苏幼红
- 作品数：12 被引量：40H指数：5
- 供职机构：新疆大学生命科学与技术学院生物资源基因工程重点实验室更多>>
- 发文基金：新疆生物资源基因工程重点实验室开放基金博士科研启动基金自治区科技支疆项目计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学轻工技术与工程生物学更多>>
- 羟基红花黄色素A人工抗原两种制备方法的比较被引量：3
- 2008年
- 目的:对过碘酸钠法和直接法制备的羟基红花黄色素A全抗原进行比较,以期获取理想的羟A人工抗原。方法:通过透析液的颜色变化、紫外扫描、红外扫描及动物免疫试验等比较两种方法合成的人工抗原特点。结果:两种方法制备的人工抗原在紫外扫描中都有蛋白的特征吸收峰,只是受偶联基团的影响特征峰都蓝移到275nm附近,但是直接法的400nm处羟A特征峰保留,过碘酸钠法的消失。对直接法的偶联物进行红外扫描,显示羟A特征官能团的吸收峰和蛋白的特征吸收峰。过碘酸钠法的经过五免老鼠仍然监测不到针对羟A的特异性抗体,用直接法的免疫抗原继续免疫二次产生了抗羟A的特异性抗体,三免血清效价达1:3200;用直接法的免疫两只新西兰大白兔六免抗HSYA抗体效价达1:3200以上。结论:直接法适合制备羟A人工抗原,可以为后续研究奠定可靠的前提条件。
- 侯世斌吕芳苏幼红李江伟张富春
- 关键词：羟基红花黄色素A人工抗原间接ELISA
- 新疆双峰驼抗血清中重链抗体的分离鉴定被引量：7
- 2010年
- 【目的】初步探讨新疆双峰驼Camelus bactrianus免疫系统中缺失轻链的重链抗体(heavy chain antibody,HCAb)是否具有常规抗体的基本抗原结合功能。【方法】采用本实验室构建的丹毒丝菌表面蛋白A原核表达载体pGEX4T-1-spaA-N,进行诱导表达,纯化获得重组抗原GST-SpaA-N,免疫双峰驼制备抗血清,经Protein A和Protein G亲和层析从抗血清中分离重链抗体及常规抗体,Western blotting鉴定重链抗体的抗原结合特性,间接ELISA比较重链抗体与传统抗体的抗原结合活性。【结果】经过Protein A/G纯化得到了IgG2。对各组分进行分析初步表明重链抗体约占血清IgG的60%—80%。采用GST-SpaA-N免疫双峰驼可以诱导高滴度的IgG2型重链抗体,在5次免疫后,骆驼抗spaA-N特异的重链抗体IgG2多抗血清的效价为1﹕51200。Western blotting结果显示分离的多克隆重链抗体可特异结合SpaA天然抗原,且ELISA分析结果表明重链抗体与常规抗体具有相同的抗原结合活性。【结论】首次从双峰驼抗血清中成功分离获得具有与常规抗体相同生物学功能的多克隆重链抗体,提示重链抗体可能在骆驼免疫防御中发挥重要作用。
- 夏丽洁苏幼红张清华夏雪琴刘红春李江伟
- 关键词：双峰驼
- 人乳头瘤病毒L1基因与丹毒丝菌SpaA-N优势抗原表位序列的嵌合重组质粒构建及活性鉴定
- 2011年
- 为确定丹毒丝菌表面保护性抗原A的N-末端(SpaA-N)优势抗原表位,研发新型表位DNA嵌合疫苗,利用生物信息学软件对丹毒丝菌SpaA-N的优势B细胞抗原表位进行预测,以重叠PCR将优势表位插入人乳头瘤病毒16型的主要衣壳蛋白(HPV-16 L1)HI环结构的编码序列中,构建获得重组嵌合质粒pcDNA3-HPV-L1-ΔspaA。该重组质粒经体内、外瞬时转染后,RT-PCR均扩增获得了1 500 bp左右的目的片段。免疫印迹试验显示,体外转染嵌合质粒的细胞总蛋白能够与GST-SpaA-N重组蛋白免疫血清在56 kD处产生特异性结合。ELISA分析显示嵌合质粒可在小鼠体内产生差异显著的特异性抗体(P<0.01),抗体滴度为1∶1 000。此外,pcDNA3-HPV-L1-ΔspaA制备的抗血清至少可在1∶10稀释度条件下,介导外源补体对半数以上的菌体进行杀伤。该研究表明,获得的SpaA-N表位DNA嵌合疫苗具有免疫活性,为研发安全有效的丹毒丝菌新型DNA疫苗提供了一个新思路。
