者中只有 1例患者出现异常条带 ,经DNA测序证实该患者在NF L基因的外显子 3发生了 13 2 9C→T碱基改变 ,由于编码的氨基酸未改变 ,均为酪氨酸 (Tyr) ,为一种同义突变。结论 NF L基因突变可能在中国人的腓骨肌萎缩症患者中少见。
- 罗巍唐北沙赵国华李崎萧剑锋杨期东夏家辉
- 关键词：腓骨肌萎缩症突变分析
- 细胞裂解法对植入前诊断中聚合酶链反应扩增效率的影响被引量：1
- 2002年
- 目的 :探讨优化细胞裂解条件 ,提高植入前诊断中聚合酶链反应的扩增效率。方法 :吸取单个淋巴细胞或人胚胎单卵裂球 ,用碱裂解液、蛋白酶K裂解液和改良的蛋白酶K裂解液进行处理 ,随后以巢式 -聚合酶链反应扩增人肾上腺脑白质营养不良基因 (ALD基因 )的 3号外显子 ,比较其扩增效率。结果 :三种裂解液组对人淋巴细胞的扩增效率分别为 90 % ,74 % ,87% ,对人单卵裂球的扩增效率分别为 98% ,77% ,96 %。结论 :在植入前诊断中 。
- 李崎马燕琳潘乾夏家辉戴和平夏昆
- 关键词：植入前诊断聚合酶链反应
- 一个新的蛋白激酶基因DYRK3的克隆及其特征分析被引量：2
- 1998年
- 目的分离一个与人的蛋白激酶ＤＹＲＫ２高度同源新的蛋白激酶的全长ｃＤＮＡ，并推测其分类和功能。方法应用与人的蛋白激酶ＤＹＲＫ２高度同源的３′端部分ｃＤＮＡ序列为探针，筛选ｃＤＮＡ文库和ｇＤＮＡ文库，并进行氨基酸序列同源性分析和ＦＩＳＨ定位。结果从人的骨骼肌ｃＤＮＡ文库和睾丸ｃＤ－ＮＡ文库各分离到一个新的蛋白激酶的全长ｃＤＮＡ。骨骼肌来源的ｃＤＮＡ编码５８８个氨基酸的蛋白质，睾丸来源的ｃＤＮＡ编码５６８个氨基酸的蛋白质，前者第２７个氨基酸以后的序列与后者第７个氨基酸以后的序列完全一致。结论推测这两个ｃＤＮＡ是同一基因在骨骼肌组织和睾丸组织中的不同剪接本。由于该基因与人的ＤＹＲＫ２高度同源，故称之为ＤＹＲＫ３基因。ＤＹＲＫ３与丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶酵母Ｙａｋ１，人和果蝇的Ｍｎｂ，人的Ｃｌｋ１等有较高的同源性，也与人的Ｃｄｋ２等其它丝氨酸／苏氨酸激酶有同源性。作者认为ＤＹＲＫ３是属于丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶ＣＭＧＣ组Ｃｌｋ家族新的一员。该基因定位在１ｑ３２。
- 夏家辉杨新平阮庆国潘乾刘春宇谢微邓汉湘
- 关键词：蛋白激酶CDNA基因克隆
- 严重遗传病产前筛查和诊断新技术体系的创建与临床应用
- 邬玲仟梁德生夏昆夏家辉张建光潘乾龙志高高扬
- 产前筛查与诊断避免严重遗传病患儿出生最有效的方法，该项目创建了覆盖90%严重致愚、致残、致死性遗传病的产前筛查与诊断新技术体系及全国应用网络，显著提升中国该领域的自主创新和核心竞争力。完成了来自全国严重疑难遗传病患者诊断...
- 关键词：
- 关键词：染色体病
