石长信
- 作品数：11 被引量：51H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 5型腺病毒载体的改建被引量：2
- 1999年
- 腺病毒载体是一个良好的真核表达载体，已有多种外源基因在５型腺病毒载体得到表达。病毒学研究所形态室八十年代中期从国外引进了Ｅ３区缺失的５型腺病毒载体，并应用该载体表达了Ｂ组轮状病毒第５基因和乙型肝炎表面抗原基因，在使用过程中发现该载体有以下缺点，１．载...
- 石长信周伟温乐英洪涛
- 关键词：腺病毒Β-半乳糖苷酶
- G1型轮状病毒中和抗原VP7基因变异特点被引量：7
- 2001年
- 目的 研究我国G1型轮状病毒主要中和抗原VP7基因的变异特点。方法 对 1988～1998年收集自北京、沈阳、新乡、上海、深圳、广州、重庆等 7个城市的 2 3份G1型轮状病毒毒株VP7cDNA序列进行测定 ,并结合核酸电泳带型和G1型单抗的ELISA检测结果分析VP7基因的变异特点。结果 我国G1型轮状病毒VP7变异有一定规律 ,主要集中在aa41、49、5 7、65、68、74、94、97、147、170、2 17、2 18、2 68、2 81、2 91,即VR3～ 5、VR7～ 8以及多肽C端的部分区域内。各地区之间没有明显差别 ,虽然随时间不同个别氨基酸可能发生替换 ,但仍同属Jpn 417支系 ;aa91位可能参与构成G1型VP7的抗原表位 ,某些位点的氨基酸变异可能与核酸带型改变有关。结论 在研制疫苗时 ,应采用基因和抗原性具有代表性的近期毒株 。
- 徐倏燊王健伟温乐英石长信张忠浩夏绍源何雅青李宁岳汉军洪涛
- 关键词：轮状病毒基因变异
- 7型腺病毒疫苗株序列测定及其六邻体特性分析被引量：4
- 2003年
- 目的 完成7型腺病毒疫苗株(Ad7v)的全序列测定并阐明其六邻体特征。方法 克隆Ad7v基因组17.5-68.0 mu片段,应用Sanger双脱氧法进行DNA序列测定,将编码六邻体蛋白的核苷酸序列输入GenBank数据库中,获得录入号为AF515814。用CLUSTAL.V软件比较Ad7v与其他亚组及同一亚组腺病毒的六邻体蛋白的同源性,分析其抗原性的差异,同时用RasMo12.71软件预测Ad7v六邻体三维结构。结果Ad7v 17.5-68.0 mu由17 596个碱基组成。这段基因r链主要编码晚期基因L1、L2和L3,L链编码E2的一部分。六邻体编码多肽位于L3区,由934个氨基酸残基组成,与其他9个已知的六邻体蛋白序列进行多序列同源性比较,发现Ad7疫苗株与其他亚组腺病毒的同源性为86.8％(Ad4)-78.5％(Ad5)。在同一亚组中,Ad7疫苗株与Ad3同源性最高,高达95.1％。可变序列主要集中在7个高变区(HVRs),根据Ad2六邻体三维结构模型预测Ad7六邻体三维结构,发现可变区大部分位于六邻体顶端的Ⅰ1和Ⅰ2环中。结论 完成了Ad7v的全序列分析,其六邻体序列与Ad5、Ad2等其他亚组病毒有很大差异,这一结果为构建新型腺病毒载体打下了基础。
- 姜秀丽王健伟温乐英石长信洪涛
- 关键词：基因治疗DNA序列氨基酸
- 7型腺病毒疫苗株基因克隆及其右侧末端Sma ⅠH片段的核苷酸序列分析被引量：3
- 1998年