- 庆格乐图杨薇薇晏鹏飞苏幼红李江伟
- 关键词：表位预测HPV-16
- 羟基红花黄色素A人工抗原的制备被引量：11
- 2008年
- 目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)的偶联方法,获得具有免疫原性的羟基红花黄色素A人工抗原。方法通过偶联物透析液的颜色变化、紫外图谱、红外扫描图谱及动物免疫试验来鉴定制备的人工抗原。结果HSYA-BSA人工抗原在紫外扫描中表现出HSYA和BSA的特征吸收峰;在红外扫描中HSYA-BSA具有HSYA特征官能团的吸收峰和氨基酸的特征吸收峰;间接ELISA检测结果显示产生抗HSYA的特异性抗体,血清效价可达1∶3 200;标准曲线方程计算得BSA和HSYA的结合率是1∶50。结论通过直接偶联法成功制备出具有免疫原性的羟基红花黄色素A人工抗原。
- 侯世斌李江伟苏幼红吕芳张富春
- 关键词：羟基红花黄色素A人工抗原间接ELISA
- 骆驼来源单域抗体在免疫治疗中的研究进展被引量：5
- 2010年
- 近几年多种单克隆抗体药物已成功上市并用于治疗人类多种疾病,但因单克隆抗体的复杂结构和高昂的生产成本,限制了其在临床上的广泛应用。随着生物技术的进步,使抗体朝着小型化的基因工程单域抗体发展。20世纪末,在骆驼科动物(camelidae)和护士鲨(nurse shark)体内发现一种天然缺失轻链的重链抗体(heavy chain antibody,HCAb),这种特殊抗体的抗原结合位点仅由单一结构域构成。该结构域在骆驼中称为VHH,经基因重组修饰易于进行工程表达,产物即称为VHH单域抗体,具有分子量小,可溶性好,稳定性高及组织穿透力强等优势,在调节免疫功能方面的应用前景更加广阔。就目前国际上对骆驼来源的VHH单域抗体在免疫治疗应用研究的进展情况进行综述,为基因工程单域抗体改造提供新思路。
- 苏幼红李江伟
- 关键词：免疫治疗
- 植物活性成分对表观遗传调节的研究概况被引量：8
- 2008年
- 表观遗传学是以不改变基因DNA序列编码的方式来改变遗传基因表达的一种遗传方式,主要涉及DNA甲基化作用的改变、RNA沉默、染色质组蛋白的修饰作用、基因印记。长期以来人们一直认为基因突变参与肿瘤的形成,近年来越来越多的证据表明,肿瘤的形成会受到遗传学修饰和表观遗传修饰的影响,因此表观遗传修饰在肿瘤进展中同样具有非常重要的作用。DNA甲基转移酶(DNMT)抑制剂和组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂可通过对表观遗传学进行调节达到治疗癌症的目的,然而这些药物因骨髓抑制作用及其他副作用在临床应用受到限制。植物活性成分的遗传毒性不明显,在抗癌、抗突变方面有独特的优势和广阔的应用前景。对有关具有表观遗传调节作用的植物活性成分的研究进行综述,并概述了植物活性成分与肿瘤表观遗传学修饰机制关系的近期研究情况。
- 吕芳苏幼红张富春李江伟
- 关键词：植物活性成分抗肿瘤作用
- 抗羟基红花黄色素A抗血清的制备被引量：2
- 2009年
- 目的:通过人工抗原的构建,制备抗羟基红花黄色素A(HSYA)的特异性抗血清。方法:采用直接合成法将HSYA与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)的共价偶联,分别合成免疫抗原HSYA-BSA和包被抗原HSYA-OVA,并进行相关鉴定;用合成的人工抗原免疫家兔,制得抗羟基红花黄色素A的特异性抗血清,采用酶联免疫法鉴定。结果:根据建立的标准曲线方程计算得HSYA和BSA的结合比是50:1,HSYA和OVA的结合比是112.8:1;理想的包被抗原的浓度为4μg/ml,抗血清和二抗的工作浓度分别为1:200和1:2000;交叉反应实验表明,该抗体与芦丁、金合欢素的反应率均接近于零;亲和性实验结果表明,在0.25～2μg/ml浓度范围内,抑制率与浓度呈线性关系,线性回归方程为y=-16.213lgx+102.47(r=0.9575),抑制中浓度IC50为1.5μg/ml,最低检测限为0.250μg/ml。结论:通过直接偶联法可以成功制备出具有抗羟基红花黄色素A的特异性抗血清。
