晏鹏飞
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
- 供职机构：新疆大学生命科学与技术学院生物资源基因工程重点实验室更多>>
- 发文基金：新疆维吾尔自治区高校科研计划新疆生物资源基因工程重点实验室开放基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 猪丹毒丝菌SpaA蛋白的功能区分析及其抗原表位嵌合质粒的构建
- 丹毒丝菌是专性厌氧的革兰氏阳性菌,在世界各地均有分布,是猪丹毒的感染源。丹毒丝菌属主要包括两个种,红斑丹毒丝菌（E. rhusiopathiae）和扁桃体丹毒丝菌（E. tonsillarum）,其中仅红斑丹毒丝菌（俗称...
- 晏鹏飞
- 关键词：红斑丹毒丝菌表位预测
- 文献传递
- 采用环介导等温扩增技术快速检测猪丹毒丝菌病原体被引量：2
- 2012年
- [目的]建立猪丹毒丝菌(E.rhusiopathiae)毒力株的快速检测方法。[方法]利用快速灵敏的环介导等温扩增技术(Loop-mediated Isothermal amplification,LAMP)针对丹毒丝菌spa基因较为保守区域设计4条特异性LAMP引物,采用FTA(Flinders technology associates,FTA)滤膜法提取12种血清型丹毒丝菌,8种非丹毒丝菌及受感染小鼠血液的基因组DNA,分析LAMP环引物的特异性;比较LAMP与传统PCR方法的扩增敏感性和产物特异性。[结果]在61℃恒温条件下,LAMP法能够特异性扩增丹毒丝菌特异条带,与常规PCR扩增结果一致;灵敏度实验表明LAMP法检测猪丹毒丝菌的检测下限为2 CFU/mL,较传统PCR的敏感性(大于20 CFU/mL)至少高10倍。LAMP方法与PCR方法都能在小鼠感染模型血样中检测到浓度为200 CFU(10^(-7))/mL以上浓度的丹毒丝菌。[结论]LAMP法与FTA滤膜法相结合在检测丹毒丝菌中具有潜在的应用价值。
- 克力比努尔.热合曼杨春静晏鹏飞李江伟
- 关键词：FTA
- 人乳头瘤病毒L1基因与丹毒丝菌SpaA-N优势抗原表位序列的嵌合重组质粒构建及活性鉴定
- 2011年
- 为确定丹毒丝菌表面保护性抗原A的N-末端(SpaA-N)优势抗原表位,研发新型表位DNA嵌合疫苗,利用生物信息学软件对丹毒丝菌SpaA-N的优势B细胞抗原表位进行预测,以重叠PCR将优势表位插入人乳头瘤病毒16型的主要衣壳蛋白(HPV-16 L1)HI环结构的编码序列中,构建获得重组嵌合质粒pcDNA3-HPV-L1-ΔspaA。该重组质粒经体内、外瞬时转染后,RT-PCR均扩增获得了1 500 bp左右的目的片段。免疫印迹试验显示,体外转染嵌合质粒的细胞总蛋白能够与GST-SpaA-N重组蛋白免疫血清在56 kD处产生特异性结合。ELISA分析显示嵌合质粒可在小鼠体内产生差异显著的特异性抗体(P<0.01),抗体滴度为1∶1 000。此外,pcDNA3-HPV-L1-ΔspaA制备的抗血清至少可在1∶10稀释度条件下,介导外源补体对半数以上的菌体进行杀伤。该研究表明,获得的SpaA-N表位DNA嵌合疫苗具有免疫活性,为研发安全有效的丹毒丝菌新型DNA疫苗提供了一个新思路。
- 庆格乐图杨薇薇晏鹏飞苏幼红李江伟
- 关键词：表位预测HPV-16
- 一种基于免疫印迹的高通量肿瘤相关抗原筛选和鉴定方法
- 2008年
- 目的:为了分析SEREX抗原克隆在异体食管癌患者血清中和健康对照人血清中的反应情况,我们发展了一种基于免疫印迹的高通量肿瘤相关抗原筛选和鉴定方法。方法:采用新发展的基于免疫印迹原理的抗原克隆微阵列检测方法与传统的噬菌斑检测法对食管癌患者血清中IgG的反应情况进行了比较,并采用两种方法分析了两个SEREX阳性克隆与40例食管癌患者血清和40例健康人血清中的IgG的阳性反应率。通过ELISA对两种方法得到的结果进行了验证。结果:两个阳性克隆在两种检测方法中均与同一例食管癌病人血清起反应,采用抗原克隆微阵列检测方法检测p53和rps3两个克隆阳性率分别为25%和37.5%,采用噬菌斑检测法检测p53和rps3两个克隆阳性率分别为27.5%和37.5%;ELISA方法检测p53和rps3两个克隆阳性率分别为25.0%和31.25%。结论:本研究采用两种方法检测患者血清IgG反应的结果是一致的,抗原克隆微阵列检测方法可以代替传统的噬菌斑筛选法。
- 李江伟苏幼红杨薇薇晏鹏飞赵银霞
- 关键词：ELISA体液免疫
- 采用双峰驼重链抗体特异的抗血清检测不同抗原免疫骆驼过程中血清重链抗体的水平被引量：2
- 2012年
- 为了探究重链抗体在骆驼免疫保护中的生物学作用,本研究利用Protein G和Protein A亲和层析纯化新疆双峰驼血清中总IgG和重链抗体IgG2,并免疫昆明小白鼠制备抗双峰驼总IgG和抗双峰驼重链抗体IgG2的多抗血清;通过ELISA检测双峰驼在体液免疫应答过程中针对spaA-N、溶菌酶和蒜氨酸酶3种抗原的重链抗体的滴度变化。结果从新疆双峰驼血清中亲和层析纯化出天然重链抗体IgG2,蛋白质分子质量约为46ku;免疫昆明小白鼠后获得抗双峰驼总IgG多抗血清的效价为1∶204800,抗双峰驼重链抗体IgG2多抗血清的效价为1∶6400。在spaA-N免疫骆驼诱导的体液免疫应答过程中,重链抗体IgG2出现延迟反应。3种蛋白均能诱导抗原特异的IgG2亚类重链抗体的产生。
- 夏丽洁苏幼红晏鹏飞刘丽李江伟
- 猪丹毒丝菌C43150株表面保护性抗原A的免疫功能区分析被引量：6
- 2010年
- 【目的】确定丹毒丝菌新疆分离株C43150表面保护性抗原A(SpaA)中起免疫保护作用的主要区段。【方法】PCR扩增SpaA氨基端(spaA-N)和羧基端(spaA-C)基因片段,测序鉴定正确后,克隆至pGEX4T-1原核表达载体,以IPTG诱导表达重组蛋白r-SpaA-N及r-SpaA-C,表达产物经亲和层析柱纯化后,免疫小鼠制备抗血清,Western Blot及ELISA检测重组蛋白的免疫反应性,最后分别从主动和被动免疫两方面分析r-SpaA-N及r-SpaA-C对小鼠的免疫保护活性。【结果】Western Blot结果表明抗r-SpaA-N及r-SpaA-C小鼠血清均能与天然的SpaA在64 kDa处特异性结合,ELISA检测也表明重组表达和纯化的融合蛋白都具有免疫原性,但小鼠免疫保护实验显示只有r-SpaA-N对攻毒小鼠保护作用显著(P<0.01)。【结论】丹毒丝菌新疆分离株C43150表面保护性蛋白A起主要保护功能的核心区段为氨基端,且是由抗体介导的免疫保护。
- 晏鹏飞苏幼红赵银霞庆格乐图李江伟
- 关键词：免疫保护