- 目的获得７型腺病毒（Ａｄ７）载体构建的基本元件，为构建Ａｄ７载体及阐明其基因组一级结构打下基础。方法用改良Ｈｉｒｔｓ法提取Ａｄ７ＤＮＡ，酶切后克隆于质粒载体，克隆了ＸｈｏⅠＡ＋Ｄ片段（１７０－７６５ｍｕ）、Ｄ片段（１７０－２２９ｍｕ）、Ｅ片段（１０８－１４１ｍｕ）、Ｆ＋Ｇ片段（１４１－１７０ｍｕ）、Ｇ片段（１５８－１７０），用ＥｃｏＲⅠ＋ＸｈｏⅠ双酶切，克隆了７６５－８７ｍｕ，用ＳａｍⅠ＋ＥｃｏＲⅠ双酶切，克隆了８７０－９７４ｍｕ。用腺病毒ＤＮＡ做为模板测定了Ａｄ７疫苗株右侧末端ＳｍａⅠＨ片段（９７４－１００ｍｕ）核酸苷序列，根据所测序列设计引物，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）获得右侧末端，并对其再次测序证实。结果建立了Ａｄ７疫苗株部分基因文库（１０８－１００ｍｕ），完成Ａｄ７疫苗株ＳｍａⅠＨ片段核苷酸序列。结论这一结果为阐明Ａｄ７基因组一级结构及构建Ａｄ７载体奠定了基础。
- 周杰昊屈建国石长信彭瑚洪涛
- 关键词：7型腺病毒核苷酸PCR
- 7型腺病毒疫苗株87mu-97.4mu片段核苷酸序列分析被引量：3
- 1998年
- 目的获得７型腺病毒（Ａｄ７）疫苗株８７ｍｕ－９７．４ｍｕ核苷酸序列，分析该区段的基因结构和功能。方法应用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧法进行核苷酸序列分析。结果Ａｄ７疫苗株８７ｍｕ－９７．４ｍｕ全长３６９８个核苷酸，推测编码纤维蛋白（３２５个氨基酸）和Ｅ３区１５．４ｋＤ蛋白，Ｅ４区５个蛋白（ＯＲＦ１４．２，ＯＲＦ１５．７，ＯＲＦ８．１，ＯＲＦ４２．８和ＯＲＦ１０．３）。
- 周杰昊屈建国石长信彭瑚洪涛
- 关键词：腺病毒7型腺病毒克隆核苷酸
- 7型腺病毒疫苗株载体的构建及β-半乳糖苷酶基因的表达被引量：1
- 1998年
- 目的构建Ｅ３区缺失的７型腺病毒疫苗株（Ａｄ７ｖ）载体并表达β半乳糖苷酶基因。方法从人二倍体细胞Ｗ１３８培养的Ａｄ７ｖ中分离病毒ＤＮＡ，利用Ａｄ７ｖＤＮＡ天然的酶切位点，经过多步亚克隆，克隆的同时将Ｅ３区７８８８７ｍｕ片段缺失，并将多克隆酶切位点带入Ａｄ７ｖ载体。为了验证载体的功能，将带有巨细胞病毒（ＣＭＶ）早期启动子β半乳糖苷酶基因插入缺失的Ｅ３区。将这一重组质粒和ＥｃｏＲⅠ酶切Ａｄ７ｖＤＮＡ共转染２９３细胞，获得表达β半乳糖苷酶重组病毒。结果构建了缺失部分Ｅ３区Ａｄ７ｖ载体，在ＣＭＶ启动子的作用下该载体能有效地表达外源基因。
- 石长信温乐英周伟周杰昊刘树强屈建国洪涛
- 关键词：7型腺病毒Β-半乳糖苷酶
- 中国部分城市A组轮状病毒感染状况调查及VP7血清型分析被引量：24
- 2001年
- 目的 研究我国A组轮状病毒感染状况及VP7血清型分布。方法 利用PAGE电泳检测北京、沈阳、新乡、上海、深圳、广州六个城市 1997和 (或 ) 1998年秋冬季婴幼儿腹泻A组轮状病毒的感染状况 ,并采用RT PCR方法对 4种主要的VP7血清型 (G1、G2、G3和G4型 )进行分型。结果 374份标本中有 181份为轮状病毒阳性 ,检出率 48 4%。各地标本的检出率在 32 %～ 6 3 %之间 ,北京、上海地区两年的检出率基本近似。阳性标本经PCR分型方法鉴定G1、G2、G3和G4型的感染率分别为 89 5 %、6 1%、2 8%和 0。有两例为G1和G2型混合感染 ,另有 1例经测序证实为G9型。各地之间、每年之间RV的流行状况略有差异。结论 G1。
- 徐倏燊温乐英王健伟石长信洪涛张忠浩夏绍源何雅青李宁岳汉军