- 侯世斌吕芳苏幼红张富春李江伟
- 关键词：羟基红花黄色素A半抗原抗血清酶联免疫吸附测定
- 猪丹毒丝菌C43150株表面保护性抗原A的免疫功能区分析被引量：6
- 2010年
- 【目的】确定丹毒丝菌新疆分离株C43150表面保护性抗原A(SpaA)中起免疫保护作用的主要区段。【方法】PCR扩增SpaA氨基端(spaA-N)和羧基端(spaA-C)基因片段,测序鉴定正确后,克隆至pGEX4T-1原核表达载体,以IPTG诱导表达重组蛋白r-SpaA-N及r-SpaA-C,表达产物经亲和层析柱纯化后,免疫小鼠制备抗血清,Western Blot及ELISA检测重组蛋白的免疫反应性,最后分别从主动和被动免疫两方面分析r-SpaA-N及r-SpaA-C对小鼠的免疫保护活性。【结果】Western Blot结果表明抗r-SpaA-N及r-SpaA-C小鼠血清均能与天然的SpaA在64 kDa处特异性结合,ELISA检测也表明重组表达和纯化的融合蛋白都具有免疫原性,但小鼠免疫保护实验显示只有r-SpaA-N对攻毒小鼠保护作用显著(P<0.01)。【结论】丹毒丝菌新疆分离株C43150表面保护性蛋白A起主要保护功能的核心区段为氨基端,且是由抗体介导的免疫保护。
- 晏鹏飞苏幼红赵银霞庆格乐图李江伟
- 关键词：免疫保护
- 采用亲和层析结合制备凝胶电泳获得高纯度的重组抗原蛋白用于制备蛋白质芯片被引量：1
- 2008年
- 为了得到制备抗原芯片所需的高纯度重组抗原蛋白,需要建立一套适合于多种重组抗原表达和纯化的技术路线.采用了亲和层析结合制备胶电泳的方法,对16种用于构建蛋白质芯片的食管癌相关抗原基因进行了克隆重组并在大肠杆菌中进行了表达.对高表达的重组蛋白首先制备包涵体,然后采用Ni-Sepharose亲和层析得到初步纯化的蛋白质,最后使用SDS-PAGE制备胶电泳作进一步纯化.经过透析复性后,用于制备蛋白质芯片.采用亲和层析纯化重组蛋白,得率为71%,纯度约为70%;在SDS-PAGE制备胶进一步纯化后,得率为32%,纯度为95%,经过透析和复性后,最终得率为21%,纯度为95%.得到的重组蛋白RPS4在ELISA检测中可以和血清中识别RPS4的自身抗体起反应,并且,采用精纯抗原制备的蛋白质芯片,在检测抗原与抗体这一对反应中也具有较高的敏感性和特异性,适合大规模血清抗体的检测.研究表明,采用亲和层析结合制备凝胶电泳纯化抗原蛋白,是一条简便快捷,适合需要量不大,但对纯度要求比较高的蛋白质芯片制备的技术路线.
- 李江伟冉宇靓李国惠胡海刘军吕芳苏幼红孙立新杨治华
- 关键词：制备电泳肿瘤抗原蛋白质芯片
- 一种基于免疫印迹的高通量肿瘤相关抗原筛选和鉴定方法
- 2008年
- 目的:为了分析SEREX抗原克隆在异体食管癌患者血清中和健康对照人血清中的反应情况,我们发展了一种基于免疫印迹的高通量肿瘤相关抗原筛选和鉴定方法。方法:采用新发展的基于免疫印迹原理的抗原克隆微阵列检测方法与传统的噬菌斑检测法对食管癌患者血清中IgG的反应情况进行了比较,并采用两种方法分析了两个SEREX阳性克隆与40例食管癌患者血清和40例健康人血清中的IgG的阳性反应率。通过ELISA对两种方法得到的结果进行了验证。结果:两个阳性克隆在两种检测方法中均与同一例食管癌病人血清起反应,采用抗原克隆微阵列检测方法检测p53和rps3两个克隆阳性率分别为25%和37.5%,采用噬菌斑检测法检测p53和rps3两个克隆阳性率分别为27.5%和37.5%;ELISA方法检测p53和rps3两个克隆阳性率分别为25.0%和31.25%。结论:本研究采用两种方法检测患者血清IgG反应的结果是一致的,抗原克隆微阵列检测方法可以代替传统的噬菌斑筛选法。
- 李江伟苏幼红杨薇薇晏鹏飞赵银霞
- 关键词：ELISA体液免疫