- 关键词：轮状病毒血清型VP7RT-PCR
- A组轮状病毒外壳蛋白VP4的原核表达被引量：5
- 1996年
- 选用原核表达载体 pGEX2T,该载体表达谷胱苷肽-S 转移酶融合蛋白,将完整的 A 组轮状病毒外壳蛋白(VP4)基因(2359bp)插入 pGEX2T 中,在 SDS-PAGE 上没有明显的表达条带,而将部分 VP4基因[5′端保留1269个碱基(KUVP4 1269)和631个碱基(KUVP4 631)],插入 pGEX2T·在SDS-PAGE 中有明显的表达条带。用 SDS-PAGE 分离的表达产物免疫豚鼠,能产生中和性抗体,表明KUVP4(1269)具有良好的免疫原性,而 KUVP4(631)不具有免疫原性。
- 石长信王长安王湛周伟洪涛
- 关键词：VP4轮状病毒外壳蛋白原核表达抗原病毒
- 7型腺病毒疫苗株DNA左侧17.5mu片段克隆及4.8mu片段核苷酸序列分析
- 1999年
- 目的获得７型腺病毒疫苗株ＤＮＡ左侧０～１７５ｍｕ片段克隆，分析０～４８ｍｕ片段（末端倒置重复序列、包装信号位点和Ｅｌａ区）核苷酸序列。方法从Ａｄ７疫苗株感染的Ａ５４９细胞提取Ａｄ７ＤＮＡ，将其０３～１７５ｍｕ片段克隆到质粒ｐＡｄ７Ｔ，并用自动和银染方法测序。结果获得了Ａｄ７疫苗株左侧１７５ｍｕ片段克隆，测定了左侧１７３７ｂｐ核苷酸序列，其中Ｅｌａ区所编码的６３００、２４０００、２８０００等３个蛋白的ＤＮＡ序列，与Ｇｏｍｅｎ株的同源性分别为９８９％、９７３％和９７５％，推导编码氨基酸的同源性分别为９６６％、９６５％和９６９％。这３个蛋白与Ｇｒｉｄｅｒ株的同源性分别为１００％、９９７％、和９９７％；推导编码氨基酸的同源性分别为１００％、９９１％和９９２％。结论Ａｄ７疫苗株左侧１７３８ｂｐ核苷酸与Ａｄ７Ｇｏｍｅｎ株和Ｇｒｉｄｅｒ株相应片段，具有高度的同源性。
- 石长信刘扬温乐英周伟屈建国王健伟洪涛
- 关键词：7型腺病毒克隆核苷酸
- 乙型肝炎病毒表面抗原S基因在人5型重组腺病毒中的表达及其特性被引量：1
- 1997年
- 从美国Ｗｙｅｔｈ公司引进ｐＡｄ５△Ｅ３载体，将乙型肝炎病毒表面抗原基因（ＨＢＶＳ），ＰｒｅＳ２＋Ｓ，腺病毒晚期表达盒＋ＨＢＶＳ基因插入Ｅ３区，与ＥｃｏＲⅠ消化的Ａｄ５ＤＮＡＡ片段共转染细胞获得重组腺病毒，相应命名为ｒＡｄ５Ｓ，ｒＡｄ５ＭＳ，ｒＡｄ５Ｓ２Ｓ。对所获得的重组病毒进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）分析，证实重组病毒中含有目的基因。用ＥＬＩＳＡ分析了ｒＡｄ５ＭＳ的表达量，其病变细胞和上清液滴度均为１∶４，表明表达产物能分泌到细胞外，而另两株重组病毒ＥＬＩＳＡ为阴性。进一步放射免疫检测表明，三株重组病毒Ｓ抗原皆为阳性，结果说明Ｅ３区启动子能表达外源基因，所构建的腺病毒晚期表达盒能显著提高表达效率。实验还同时探讨了重组病毒表达特性和重组病毒遗传稳定性，并发现只要５型腺病毒ＤＮＡ酶切完全，不分离、纯化ＥｃｏＲⅠ消化的Ａ片段，共转染中也不会出现野毒株背景问题从美国Ｗｙｅｔｈ公司引进ｐＡｄ５△Ｅ３载体，将乙型肝炎病毒表面抗原基因（ＨＢＶＳ），ＰｒｅＳ２＋Ｓ，腺病毒晚期表达盒＋ＨＢＶＳ基因插入Ｅ３区，与ＥｃｏＲⅠ消化的Ａｄ５ＤＮＡＡ片段共转染细胞获得重组腺病毒，相应命名为ｒＡｄ５Ｓ，ｒＡｄ５ＭＳ，ｒＡｄ５Ｓ２Ｓ。对所获?
- 蒋国桥石长信周伟洪涛
- 关键词：腺病毒乙型肝炎病毒病毒抗原基因重组
